PHƯƠNG PHÁP VÀ PHƯƠNG TIỆN 2.1 PHƯƠNG TIỆN
2.1.1. Thời gian và địa điểm thực hiện a) Thời gian
Đề tài được thực hiện từ tháng 10/2013 đến tháng 12/2014.
b) Địa điểm
Đề tài được thực hiện tại phòng thí nghiệm côn trùng, Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ.
2.1.2. Vật liệu và dụng cụ thí nghiệm a) Vật liệu thí nghiệm
Nguồn nhện sói P. pseudoannulata thu trên ruộng lúa và quanh đồng cỏ ven các cánh đồng lúa.
Thức ăn cho nhện sói: rầu nâu thu ngoài đồng và nhân nuôi trên lúa trong nhà lưới. Ngoài ra còn một số bướm, sâu và một số côn trùng khác thu ngoài đồng.
b) Dụng cụ thí nghiệm - Hạt lúa giống Jasmine 85.
- Hộp nhựa nhỏ (đường kính 6,5 cm, cao 3,7 cm).
- Hộp nhựa trong (đường kính 11 cm, chiều cao 8,5 cm), chậu nhựa (đường kính 12cm, chiều cao 6,5 cm).
- Ống hút rầy nâu, ẩm độ kế, nhiệt kế.
- Phân ure, DAP…
- Lồng lưới nuôi ấu trùng và thành trùng.
- Các loại thuốc trừ sâu Chess 50WG, Cyperan 10EC, Abatin 5.4EC, Kinalus 25EC, Prevathon 5EC, Proclaim 1.9EC.
- Vợt có đường kính 30-35 cm và đáy sâu 50-60 cm, có cán dài độ 1 m.
- Một số dụng cụ: kéo, dây nilon, băng keo, kẹp, viết lông, kính hiển vi, kính lúp, bao nilon, hộp nhựa, máy ảnh kỹ thuật số,…
2.2. PHƯƠNG PHÁP 2.2.1. Chuẩn bị thí nghiệm
a) Chuẩn bị nhện sói
Nhện sói được thu ở ngoài đồng và nhân nuôi trong phòng thí nghiệm. Thu chủ yếu là các nhện cái đang mang trứng về nuôi trong các hộp nhựa nhỏ đến khi nở nhện con, sau đó sử dụng nhện con để làm thí nghiệm đối với ấu trùng; còn nhện trưởng thành được giữ lại sử dụng cho các thí nghiệm đối với thành trùng.
Thức ăn chủ yếu cho nhện sói là rầy nâu thu từ ngoài đồng và nhân nuôi trong nhà lưới và một số côn trùng nhỏ khác (sâu cuốn lá nhỏ, ruồi giấm,…).
23
b) Nuôi rầy nâu (Nilaparvata lugens Stal)
Ngâm ủ và trồng lúa trong các chậu nhựa (đường kính 12cm, chiều cao 6,5 cm). Giống lúa được dùng làm thức ăn cho rầy nâu là giống Jasmine 85. Hạt giống được ngâm trong nước sạch 24 giờ sau đó đem ủ 48 giờ rồi đem gieo vào các chậu nhựa đã chuẩn bị đất sẵn (đất chiếm khoảng 2/3 chậu). Sau đó làm những máng nước, bỏ các chậu lúa vào và giăng mùng kín. Sau khi lúa được 3 – 4 tuần thì bắt đầu thu rầy nâu ngoài đồng về thả vào các chậu lúa.
Mực nước trong máng luôn giữ ở mức ổn định để tạo độ ẩm cho rầy nâu phát triển tốt. Trong khi nuôi cần chú ý ngăn ngừa các côn trùng và động vật khác như:
bọ xít mù xanh, kiến, nhện lớn ăn thịt (nhện linh miêu, nhện chân dài), chuột, rắn mối,… tưới nước, bón phân đầy đủ cho cây lúa đến khi được 20 - 30 ngày tuổi thì có thể dùng làm thức ăn cho rầy nâu. Thường xuyên trồng nhiều đợt lúa mới để bổ sung thức ăn cho rầy nâu, đảm bảo đủ rầy để làm thí nghiệm.
