4. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài
2.3.6. Phƣơng pháp thử nghiệm chiết xuất hoạt chất từ hạt Na và hạt
Củ đậu để trị ve cho chó
Sơ đồ thử nghiệm chiết xuất hoạt chất từ hạt Na và hạt cây Củ đậu:
Dƣợc liệu
Dƣợc liệu đƣợc làm ẩm bằng 10 ml một trong các dung dịch sau:
NaOH 5% HCl 5% Cồn 400 Nƣớc cất
Ngâm chiết dƣợc liệu
Kiểm tra độc tính dịch chiết sau 24 giờ với ve thí nghiệm
Xác định môi trƣờng chiết xuất tốt nhất
Kiểm tra độc tính dịch chiết với thời gian ngâm khác nhau (giờ)
12 24 36 48 60
Xác định thời gian ngâm chiết thích hợp
Kiểm tra độc tính dịch chiết ở các nồng độ
Xđ LD50, LD100 với ve chó
Điều trị thử nghiệm trên chó
Sơ đồ bố trí thí nghiệm dựa theo quy trình “Sơ bộ xác định thành phần một dƣợc liệu” của Đỗ Tất Lợi và Ngô Xuân Thu (1970) [18] và phƣơng pháp
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
chiết xuất ancaloid của Stas - Otto (Hà Nhƣ Phú, 1973) [24].
- Tách hoạt chất trong dƣợc liệu từ dạng liên kết sang dạng tự do:
Tẩm ƣớt dƣợc liệu bằng 10ml các dung dịch NaOH 5%, HCl 5%, cồn 400, nƣớc cất. Để 1 giờ. Mục đích là chuyển các hoạt chất trong dƣợc liệu từ dạng liên kết sang dạng tự do để các hoạt chất này có thể hoà tan vào dung môi chiết xuất. Cho thêm 90 ml nƣớc cất vào ngâm tiếp, lúc này các hoạt chất trong dƣợc liệu đƣợc hòa tan vào dịch chiết. Lọc kiệt, bỏ bã thu dịch chiết.
- Thử độc tính dịch chiết dƣợc liệu trên ve chó thí nghiệm theo phƣơng pháp "Dƣợc lý thực nghiệm" đã viết trong "Từ điển bách khoa dƣợc học" Nguyễn Duy Cƣơng, Nguyễn Hữu Quỳnh (1999) [5] và theo tài liệu của Nguyễn Nhƣ Viên (1975) [35].
Dịch chiết thu đƣợc đem pha loãng ở các nồng độ khác nhau để kiểm tra độc tính với ve chó thí nghiệm. Ở các môi trƣờng chiết xuất khác nhau, lƣợng hoạt chất thu đƣợc trong dịch chiết cũng khác nhau. Bằng cách theo dõi thời gian chết 50% và 100% ve chó thí nghiệm sẽ đánh giá đƣợc độc tính của dịch chiết: thời gian chết càng ngắn thì độc tính càng cao. Qua đó chúng ta sẽ xác định đƣợc môi trƣờng ngâm chiết tốt nhất với từng loại dƣợc liệu.
Cùng một môi trƣờng ngâm chiết nhƣng thời gian ngâm khác nhau, lƣợng hoạt chất thu đƣợc ở dịch chiết cũng khác nhau. Do vậy chúng tôi tiếp tục sử dụng các dịch chiết có khoảng thời gian ngâm khác nhau: 12, 24, 36, 48 và 60 giờ để kiểm tra độc tính trên ve chó thí nghiệm. Kết quả sẽ tìm đƣợc thời gian ngâm chiết thích hợp với từng loại dƣợc liệu.
Tiếp tục sử dụng dịch chiết trong các môi trƣờng và thời gian ngâm thích hợp pha loãng ở các nồng độ khác nhau để kiểm tra độc tính dịch chiết với ve chó thí nghiệm. Từ đó xác định đƣợc nồng độ tác dụng thích hợp của dịch chiết dƣợc liệu với ve chó. Xác định LD50 và LD100 với ve chó để làm cơ sở cho việc điều trị thử nghiệm khẳng định hiệu lực điều trị của dƣợc liệu đối với ve ký sinh trên chó.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn