Để xác định khả năng cộng sinh của AMF trên cây cam. Sau khi phân lập bào tử từ đất trồng cam, chúng tôi tiến hành làm thí nghiệm trên cây cam con nẩy mầm từ hạt.
Sau khi hạt cam nẩy mầm, lần 1 bổ sung 10-15 bào tử AMF vào bầu chứa cây ký chủ. Sau khi bổ sung AMF từ 15 -20 ngày chúng tôi tiến hành đó chiều dài, số lƣợng rễ cam trên hai lô thí nghiệm và cho kết quả ở (bảng 3.1). Kết quả cho thấy lô thí nghiệm bổ sung Mycorrhiza có khả năng sinh trƣởng và phát triển tốt hơn trên lô đối chứng không bổ sung Mycorrhiza (Hình 3.5).
Hình 3.5. Bổ sung AMF lần 1 (ảnh trái), thí nghiệm đối chứng (ảnh phải)
44
Lần 2 tiến hành thí nghiệm lặp lại giống nhƣ lần 1 và cho kết quả khả quan ở (bảng 3.2).
Hình 3.6. Kết quả nhiểm AMF trên cây cam con.
Trong quá trình làm thí nghiệm, chúng tôi nhận thấy vai trò của AMF đối với cây cam con là rất lớn nhƣ: làm tăng khả năng hấp thụ các chất dinh dƣỡng, muối khoáng và nƣớc cho cây cam trên môi trƣờng đất cát (môi trƣờng nghèo dinh dƣỡng) qua thời gian 3 tháng cây vẫn phát triển bình thƣờng. Qua bảng thống kê thì chúng tôi nhận thấy những cây cam con khi đƣợc bổ sung AMF có khả năng sinh trƣởng và phát triển hơn nhiều so với cây đối chứng: Về chiều dài của cây, cũng nhƣ chiều dài và số lƣợng rễ trên cây, đƣợc thể hiện qua (hình 3.5; 3.6; 3.7).
45
Hình 3.7. Kết quả sinh trƣởng của cam sau 3 tháng bổ sung AMF
Số liệu thu đƣợc sau các lần đo đƣợc tính toán và xử lý qua phần mềm Ecxel, độ sai lệch đƣợc tích theo công thức:
Trong đó n số cây (n = 20)
Bảng 3.2. Kết quả thí nghiệm trên cây cam con
Số lần đo Bổ sung AMF Thí nghiệm ĐC
Chiều dài rễ (cm) Số lƣợng rễ (cái) Chiều dài rễ (cm) Số lƣợng rễ (cái) Lần 1 3,2 ± 0,17 3,0 ± 0,1 2,1 ± 0,03 2,0 ± 0,01 Lần 2 6,7 ± 0,17 5,0 ± 0,1 3,8 ± 0,01 3,0 ± 0,05 Lần 3 13,0 ± 0,02 6,0 ± 0,05 4,8 ± 0,13 4,0 ± 0,02 Sau thời gian 3 tháng chúng tôi tiến hành thu mẫu rễ có bổ sung AMF để xác định khả năng cộng sinh của AMF trên rễ cam bằng phƣơng pháp nhuộm trypan blue (0,005%) có cải tiến của Brundrett Mark và đtg, (1996)
46
[24]. Sau khi xác định khả năng cộng sinh trên rễ cam, chúng tôi tiến hành thu mẫu rễ với số lƣợng lớn cho quá trình tách DNA tổng số.
Hình 3.8. Kết quả nhuộm Tryphan blue AMF ở rễ cam: 1- Bào tử AMF
2- sợi nấm AMF
3- thành tế bào thực vật.