4. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài
2.3.9. Bố trí và tiến hành thí nghiệm
2.3.9.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh ve chó ở hai huyện, thị của tỉnh Thái Nguyên
+ Nghiên cứu tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve ở chó tại một số xã, phƣờng của huyện Phổ Yên và thị xã Sông Công
Tại mỗi huyện, thị chúng tôi tiến hành điều tra tại 4 xã, phƣờng có điều kiện tự nhiên, kinh tế và xã hội khác nhau. Tổng số chó điều tra 256 con chó:
- Tại huyện Phổ Yên, điều tra 224 chó tại xã Thành Công (58 chó), Thuận Thành (49 chó), Phúc Thuận (40 chó) và thị trấn Ba Hàng (56 chó).
- Tại thị xã Sông Công, điều tra 165 chó tại phƣờng Mỏ Chè (49 chó), Bình Sơn (41 chó), Tân Quang (38 chó) và Phố Cò (37 chó).
Tại mỗi xã, phƣờng, xác định tỷ lệ nhiễm ve trung bình, cƣờng độ nhiễm ve min - max ở chó, tính tỷ lệ nhiễm ve trung bình và cƣờng độ nhiễm ve min
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
- max của từng huyện thị để so sánh sự sai khác nhau và tính chung cho cả 2 huyện, thị.
+ Nghiên cứu tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve theo tuổi chó
Chúng tôi tiến hành điều tra 226 con chó, trong đó: chó dƣới 3 tháng tuổi là 48 con, chó từ 3 tháng tuổi đến 1 năm tuổi là 73 con và chó trên 1 năm tuổi là 105 con. Tất cả 226 con chó đƣợc điều tra đều có chung đặc điểm:
- Phƣơng thức nuôi và điều kiện vệ sinh thú y tƣơng đối giống nhau; - Tính biệt đực;
- Giống chó nội;
- Thời gian điều tra từ tháng 4/2011 - 5/2011.
Xác định tỷ lệ nhiễm ve trung bình, cƣờng độ nhiễm ve min - max ở từng độ tuổi chó để so sánh sự sai khác nhau và tính chung cho tất cả các lứa tuổi chó.
+ Nghiên cứu tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve theo tính biệt chó
Điều tra 199 chó: 105 chó đực (Phổ Yên: 58con, Sông Công: 47 con) và 94 chó cái (Phổ Yên: 51 con, Sông Công: 43 con). Tất cả 199 con chó đƣợc điều tra đều có chung đặc điểm:
- Phƣơng thức nuôi và điều kiện vệ sinh thú y tƣơng đối giống nhau; - Lứa tuổi: từ 1 năm tuổi trở lên;
- Giống chó nội;
- Thời gian điều tra từ tháng 4/2011 - 5/2011.
Tính tỷ lệ nhiễm ve trung bình, cƣờng độ nhiễm ve min - max ở chó đực và chó cái để so sánh sự sai khác nhau về tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve theo tính biệt chó.
+ Nghiên cứu tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve theo giống chó
Điều tra 246 chó: 141 chó lai (Phổ Yên: 63 con, Sông Công: 78 con) và 105 chó nội (Phổ Yên: 58con, Sông Công: 47 con). Tất cả 246 con chó đƣợc điều tra đều có chung đặc điểm:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Phƣơng thức nuôi và điều kiện vệ sinh thú y tƣơng đối giống nhau; - Lứa tuổi: từ 1 năm tuổi trở lên;
- Tính biệt đực;
- Thời gian điều tra từ tháng 4/2011 - 5/2011.
Tính tỷ lệ nhiễm ve trung bình, cƣờng độ nhiễm ve min - max ở chó lai và chó nội để so sánh sự sai khác nhau về tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve theo giống chó.
+ Nghiên cứu tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve ở chó theo mùa
Điều tra tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve của chó ở 2 mùa: mùa mƣa (254 chó, đƣợc điều tra từ tháng 4 - 9/2011) và mùa khô (208 chó, đƣợc điều tra từ tháng 10/2010 - 3/2011). Tất cả 462 con chó đƣợc điều tra đều có chung đặc điểm:
- Phƣơng thức nuôi và điều kiện vệ sinh thú y tƣơng đối giống nhau; - Lứa tuổi: từ 1 năm tuổi trở lên;
- Tính biệt đực; - Giống chó nội.
Tính tỷ lệ nhiễm ve trung bình, cƣờng độ nhiễm ve min - max ở chó trong mùa mƣa và mùa khô để so sánh sự sai khác nhau về tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm ve ở chó theo mùa trong năm.
