- Môi trường nuôi cấy ựược sử dụng là mơi trường MS, có bổ sung các chất như ựường, agar, chất ựiều tiết sinh trưởng: BA có nguồn gốc từ
3.3.2. Bố trắ thắ nghiệm
Các thắ nghiệm ra hoa in vitro ựược bố trắ trên môi trường cơ bản
chứa mơi trường MS, có bổ sung 30 g/l sucrose, 7g/l agar, pH 5.8 hoặc biến ựổi tùy thắ nghiệm.
Môi trường trước khi ựược sử dụng ựể nuôi cấy ựược hấp khử trùng ở 1210C, 1atm trong 20 phút.
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn CRD, mỗi công thức lặp lại 3 lần.Mỗi cơng thức ựược bố trắ với 3 bình mẫu cấy, mỗi bình mẫu cấy 3 chồi hoặc 3 cụm chồi.
Các thắ nghiệm ựược tiến hành theo các bước sau:
Thắ nghiệm 1: Ảnh hưởng của nồng ựộ ựường sucrose ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium.
ChồiDendrobium có chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS0): MS + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT1: MS0 + 15 g ựường CT2: MS0 + 30 g ựường CT3: MS0 + 45 g ựường CT4: MS0 + 60 g ựường
Thắ nghiệm 2: Ảnh hưởng của BA và nước dừa ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium.
ChồiDendrobium có chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT0 (đối chứng) : MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1)
CT1: MS1 + 0,2 mg/l BA + 15% nước dừa CT2: MS1 + 0,5 mg/l BA + 15% nước dừa CT3: MS1 + 1 mg/l BA + 15% nước dừa CT4: MS1 + 2mg/l BA + 15% nước dừa
Thắ nghiệm 3: Ảnh hưởng của PBZ (Paclobutrazol) ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium
ChồiDendrobiumcó chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT0 (đối chứng) : MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1)
CT1: MS1 + 0,1 mg/l PBZ. CT2: MS1 + 0,2 mg/l PBZ CT3: MS1 + 0,5 mg/l PBZ.
CT4: MS1 + 1 mg/l PBZ.
Thắ nghiệm 4: Ảnh hưởng của PBZ và BA ựến ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium.
Chồi Dendrobium có chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT0 (đối chứng): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1)
CT1: MS1 + 0,1 mg/l PBZ + 1mg/l BA. CT2: MS1 + 0,2 mg/l PBZ + 1mg/l BA. CT3: MS1 + 0,5 mg/l PBZ + 1mg/l BA. CT4: MS1 + 1 mg/l PBZ + 1mg/l BA.
Thắ nghiệm 5: Ảnh hưởng của TDZ (Thidiazuron) ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium.
ChồiDendrobium có chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT0 (đối chứng): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1)
CT1: MS1 + 0,1 mg/l TDZ CT2: MS1 + 0,2 mg/l TDZ CT3: MS1 + 0,5 mg/l TDZ CT4: MS1 + 1 mg/l TDZ
Thắ nghiệm 6: Ảnh hưởng của TDZ và PBZ ựến sự sinh trưởng, phát triển và ra hoa in vitro lanDendrobium.
ChồiDendrobiumcó chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi) ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường
CT0 (đối chứng) : MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1) CT1: MS1 + 0,1 mg/l TDZ + 0,5 mg/l PBZ CT2: MS1 + 0,2 mg/l TDZ + 0,5 mg/l PBZ CT3: MS1 + 0,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l PBZ CT4: MS1 + 1 mg/l TDZ + 0,5 mg/l PBZ
Thắ nghiệm 7:Ảnh hưởng của AgNO3ựến sự sinh trưởng, phát triển
và ra hoa in vitro lanDendrobium.
Chồi Dendrobiumcó chiều cao 2 cm, 2-3 lá và cụm chồi (2-3 chồi)
ựược sử dụng bố trắ thắ nghiệm. Môi trường nền (MS1): MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (pH=5.5).
CT0 (đối chứng) : MS + 30 g/l ựường + 30 g/l khoai tây + 30 g/l chuối chắn + 7 g/l agar (MS1) CT1: MS1 + 10 ộM AgNO3 CT2: MS1 + 20 ộM AgNO3 CT3: MS1 + 30 ộM AgNO3 CT4: MS1 + 40 ộM AgNO3 CT5: MS1 + 50 ộM AgNO3