Môi trƣờng sử dụng cho nuôi cấy nấm men là môi trƣờng Hansen. Thành phần môi trƣờng: Glucose 50 g/l K2HPO4 3 g/l MgSO4 3 g/l Pepton 3 g/l Agar 20 g/l Nƣớc cất đủ đến 1 lít
Môi trƣờng sử dụng nuôi cấy nấm mốc là môi trƣờng PGA. Thành phần môi trƣờng:
Khoai tây 200 g/l Glucose 20 g/l
Agar 20 g/l
Cách làm môi trƣờng PGA: lấy 200g khoai tây cho vào khoảng 800 ml nƣớc cất đun sôi khoảng 30 phút, lọc lấy nƣớc cho thêm 20g glucose sau đó định mức đến 1 lít. Cho thêm vào 20g agar đun sôi cho agar tan hết sau đó đổ môi trƣờng vào các ống nghiệm, đem hấp ở 121oC trong 20 phút. Sau đó lấy ra làm thạch nghiêng chuẩn bị cho cấy giống.
Nhân giống nấm men
Giống nấm men trƣớc khi đƣa vào lên men cần đƣợc nhân giống để làm tăng sinh khối, tăng hoạt lực sống. môi trƣờng nhân giống nấm men cũng là mội trƣờng nuối cấy nấm men. Ta tiến hành nhân giống qua hai giai đoạn:
Giai đoạn 1: sau khi nấm men đã phát triển trên môi trƣờng thạch nghiêng, cấy giống nấm men vào ống nghiệm có chứa 10 ml môi trƣờng Hansen đã đƣợc hấp tiệt trùng ở 121oC trong 20 phút. Nuôi trong điều kiện nhiệt độ phòng trong 24 giờ. Giai đoạn 2: sau 24 giờ cho toàn bộ giống trong ống nghiệm vào erlen có chứa môi
trƣờng Hansen đã đƣợc hấp tiệt trùng và nuôi cấy ở nhiệt độ phòng, lắc 180 rpm trong vòng 48 giờ.
34 Nhân giống nấm mốc
Thành phần môi trƣờng nhân giống:
Cám 70%
Trấu 29%
Amoni sulfate 1%
Tiến hành: cho 10 ml nƣớc cất thanh trùng vào ống giống, dùng que cấy mài nhẹ lên mặt thạch để tách bào tử, sau đó đổ toàn bộ nƣớc có chứa bào tử vào vào 50 g môi trƣờng nhân giống và trộn kỹ. Sau đó nuôi ở nhiệt độ phòng trong 3 ngày rồi bảo quản ở 40oC [6].