2.3.9.2. Nghiên cứu về lâm sàng bệnh ve ở chó
+ Những biểu hiện lâm sàng chủ yếu của chó bị ve ký sinh
Theo dõi 80 chó bị nhiễm ve ở cƣờng độ nặng, nhẹ khác nhau. Số chó này đƣợc lấy ở 8 xã, phƣờng đƣợc điều tra dịch tễ bệnh ve chó thuộc 2 huyện, thị của tỉnh Thái Nguyên (mỗi xã, phƣờng lấy 10 chó). Tất cả 80 chó có chung đặc điểm:
- Chỉ bị nhiễm ve và không mắc bệnh nào khác; - Lứa tuổi: từ 1 năm tuổi trở lên;
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
Xác định số chó có biểu hiện lâm sàng, tính tỷ lệ chó có biểu hiện lâm sàng và các biểu hiện lâm sàng thƣờng thấy nhƣ: kém ăn, thiếu máu, niêm mạc nhợt nhạt, cơ thể gầy yếu, da lông xù xì, dày lên, có biểu hiện bị kích thích, khó chịu , thƣờng xuyên gãi, gậm, liếm những chỗ bị ve ký sinh.
+ So sánh sự thay đổi một số chỉ số máu và công thức bạch cầu của chó bị ve ký sinh với chó khỏe
- Xét nghiệm máu của chó bị ve ký sinh (15 mẫu) và máu của chó không bị ve ký sinh (15 mẫu).
- Xác định chỉ số máu và công thức bạch cầu của chó bị ve ký sinh và chó khỏe tại bênh viện Đa khoa Trung Ƣơng tỉnh Thái Nguyên.
So sánh sự sai khác về một số chỉ tiêu huyết học và công thức bạch cầu của chó bị ve ký sinh và chó khỏe.
2.3.9.3. Chế và thử nghiệm chiết xuất từ hạt Na và hạt cây Củ đậu trong phòng thí nghiệm
Bắt ve chó thả vào hộp lồng, mỗi hộp thả 10 con có kích thƣớc tƣơng đối đồng đều, khỏe. Hút dịch thuốc vào hộp lồng để nhúng ƣớt hết mình ve, sau đó cho ve sang hộp lồng khô để theo dõi.
Tất cả các thí nghiệm đều có bố trí lô đối chứng.
- Theo dõi các biểu hiện của ve chó thí nghiệm sau khi tiếp xúc với dịch thuốc. - Theo dõi thời gian chết 50% và 100% ve chó thí nghiệm.
- Thời gian theo dõi thí nghiệm liên tục trong 6 giờ.
a) Thí nghiệm xác định môi trƣờng chiết xuất thích hợp cho từng loại dƣợc liệu.
+ Kiểm tra độc tính của dịch chiết phôi hạt Na sau 24 giờ trong các môi trƣờng chiết xuất khác nhau
Dùng phôi của hạt Na nghiền thành bột ngâm trong 4 loại môi trƣờng: NaOH 5%, HCl 5%, cồn 400
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
loại dịch chiết. Các dịch chiết thu đƣợc đem pha loãng ở nồng độ 10% thử với ve chó. Bố trí 4 lô đối chứng tƣơng ứng sử dụng nƣớc cất và dung dịch có độ pH, độ cồn tƣơng đƣơng độ pH, độ cồn của các dung dịch dùng trong thí nghiệm. Theo dõi thời gian gây chết ve chó của từng loại môi trƣờng, kết luận môi trƣờng thích hợp nhất để chiết phôi hạt Na (dựa vào thời gian gây chết 50% và 100% ve chó thí nghiệm là ngắn nhất)
+ Kiểm tra độc tính của dịch chiết hạt Củ đậu sau 24 giờ trong các môi trƣờng chiết xuất khác nhau
Các dạng bào chế hạt Củ đậu (ngâm trong môi trƣờng nƣớc cất, NaOH 5%, HCl 5% và cồn 400
) thu đƣợc sau 24 giờ ngâm chiết đem pha loãng ở nồng độ 5%. Làm thí nghiệm với ve chó tƣơng tự nhƣ thí nghiệm kiểm tra độc tính dịch chiết phôi hạt Na sau 24 giờ trong các môi trƣờng chiết xuất khác nhau.
b) Thí nghiệm xác định thời gian ngâm chiết thích hợp của từng loại dƣợc liệu trong môi trƣờng thích hợp.
