CHƯƠNG II: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Khảo sát thành phần côn trùng gây hại trên ruộng lúa 2.2.1.1 Khảo sát thành phần côn trùng gây hại trên ruộng lúa
Khảo sát trên 3 ruộng lúa, mỗi ruộng có diện tích trên 1.000 m2 tiến hành:
- Quan sát bằng mắt để đánh giá chung về tình hình dịch hại.
- Trong quá trình điều tra tiến hành thu mẫu vào lúc sáng sớm khi có đủ sáng để thấy được các loài côn trùng có kích thước nhỏ.
- Thu mẫu bằng biện pháp cơ học (bắt bằng tay hoặc sử dụng vợt côn trùng) để thu mẫu côn trùng gây hại. Dùng vợt lớn đường kính 40 cm vợt những côn trùng bay, ẩn nấp trong tán và ngoài tán cây lúa đi theo đường zigzag hay đường chéo góc, vợt 5 điểm trên mỗi ruộng và mỗi điểm vợt 5 lần. Mỗi điểm vợt tính trong phạm vi 5 m2. Vợt thấp xuống tán lá lúa cho côn trùng bay ra dễ dàng hơn. Sau đó cho tất cả côn trùng trong vợt vào lọ thủy tinh có chứa cồn 70% để giữ mẫu đem về phòng thí nghiệm để quan sát và xác định loài.
- Công tác định danh được thực hiện dựa vào các khóa phân loại của nhiều tác giả như Borror et al., (1976), Kugoro và Lewvanich (1993), William và Watson (1988), Pisuth Ek-Amnuay (2002), Pisuth Ek-Amnuay (2006).
- Chỉ tiêu ghi nhận là mật số trung bình của các loài côn trùng gây hại hiện diện trên ruộng lúa.
2.2.1.2 Khảo sát thành phần sâu cuốn lá nhỏ trên ruộng lúa
Việc khảo sát thành phần loài sâu cuốn lá nhỏ chủ yếu dựa vào ấu trùng và thành trùng.
* Đối với ấu trùng: Cắt ngẫu nhiên những lá bị cuốn trên 13 ruộng lúa tại một số địa điểm thuộc huyện Kế Sách, tỉnh Sóc Trăng. Đem về phòng thí nghiệm để định danh và phân loại.
Chỉ tiêu ghi nhận: Số lượng và tỷ lệ từng loài sâu cuốn lá nhỏ.
* Đối với thành trùng: Thu mẫu bướm sâu cuốn lá nhỏ ngoài đồng bằng vợt tại một số địa điểm thuộc huyện Kế Sách, tỉnh Sóc Trăng trên 9 lúa ruộng, mỗi ruộng thu trung bình 20 bướm, cho vào hộp nhựa đem về phòng thí nghiệm để định danh và phân loại.
Chỉ tiêu ghi nhận: Số lượng và tỷ lệ từng loài và tỷ lệ đực cái của mỗi loài sâu cuốn lá nhỏ.
2.2.2 Khảo sát thành phần thiên địch trên ruộng lúa 2.2.2.1 Khảo sát thành phần thiên địch trên ruộng lúa
Khảo sát trên 3 ruộng lúa, mỗi ruộng có diện tích trên 1.000 m2 tiến hành:
- Quan sát bằng mắt để đánh giá chung trên ruộng.
- Trong quá trình điều tra tiến hành thu mẫu vào lúc sáng sớm khi có đủ sáng để thấy được các loài côn trùng có kích thước nhỏ.
- Thu mẫu bằng biện pháp cơ học (bắt bằng tay hoặc sử dụng vợt côn trùng) để thu mẫu côn trùng thiên địch. Dùng vợt lớn đường kính 40 cm vợt những côn trùng bay, ẩn nấp trong tán và ngoài tán cây lúa đi theo đường zigzag hay đường chéo góc, vợt 5 điểm trên mỗi ruộng và mỗi điểm vợt 5 lần. Vợt thấp xuống tán lá lúa cho côn trùng bay ra dễ dàng hơn. Mỗi điểm vợt tính trong phạm vi 5 m2. Sau đó cho tất cả côn trùng trong vợt vào lọ thủy tinh có chứa cồn 70% để giữ mẫu đem về phòng thí nghiệm để quan sát và xác định loài. Ngoài ra còn lấy mẫu nước tại các ruộng khảo sát, đem về phòng thí nghiệm quan sát dưới kính hiển vi để định danh những loài thiên địch bé nhỏ trong nước ruộng.
- Công tác định danh được thực hiện dựa vào các khóa phân loại của nhiều tác giả như Borror et al., (1976), Kugoro và Lewvanich (1993), William và Watson (1988), Pisuth Ek-Amnuay (2002), Pisuth Ek-Amnuay (2006).
- Chỉ tiêu ghi nhận là mật số trung bình của các loài côn trùng thiên địch hiện diện trên ruộng lúa.
2.2.2.2 Khảo sát thành phần thiên địch ký sinh trên ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ Quá trình khảo sát thành phần thiên địch ký sinh trên ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ được tiến hành trên 13 ruộng thuộc huyện Kế Sách, tỉnh Sóc Trăng.
Cắt ngẫu nhiên 30 - 50 cuốn lá có ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ trên mỗi ruộng. Đem về nuôi trên cây lúa trong điều kiện phòng thí nhiệm. Tách riêng 1 sâu non nuôi trong 1 đĩa petri và thay thức ăn hằng ngày cho đến khi ký sinh thoát ra từ sâu non.