2.2.2. Tiến hành thí nghiệm
2.2.2.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của một số loại thuốc trừ sâu lên khả năng sống sót của ấu trùng nhện sói Pardosa pseudoannulata trong điều kiện phòng thí nghiệm.
a) Ảnh hưởng trực tiếp
Thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, 7 nghiệm thức gồm 6 loại thuốc và một đối chứng (sử dụng nước cất) với 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 20 ấu trùng nhện sói. Các thuốc trừ sâu dùng trong thí nghiệm là: Chess 50WG, Cyperan 10EC, Abatin 5.4EC, Kinalux 25EC, Prevathon 5EC, Proclaim 1.9EC. Liều lượng của thuốc được dùng theo khuyến cáo.
Bảng 2.1: Nồng độ các loại thuốc sử dụng trong thí nghiệm.
Tên thuốc thương phẩm Tên hoạt chất Nồng độ sử dụng (khuyến cáo) Chess 50WG Pymetrozine 7,5 g/ 12 lít nước
Proclaim 1.9EC Emamectin benzoate 0,15 – 0,25 L/ha Cyperan 10EC Cypermethrin 6 – 8 ml/ bình 8 lít Kinalux 25EC Quinalphos 25 – 35 ml/bình 10 lít Abatin 5.4EC Abamectin 4 - 6 ml /16 lít Prevathon 5SC Chlorantraniliprole 0,2 – 0,4 L/ha
24
Cách tiến hành:
Phun thuốc vào hộp nhựa sạch (đường kính 10cm cao 8cm) có nhện bằng máy phun với thời gian 5 giây, các hộp nhựa đều được đánh số các nghiệm thức và cung cấp bông gòn ẩm, thức ăn là rầy nâu (rầy cám) để tránh nhện ăn thịt lẫn nhau.
b) Ảnh hưởng gián tiếp
Các loại thuốc và cách tiến hành tương tự với thí nghiệm phun trực tiếp nhưng khi phun thuốc chỉ phun vào hộp không có nhện. Sau khi phun để thuốc khô tự nhiên dưới nhiệt độ phòng sau đó mới thả nhện và rầy nâu.
2.2.2.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của một số loại thuốc trừ sâu lên khả năng sống sót của thành trùng nhện sói Pardosa pseudoannulata trong điều kiện phòng thí nghiệm.
a) Ảnh hưởng trực tiếp
Thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, 7 nghiệm thức gồm 6 loại thuốc và một đối chứng (sử dụng nước cất) với 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 10 thành trùng nhện sói. Các thuốc trừ sâu dùng trong thí nghiệm là: Chess 50WG 50WG, Cyperan 10EC, Abatin 5.4EC, Kinalux 25EC, Prevathon 5EC, Proclaim 1.9EC. Liều lượng của thuốc được dùng theo khuyến cáo.
Cách tiến hành:
Phun thuốc vào hộp nhựa sạch (đường kính 10cm cao 8cm) có nhện bằng máy phun với thời gian 5 giây, các hộp nhựa đều được đánh số các nghiệm thức và cung cấp bông gòn ẩm, thức ăn là rầy nâu để tránh nhện ăn thịt lẫn nhau.
b) Ảnh hưởng gián tiếp
Các loại thuốc và cách tiến hành tương tự với thí nghiệm phun trực tiếp nhưng khi phun thuốc chỉ phun vào hộp không có nhện. Sau khi phun để thuốc khô tự nhiên dưới nhiệt độ phòng sau đó mới thả nhện và rầy nâu.