+ Xác định thời gian ngâm chiết thích hợp của dịch chiết hạt Na trong môi trƣờng NaOH 5%
Thu các loại dịch chiết phôi hạt Na đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5%, thời gian ngâm chiết 12; 24; 36; 48 và 60 giờ, đem pha loãng ở nồng độ 10% thử độc tính trên ve chó thí nghiệm. Theo dõi thời gian gây chết 50% và 100% ve chó thí nghiệm để kết luận thời gian ngâm chiết thích hợp nhất.
+ Xác định thời gian ngâm chiết thích hợp của dịch chiết hạt Củ đậu đã đƣợc làm ẩm trong môi trƣờng NaOH 5%
Cách bố trí thí nghiệm tƣơng tự nhƣ trên: Dùng hạt Củ đậu ngâm trong môi trƣờng NaOH 5%. Thu dịch chiết ở các thời gian ngâm khác nhau và pha loãng thành dịch chiết 5% thử với ve chó thí nghiệm. Theo dõi thời gian gây chết 50% và 100% ve chó thí nghiệm để kết luận thời gian ngâm chiết thích hợp nhất.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
c) Thí nghiệm kiểm tra độc tính của dịch chiết phôi hạt Na và hạt cây Củ đậu với các nồng độ khác nhau trong môi trƣờng và thời gian ngâm chiết thích hợp.
+ Kiểm tra độc tính của dịch chiết phôi hạt Na với các nồng độ khác nhau sau 36 giờ ngâm trong môi trƣờng NaOH 5% đối với ve chó thí nghiệm
Thu dịch chiết phôi hạt Na nồng độ 100% đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5% sau 36 giờ ngâm, đem pha loãng với các nồng độ: 5%, 10%, 20%, 30% và 50% thử độc tính trên ve chó thí nghiệm. Bố trí 5 lô đối chứng, sử dụng các dung dịch NaOH có độ kiềm tƣơng đƣơng độ kiềm của các dung môi dùng ở các lô thí nghiệm. Kết luận nồng độ dịch chiết có thể diệt đƣợc ve.
+ Kiểm tra độc tính của dịch chiết hạt Củ đậu với các nồng độ khác nhau đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5% sau 24 giờ ngâm chiết với ve chó thí nghiệm.
Thu dịch chiết hạt Củ đậu đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5% sau 24 giờ ngâm chiết theo phƣơng pháp đã trình bày, pha loãng ở các nồng độ 0,1%, 0,5%, 1%, 2% và 5% thử trên ve chó thí nghiệm.
Thí nghiệm cũng đƣợc bố trí nhƣ khi nghiên cứu độc tính của dịch chiết phôi hạt Na ở các nồng độ khác nhau ngâm trong môi trƣờng và thời gian thích hợp.
d) Xác định LD50 và LD100 của dịch chiết dƣợc liệu với ve ký sinh trên chó Bố trí thí nghiệm xác định LD50 theo phƣơng pháp đã trình bày trong phần “Độc tính cấp” của “Từ điển bách khoa dƣợc học” (Nguyễn Duy Cƣơng, Nguyễn Hữu Quỳnh, 1999) [5]. Để xác định LD50 phải dùng các lô động vật thí nghiệm, mỗi lô dùng một nồng độ dịch thuốc nhất định. Các lô khác nhau dùng các nồng độ lớn nhỏ khác nhau, khoảng cách giữa các nồng độ là bằng nhau. Trong dãy nồng độ phải có một nồng độ lớn nhất không làm chết động vật thí nghiệm nào và một nồng độ nhỏ nhất làm chết 100% động vật thí nghiệm. Trong khoảng giữa 2 nồng độ này phải có ít nhất 2 nồng độ khác
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
nhau. Trên cơ sở các liều đã dùng và tỷ lệ chết của các động vật thí nghiệm tƣơng ứng tính LD50 theo phƣơng pháp Berence.
LD100 đƣợc xác định là liều nhỏ nhất làm chết 100% ve chó thí nghiệm.
+ Xác định LD50 và LD100 của dịch chiết phôi hạt Na với ve ký sinh trên chó.
Dùng dịch chiết phôi hạt Na nồng độ 10% trong môi trƣờng NaOH 5% thu ở thời điểm 36 giờ, đem pha loãng thành các dịch chiết có nồng độ 1%; 3%; 5%; 7%; 9%. Thí nghiệm thử độc tính với ve chó đƣợc chia thành 5 lô, mỗi lô 10 con. Từ kết quả thu đƣợc, tính LD50 và LD100.
+ Xác định LD50 và LD100 của dịch chiết hạt Củ đậu với ve ký sinh trên chó.