Chỉ tiêu ghi nhận:
Thành phần các loài thiên địch ký sinh trên ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ.
Mật số trung bình các loài thiên địch ký sinh trên ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ.
2.2.3 Khảo sát hiệu lực của một số loại thuốc trừ sâu đối với loài Cnaphalocrosis medinalis Guenée trong điều kiện phòng thí nghiệm
Khảo sát hiệu lực của bốn loại thuốc trừ sâu: Vertimec 1.8EC, Prevathon 5SC, Takumi 20WG, Lorsban 30EC đối với sâu cuốn lá nhỏ loài Cnaphalocrosis medinalis Guenée trong điều kiện phòng thí nghiệm.
* Phương pháp nuôi bướm để có sâu tuổi 2
Thu thập tối thiểu 300 bướm sâu cuốn lá nhỏ trên đồng lúc lúa ở vào giai đoạn cây đang tăng trưởng đến tượng khối sơ khởi hay lúc sâu cuốn lá nhỏ phát triển mạnh và ít nhất 2 tuần trước đó đồng ruộng chưa được xử lý thuốc. Cho mẫu bướm vào trong các hộp nhựa có để cây lúa và bông gòn tẩm mật ong 20% làm thức ăn cho bướm. Sau đó, đem về nhà lưới cho vào mùng lưới phân loại dựa vào đặc điểm trên cánh và tách biệt thành 2 loài, mỗi loài cho vào mùng lưới riêng biệt có để sẵn các chậu lúa khoảng 3 tuần tuổi cho bướm đẻ trứng, hằng ngày thay các chậu lúa mới để đảm bảo trứng được đẻ cùng ngày. Theo dõi đến khoảng 11 ngày sau khi đẻ trứng thì cẩn thận thu ấu trùng tuổi 2 làm thí nghiệm.
* Phương pháp khảo sát thuốc
− Chuẩn bị cây lúa mạ để thử thuốc: sử dụng lúa khoảng 14 ngày tuổi (cao khoảng 12 cm) được trồng trong chậu nhựa (đường kính 10 cm) trước đó tại nhà lưới Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật trong điều kiện không sử dụng thuốc trừ sâu, bệnh.
− Dung dịch thuốc được chuẩn bị bằng cách pha loãng thuốc trong nước theo nồng độ khuyến cáo, nghiệm thức đối chứng là nước không pha thuốc.
− Cây mạ được ngâm trong dung dịch thuốc đã được chuẩn bị sẵn (cần khoảng 1 lít dung dịch để ngâm) trong 10 giây. Bảo đảm rằng các cây mạ được ngập hoàn toàn trong suốt thời gian ngâm.
− Sau đó các cây mạ này được làm khô tự nhiên (cho đến khi không còn nước đọng lại trên thân hay lá) bằng cách đặt chúng trên giá hay rổ khô thoáng.
Hình 2.2: Bố trí thí nghiệm trong phòng thí nghiệm
− Giấy lọc được lót sẵn dưới đáy của đĩa Petri (đường kính 9 cm). Các tờ giấy lọc được làm ướt bởi 1ml nước. Trong suốt quá trình theo dõi, nếu tờ giấy nào bị khô thì cần thêm nước để đảm bảo duy trì đủ ẩm.
− Bông gòn dùng để quấn quanh rễ cây lúa và cho thấm nước để đảm bảo cho cây lúa còn tươi trong suốt thời gian thí nghiệm.
− Khoảng 3 đến 4 cây mạ được cho vào đĩa Petri có lót giấy thấm sẵn.
− Cho 5 ấu trùng sâu cuốn lá nhỏ tuổi 2 được cẩn thận sử dụng cọ mềm cho vào mỗi đĩa.
− Đĩa Petri sau khi thả sâu cần được giữ ở điều kiện thích hợp (T: 27-28oC, RH:
80 - 85%, thời gian chiếu sáng trung bình 12 giờ/ngày).
Hình 2.1: Thử thuốc trong phòng thí nghiệm
* Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 5 nghiệm thức trong đó có 4 loại thuốc trừ sâu: Vertimec 1.8EC, Prevathon 5SC, Takumi 20WG, Lorsban 30EC và kiểm chứng với 12 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 1 đĩa petri, mỗi đĩa petri thả 5 sâu tuổi 2 tương ứng 60 sâu/nghiệm thức.
Bảng 2.1: Các loại thuốc dùng trong thí nghiệm.
STT Tên thuốc Hoạt chất Nồng độ
(‰) Tên công ty 1 Vertimec 1.8EC Abamectin 0,555 Sygenta Co., Ltd 2 Prevathon 5SC Chlorantraniliprole 0,200 Dupon Co., Ltd
3 Takumi 20WG Flubendiamide 0,05 Nihon Nohyaku Co., Ltd 4 Lorsban 30EC Chlorpyriphos ethyl 0,530 Down AgroSciences
* Chỉ tiêu ghi nhận
Đếm số sâu chết (con chết hay bị ngộ độc nghiêm trọng) vào các thời điểm 1, 3 và 5 ngày sau khi nhúng thuốc. Sâu được xem là chết nếu chúng không thể di chuyển khi dùng que hay cọ chạm đến chúng.
Số liệu thí nghiệm được phân tích thống kê bằng phần mềm MSTATC và độ hữu hiệu của thuốc được tính theo công thức Abbott :
Độ hữu hiệu E (%) =
Với c: tỷ lệ % sâu sống ở nghiệm thức đói chứng t: tỷ lệ % sâu sống ở nghiệm thức có xử lý thuốc
c - t c x100
CHƯƠNG III