2.2.2.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của một số loại thuốc trừ sâu lên khả năng sống sót của ấu trùng nhện sói Pardosa pseudoannulata trong điều kiện nhà lưới.
a) Ảnh hưởng trực tiếp
25
Thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, 6 nghiệm thức gồm 5 loại thuốc và một đối chứng (sử dụng nước cất) với 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 20 ấu trùng nhện sói. Các thuốc trừ sâu dùng trong thí nghiệm là: Chess 50WG, Cyperan 10EC, Abatin 5.4EC, Kinalux 25EC, Prevathon 5EC, Proclaim 1.9EC. Liều lượng của thuốc được dùng theo khuyến cáo.
Cách tiến hành:
Phun thuốc vào lồng nhựa có chưa chậu lúa (Hình 1) có nhện bằng máy phun với thời gian 5 giây, các hộp nhựa đều được đánh số các nghiệm thức thức ăn là rầy nâu để tránh nhện ăn thịt lẫn nhau. Giống lúa dùng trong thí nghiệm là jasmin 85 với độ tuổi là 30 – 40 ngày.
b) Ảnh hưởng gián tiếp
Các loại thuốc và cách tiến hành tương tự với thí nghiệm phun trực tiếp nhưng khi phun thuốc chỉ phun vào hộp không có nhện. Sau khi phun để thuốc khô tự nhiên sau đó mới thả nhện và rầy nâu.
2.2.2.4 . Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của một số loại thuốc trừ sâu lên khả năng sống sót của thành trùng nhện sói Pardosa pseudoannulata trong điều kiện nhà lưới.
a) Ảnh hưởng trực tiếp
Thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, 7 nghiệm thức gồm 6 loại thuốc và một đối chứng (sử dụng nước cất) với 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 10 thành trùng nhện sói. Các thuốc trừ sâu dùng trong thí nghiệm là: Chess 50WG 50WG, Cyperan 10EC, Abatin 5.4EC, Kinalux 25EC, Prevathon 5EC, Proclaim 1.9EC. Liều lượng của thuốc được dùng theo khuyến cáo.
Cách tiến hành:
Phun thuốc vào lồng nhựa có chưa chậu lúa (Hình 1) có nhện bằng máy phun với thời gian 5 giây, các hộp nhựa đều được đánh số các nghiệm thức thức ăn là rầy nâu để tránh nhện ăn thịt lẫn nhau. Giống lúa dùng trong thí nghiệm là jasmin 85 với độ tuổi là 30 – 40 ngày.
b) Ảnh hưởng gián tiếp
26
Hình 2.1: Lồng chứa nhện sói trong thí nghiệm (A), bố trí thí nghiệm (B)
A B
Các loại thuốc và cách tiến hành tương tự với thí nghiệm phun trực tiếp nhưng khi phun thuốc chỉ phun vào hộp không có nhện. Sau khi phun để thuốc khô tự nhiên sau đó mới thả nhện và rầy nâu.
2.3. LẤY CHỈ TIÊU VÀ XỬ LÍ SỐ LIỆU
Cách lấy chỉ tiêu: ghi nhận tỉ lệ sống sót ấu trùng (thành trùng) nhện sói sau 3, 6, 9, 12, 24, 48 và 72 giờ sau khi phun thuốc; riêng với các thí nghiệm đối với ấu trùng nhện sói, trong điều kiện nhà lưới thì lấy chỉ tiêu sau 24, 48 và 72 giờ sau khi phun thuốc.
Hiệu quả của thuốc được tính theo công thức Abbott (1925):
Trong đó:
T: Số lượng cá thể sống trong nghiệm thức xử lý thuốc C: Số lượng cá thể sống trong nghiệm thức đối chứng
Số liệu được xử lý bằng chương trình Excel 2003 để tính số trung bình và vẽ biểu đồ. Sau đó tiến hành phân tích thống kê bằng chương trình SPSS 16 để so sánh các số trung bình với nhau qua phân tích ANOVA và kiểm định Duncan.
Độ hữu hiệu (%)= (C-T)/C x 100
27
CHƯƠNG 3