2.2.4.1 phương pháp lây bệnh nhân tạo nấm ựốm lá lớn và ựốm lá nhỏ ngô trên ngô và lúa bằng phương pháp phun bào tử.
* Chuẩn bị nguồn và ký chủ.
- Nguồn nấm Exserohilum turcicum gây bệnh ựốm lá lớn trên ngô và nấm Bipolaris Maydis gây bệnh ựốm lá nhỏ trên ngô ựược phân lập từ mẫu ngô bị bệnh nuôi cấy trên môi trường PDA hình thành bào tử. Dùng que cấy nấm khêu bào tử từ môi trường nuôi cấy hòa loãng vào nước cất vô trùng, ựếm số lượng bào tử bằng buồng ựếm dưới kắnh hiển quang học với số lượng 104 bào tử/ml.
- Ký chủ lây bệnh
+ Các giống ngô: NK 4300, AK 5443, DK 9901, DK 9955, ADI 600 + Các giống lúa: Hương Thơm, Bắc Hương
+ Giai ựoạn lây bệnh: ngô và lúa ở giai ựoạn 5 Ờ 6 lá thật.
- Phương pháp lây bệnh: dùng bình xịt tay ựể dạng phun sương ựể phun dung dịch có chứa bào tử nấm cần lây bệnh. Phun vào chiều tối và ựể cây ựã phun ra ngoài tạo ựiều kiện ẩm ựộ tốt cho bào tử nấm nảy mầm và xâm nhiễm (chú ý cách ly công thức lây bệnh và công thức ựối chứng vì bào tử nấm có thể bay trong không khắ ảnh hưởng ựến kết quả thắ nghiệm).
- Chỉ tiêu theo dõi: số vết ựốm hình thành trên các giống ngô và lúa sau 5 ngày, 10 ngày, 15 ngày, 20 ngày, 25 ngày và 30 ngàỵ
2.2.4.2 Phương pháp lây bệnh nhân tạo nấm ựốm lá lớn và ựốm lá nhỏ ngô trên ngô và lúa bằng phương pháp lây nhiễm trực tiếp.
- Chuẩn bị nguồn và ký chủ lây bệnh như phương pháp lây nhiễm bằng phương pháp phun bào tử.
- Phương pháp lây nhiễm:
+ Chuẩn bị những mảnh giấy thẩm nhỏ ựã ựược hấp khử trùng và băng dắnh ựể thực hiện lây bệnh trực tiếp
+ Dùng xi lanh hoặc công tơ hút hút 1ml dung dịch bào tử nấm lây bệnh phun lên giấy thấm. Dùng những giấy thấm ựó gián vào cây ký chủ. Mỗi công thức thực hiện 3 lần nhắc lại mỗi lần nhắc lại là 10 vết lây nhiễm. sau ựó dùng băng dắnh cố ựịnh lại và dán nhãn. Công thức ựối chứng không lây nhiễm nấm bệnh.
+ Chỉ tiêu theo dõi: ựể ựánh giá mức kháng nhiễm khác nhau của các giống trong mỗi công thức với ựốm lá nhỏ ta xác ựịnh, bán kắnh quầng vết bệnh và chiều dài vết bệnh, ựơn vị là mm. đối với ựốm lá lớn chi xác ựịnh kắch thước vết bệnh (mm) qua 5 ngày, 10 ngày, 15 ngày, 20 ngày, 25 ngày và 30 ngàỵ
2.2.4.3 phương pháp lây bệnh nhân tạo nấm ựốm lá lúa do nấm Bipolaris oryzae lên ngô và lúạ
- Nguồn nấm lây bệnh: nấm Bipolaris oryzae ựược phân lập từ mẫu lúa bị bệnh ựốm nâu và nuôi cấy trên môi trường PDẠ Thực hiện phương pháp lây nhiễm trực tiếp bằng sợi nấm.
- Cây ký chủ: Ngô và Lúa
- Phương pháp lây nhiễm: dùng que cấy nấm khều sợi nấm ựặt lên mảnh giấy thấm ựã ựược hấp khử trùng và phun ẩm bằng nước cất vô trùng, sau ựó ựặt lên lá cây khỏe, dán băng dắnh và gỡ băng dắnh ra sau 48h. Theo
giống là 1 công thức, mỗi công thức 3 lân nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là 10 vết bệnh. Công thức ựối chứng không bổ sung sợi nấm vào giấy thấm.
2.2.4.4 Phương pháp lây bệnh nhân tạo bệnh khô vằn do nấm Rhizoctonia solani phân lập từ ngô lên ngô và lúạ
- Chuẩn bị nguồn: Hạch nấm Rhizoctonia solani phân lập từ ngô - Chuẩn bị cây lây nhiễm: Ngô và lúa giai ựoạn 5 -6 lá thật - Cách tiến hành:
+ Dùng que cấy hoặc kim tiêm chọc vào phần thân dưới của cây ựược lây bệnh và gắn một miếng thạch nhỏ chứa hạch nấm từ mẫu tác nhân gây bệnh ựã làm thuần vào vị trắ vết thương tiêm).
+ Dùng que cấy hoặc kim tiêm chọc vào phần thân dưới của cây ựối chứng nhưng không lây bệnh.
+ Dùng parafilm hoặc màng ny lon bọc vết thương hoặc vị trắ lây bệnh. + Tưới ẩm cho ựất mỗi ngàỵ
Kiểm tra và so sánh những cây ựược lây bệnh với những cây ựối chứng. - Chỉ tiêu theo dõi:
+ Thời gian tiềm dục + Tỷ lệ nhiễm bệnh (%) + Chỉ số bệnh (%)
2.2.4.5 Phương pháp lây bệnh nhân tạo bệnh khô vằn do nấm Rhizoctonia solani phân lập từ lúa lên ngô và lúa
Thực hiện tương tự như mẫu phân lập từ ngô. * Phương pháp thiết kế thắ nghiệm
- Các thắ nghiệm ựược thiết kế theo kiểu Khối ngẫu nhiên ựấy ựủ RCB, Mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại với vết bệnh trên lá là 10 vết, lây nhiễm toàn cây là 10 câỵ
Các công thức thắ nghiệm
Công thức Giống đơn vị phân phối (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
1 ADI 600 Công ty ADI
2 NK 4300 Công ty Syngenta Việt Nam
3 DK 9901 Công ty Monsanto Việt Nam
4 AK 5443 Công ty ADI
5 DK 9955 Công ty Monsanto Việt Nam
6 Bắc hương Giống cây trồng TW
7 Hương thơm
8 đC ADI 600 Công ty ADI
9 đC NK 4300 Công ty Syngenta Việt Nam
10 đC AK 5443 Công ty ADI
11 đC DK 9955 Công ty Monsanto Việt Nam
12 đC DK 9901 Công ty Monsanto Việt Nam
13 đC Hương thơm
14 đC Bắc hương Giống cây trồng TW
3.2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu ựược thu thập ựánh giá và xử lý bằng excel và phần mềm thống kê IRRI START 5.0.
Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU