Chương 2. VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHÁT
2.3.4.7. Phương pháp xác định HCT định tốc độ đông máu
Cho một lượng máu vào ống mao dẫn,
đo độ dai của phan máu trong ống mao quan bằng thước kẹp điện tử (H1). Sau đó, li tâm ống mao quản chứa mẫu máu với tộc độ 3200 vòng/phút, trong 15 phút. Dùng
33
thước kẹp điện tử đo phần huyết thanh phía trên (H2). Chỉ số hematocrit được xác định
bằng Công thức: (H1 - H2)/H1*100%.
Hình 2.10. Minh hoạ thao tác xác định chỉ số hematocrit
2.3.4.8. Phương pháp làm tiêu bản máu
Cách làm tiêu ban máu gồm 5 bước, cụ the:
Bước 1: Chuan bị mẫu máu
Dùng côn sát trùng vị trí lay máu, chờ cho khô. Nhỏ giọt dung dich MgSO; 14%
lên vị trí lẫy máu vừa sát trùng. Dùng kim trích máu vô trùng chích qua giọt MgSOs dé máu chảy tự nhiên hòa với dung dịch. Lay mau này lam tiêu bản và nhuộm Giemsa.
Bước 2: Dàn mỏng mẫu máu
Lay mau máu đã chuân bị ở bước | bỏ vai giọt đầu, chấm nhẹ | giọt máu lên cudi lame thứ nhất. Lấy lame 2 chạm vào giọt máu với góc nghiêng 30 - 45 độ. để giọt mau lan theo cạnh lame rồi kéo lame 2 từ đầu này sang đầu kia với tốc độ vừa phải nhưng vẫn giữ nguyên góc nghiêng như vậy, lúc này ta đã đàn đều giọt máu thành lớp mỏng trên lame 1. Dé tiêu bản máu khô tự nhiên hoặc có thé ding gió, tủ ấm, hơ nhẹ trên đèn côn làm khô tiêu bản.
Bước 3: Có định tiêu ban
Sử dụng côn methylic nhỏ bao đều trên tiêu ban máu, sau đó đẻ đứng tiêu bản trên giá cho alcohol chảy hết va dé tiêu bản khô tự nhiên.
34
Bước 4: Nhuộm tiêu bản
Tùy vào phương pháp sử dụng thuốc nhuộm, có thê tiễn hành nhuộm đơn hay
nhuộm kép.
Tiêu ban máu đã có định bang alcohol được ngâm trong dung dịch Giemsa (2 mL Giemsa pha với 18 mL nước cat, lắc đều) trong 15 — 20 phút (có thể nhỏ dung địch Giemsa phủ đều trên mẫu máu của tiêu ban đã cô định khi không dùng cốc ngâm lame). Gác các lame mẫu lên các thanh thủy tinh nằm ngang trên miệng | chậu thủy tỉnh, tránh để hoá chat chạm vào tay, quan áo.
Rửa tiêu bản bằng nước cất một góc nghiêng (không đề nước cất chảy thăng vào
vị trí có tiêu bản máu) đến khi nước trong không còn phai màu. Để mẫu khô tự nhiên
(hoặc sây khô nhẹ trong tủ am hay ho trên ngọn lửa đèn côn).
2.3.4.9. Phương pháp xác định kích thước hông câu
Quan sát mẫu tiêu ban máu dưới kính hiển vi. Sử dụng phần mềm S — Eye đo bán kính của các hồng cầu. Mỗi nghiệm thức lay ngẫu nhiên các lame và tiền hành do bán kính của 200 hồng cau, xuất số liệu dang file excel, thông kê và phi nhận kết quả.
2.3.4.10. Phương pháp thu máu toàn phan
. +: sẤ . a . se a a a # # a xÁ
Trước khi lây máu, cho chuột nhịn đói một đêm hôm trước, sáng hôm sau tiên
hành lay máu. Lay máu 2 lần sau mỗi 4 tuần thí nghiệm, chuột được gây mê bằng
35
cách tiêm thuốc mẽ (ketamine vả xylazine) liều 0.01 mL/10 g thé trong,
chờ 2 phút cho chuột đi vào trang thai mê,
tiền hành chọc dò tim: đưa kim tiêm qua da, dưới xương ức vào tâm thất trái (có thé thu thập 1 — 2 mL máu) [53] và cho
máu vào ống nghiệm tách huyết thanh URI , dùng mẫu máu này dé thu huyết thanh và xét nghiệm đánh giá một số chỉ
số sinh hoá.
2.3.4.11. Phương pháp chuẩn bị và
khảo sát mau huyết thanh Hình 2.12. Minh hoa thu mau tim
Lay mau mau toan phan thu duge ở chuột đem li tâm ở tốc độ 3200 vòng/phút, trong
15 phút. Sau khi li tâm, huyết thanh có màu trong năm ở phía trên, các tế bảo máu lắng xuống dưới. Thu lượng huyết thanh vào ống eppendorf và bảo quản ở — 4°C dé gửi mẫu phân tích một số chỉ số sinh hoá gồm: bilirubin, men gan (AST và ALT), chỉ số tiết niệu (creatinin, urea) tại khoa xét nghiệm của Trung tâm Y khoa Medic Hoa Hảo, Quận 10, Thành phố Hồ Chi Minh.
2.3.4.12. Phương pháp xử lí số liệu
Tất cả số liệu của đề tài đều được xử lí theo các thuật toán xác suất thống kê
trên máy vi tính bằng phần mềm Graphpad Prism 9.2. Các số liệu được trình bày ở dang số liệu trung bình va độ lệch chuan (Standard Deviation — SD). Các so sánh khác biệt trong phân tích phương sai một và hai yếu to (Two — way Anova); sử dụng thử nghiệm Tukey với mức ý nghĩa là 0,05 (p < 0.05 thì sự sai khác có ý nghĩa thong
kê) để kiểm định các số liệu.
36