2.2.3.1. Đánh giá tình trạng phát triển thể chất:
- Tính tuổi: Tuổi của trẻ đ−ợc tính theo WHO [61]. Ví dụ : 5 tháng đ−ợc tính kể từ khi trẻ tròn 6 tháng( 6 tháng 0 ngày) đến tr−ớc khi tròn 7 tháng.
- Cân nặng: Dùng cân có độ chính xác 0,1 kg. Số cân đ−ợc ghi theo kg với một số lẻ.
- Qua khám lâm sàng và hỏi bệnh để phát hiện những trẻ mắc các bệnh cấp tính hoặc mạn tính, ghi nhận, h−ớng dẫn điều trị, loại trừ.
- XQ tim phổi : nhằm phát hiện các tr−ờng hợp bệnh tim, phổi (lao phổi, viêm phế quản-phổi, phế quản phế viêm ...) để loại trừ.
2.2.3.2. Xét nghiệm huyết học:
* Tiến hành tại khoa xét nghiệm viện Răng Hàm Mặt Quốc Gia sử dụng máy đếm tế bào tự động Selftaxα của hãng KOHDEN- Nhật.
* Kỹ thuật:
- Lấy 1 ml máu tĩnh mạch cho vào ống chống đông EDTAK3 . Tr−ớc khi đọc cho lên máy lắc đều.
- Qui trình kiểm tra chất l−ợng máy huyết học: Tr−ớc mỗi đợt làm nghiên cứu, máy xét nghiệm đ−ợc chuẩn lại bằng các mẫu chuẩn của hãng KOHDEN (Mức cao, mức trung bình, mức thấp). Mỗi mức chạy 3 lần để kiểm tra độ chuẩn xác và độ chính xác của máy. Tất cả các chỉ số của máy so với kết quả mẫu chuẩn lệch không quá 5%.
2.2.3.3. Xét nghiệm hóa sinh:
a. Địa diểm tiến hành tại khoa sinh hóa viện Nhi Trung Ương với hóa chất của Roche và Greiner.
- Lấy máu xét nghiệm vào buổi sáng khi đói.
- Lấy 3 ml máu tĩnh mạch của bệnh nhân vào ống không có chất chống đông. Sau khi cho vào ly tâm tách lấy huyết thanh để phân tích.
- Máy hóa sinh đ−ợc thực hiện kiểm tra chất l−ợng đúng qui trình. 9 Nguyên lý định l−ợng nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh: (Phản ứng Biuret)
Các liên kết peptid trong phân tử protein phản ứng với ion Cu trong môi tr−ờng kiềm tạo thành phức hợp màu xanh tím, hấp thụ ánh sáng tại b−ớc sóng 540 nm. L−ợng ánh sáng hấp thu bởi phức hợp này tỷ lệ thuận với đậm độ màu tạo thành và tỷ lệ số l−ợng liên kết peptid mà nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh tỷ lệ thuận với liên kết peptid. Do đó nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh tỷ lệ thuận l−ợng ánh sáng hấp thụ.
+ +
9 Nguyên lý định l−ợng nồng độ Albumin trong huyết thanh (Ph−ơng pháp Bromocresol green)
Albumin kết hợp với Bromocresol green tạo phức hợp màu xanh hấp thụ ánh sáng tại b−ớc sóng 600nm. Đậm độ màu tạo thành tỷ lệ thuận với nồng độ albumin trong huyết thanh thử.
9 Nguyên lý định l−ợng nồng độ sắt trong huyết thanh (Ph−ơng pháp đo quang với Ferene):
Trong huyết thanh sắt kết hợp transferin. ở pH 4.5 ion Fe tách khỏi transrerin . Acid ascorbic làm ion Fe thành Fe với thuốc thử Ferene và tạo thành phức hợp màu. Phức hợp màu này hấp thụ ánh sáng tại b−ớc sóng 600nm. Đậm độ màu sắc tỷ lệ thuận với nồng độ sắt trong bệnh phẩm.
+ 3
+
3 2+
9 Nguyên lý định l−ợng nồng độ Ferritin huyết thanh
Ph−ơng pháp miễn dịch hóa phát quang, sử dụng hai kháng thể kháng ferritin. - Kháng thể thứ nhất có trong thuốc thử Lite Reagent là kháng thể đa
dòng của dê kháng Ferritin, đ−ợc đánh dấu bằng acridinium este.
- Kháng thể thứ hai trong pha rắn (silid phase) là kháng thể đơn dòng của chuột kháng ferritin, đ−ợc gắn với các hạt thuận từ (pamagnetic particles).
- Phức hợp kháng thể thứ nhất-Ferritin- kháng thể thứ hai tạo thành sẽ phát quang khi thêm các thuốc thử acid và base
- Nồng độ ferritin trong huyết thanh tỷ lệ thuận với l−ợng ánh sáng phát ra (Relative hight units) và đ−ợc tính toán dựa vào đ−ờng chuẩn.
Sơ đồ đồ định l−ợng ferritin theo ph−ơng pháp hóa phát quang nh− sau:
1. Acridinium Ester 3. Ferritin 2. Kháng thể 1 4. Kháng thể 2
1. Nam châm 2. Phức hợp kháng thể 1 - Ferritin - kháng thể 2 3. Cuvett Nồng độ Ferritin L − ợng á nh sá ng
9 Nguyên lý đo nồng độ Transferrin trong huyết thanh
Đo theo nguyên lý miễn dịch đo độ đục: Transferrin phản ứng với kháng thể đặc hiệu có trong thuốc thử tạo phức hợp kháng nguyên-kháng thể. Dựa vào độ đục của kháng nguyên - kháng thể này mà xác định nồng độ transferrin.
9 Chỉ số bão hòa transferrin(TfS) : Đ−ợc tính theo công thức [59]:
) / ( ) / ( * 100 (%) l mol TIBC l mol Fe TfS μ μ =
2.2.4.Vật liệu và dụng cụ nghiên cứu:
2.2.4.1. Dụng cụ:
α
- Máy đếm tế bào tự động Selftax của hãng KOHDEN- Nhật. - Máy phân tích hóa sinh tự động HITACHI 717.
- Máy phân tích hóa sinh tự động Vitalab Selectra.
- Máy đo miễn dịch hóa phát quang ADVIA Centaur (Siemens). - Máy ly tâm, máy lắc ống máu.
2.2.4.2. Hóa chất và sinh phẩm:
- Hóa chất hãng KOHDEN chạy huyết học. - ống máu chuẩn của hãng KONDEN.
- Hóa chất và huyết thanh chuẩn để định l−ợng ferritin, transferrin của hãng Roche.
- Hóa chất và huyết thanh chuẩn để định l−ợng protein, albumin, sắt, TIBC của hãng Greiner.