Dùng dịch chiết hạt Củ đậu đã đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5% có nồng độ quy ƣớc là 10%, thời gian ngâm 24 giờ pha loãng ở các dải nồng độ: 0,05%; 0,1%; 0,15%; 0,2%, 0,25%. Làm thí nghiệm trên 5 lô ve chó, mỗi lô 10 con. Từ kết quả thu đƣợc, tính LD50 và LD100.
2.3.9.4. Điều trị thử nghiệm cho chó nuôi
Mục đích thử nghiệm điều trị ve cho chó trên diện hẹp là để xác định hiệu quả điều trị, đồng thời kiểm tra độ an toàn của từng dƣợc liệu đối với chó thí nghiệm, từ đó ứng dụng điều trị cho chó nhiễm ve trên diện rộng.
Chó thí nghiệm là 12 chó bị nhiễm ve với cƣờng độ nặng (so với thực tế) và có biểu hiện lâm sàng rõ ở một số gia đình thuộc huyện Phổ Yên và thị xã Sông Công, tỉnh Thái Nguyên.
Phƣơng pháp tiến hành: Với mỗi loại dƣợc liệu, bố trí 6 chó chia làm 2 lô, một lô sử dụng liều LD50, lô còn lại sử dụng liều LD100 phun thử nghiệm diệt ve chó.
Chó trƣớc khi dùng thuốc đƣợc cách ly (xích, nhốt cũi) ở nơi khô ráo, thoáng mát, sạch sẽ, cho ăn uống đầy đủ, đƣợc kiểm tra sức khỏe và phải đƣợc rọ mõm nhằm mục đích không cho chó liếm thuốc giúp đảm bảo an toàn cho chó và ngƣời điều trị. Đếm, xác định số lƣợng ve ký sinh: Số lƣợng ve ký
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
sinh ở mỗi chó là số ve đếm đƣợc ở 4 chân, 2 tai, vùng cổ, đầu và thân chó. Tiến hành: Dùng bông, gạc tẩm dịch chiết thuốc với liều gây chết 50% thấm ƣớt vùng lông và da chó, chú ý những vị trí có nhiều ve chó ký sinh (nhƣ ở 4 chân, 2 tai, vùng cổ, đầu của chó). Nếu thấy chó an toàn thì dùng liều gây chết 100% ve chó để diệt ve trên chó.
* Ngày thứ 1: Dùng thuốc.
* Ngày thứ 3: kiểm tra số lƣợng ve sống, chết ở lô thí nghiệm, kiểm tra tình trạng sức khỏe của chó. Nếu còn ve tiếp tục điều trị.
* Ngày thứ 5: kiểm tra số lƣợng ve sống, chết ở lô thí nghiệm, kiểm tra tình trạng sức khỏe của chó. Nếu còn ve tiếp tục điều trị đến khi số lƣợng ve chết là 100%.
Nếu thấy kết quả điều trị tốt, chó an toàn sau khi dùng thuốc thì đem ứng dụng điều trị cho chó nhiễm ve trên diện rộng (dùng liều gây chết 100% ve và tiến hành tƣơng tự nhƣ trên).
+ Điều trị thử nghiệm trên chó bằng dịch chiết phôi hạt Na trong môi trƣờng NaOH 5%, thời gian ngâm 36 giờ.
Một lô sử dụng dịch chiết nồng độ 5,5% của phôi hạt Na đã đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5%, thời gian ngâm 36 giờ; lô còn lại cũng sử dụng dạng dịch chiết trên nhƣng ở nồng độ 9%.
+ Điều trị thử nghiệm trên chó bằng dịch chiết hạt Củ đậu trong môi trƣờng NaOH 5%, thời gian ngâm 24 giờ.
Một lô sử dụng dịch chiết nồng độ 0,17% của hạt Củ đậu đã đƣợc làm ẩm bằng NaOH 5%, thời gian ngâm 24 giờ; lô còn lại cũng sử dụng dạng dịch chiết trên nhƣng ở nồng độ 0,25%.
2.3.9.5. Sử dụng chiết xuất từ hạt Na và hạt cây Củ đậu để trị ve cho chó tại hai huyện, thị thuộc tỉnh Thái Nguyên
Mở rộng điểu trị ve chó tại một số địa phƣơng thuộc 2 huyện, thị đã điều tra tình hình dịch tễ về ve chó. Cụ thể:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
+ Tại huyện Phổ Yên: điều trị 60 chó, trong đó Thành Công 13 chó, Thuận Thành 15 chó, Phúc Thuận 17 chó và thị trấn Ba Hàng 15 chó.
+ Tại thị xã Sông Công: điều trị 56 chó, trong đó Mỏ Chè 12 chó, Bình Sơn 15 chó, Tân Quang 15 chó và Phố Cò 14 chó.