Chương 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.3.4 Nghiên cứu vai trò của Ba khía liên quan đến tuần hoàn dinh dưỡng đất rừng ngập mặn Cồn Trong Ông Trang
Phương pháp thực hiện
* Khảo sát thành phần loài nhóm, loài Ba khía theo 3 dạng lập địa - Lập ô tiêu chuẩn, khảo sát theo phương pháp đơn vị/ thời gian (catch per unit effort: CPUE).
- Thành phần Ba khía được khảo sát bằng cách bắt bằng tay, khảo sát trong ô tiêu chuẩn đã nghiên cứu tại mỗi lập địa.
Ở mỗi lập địa, ba người bắt trong 30 phút, tại 1 ô tiêu chuẩn tất cả những cá thể loài có trong ô. Thực hiện đồng thời tại 3 ô tiêu chuẩn (Ashton, 2002).
62
- Ba khía được bắt vào ban ngày khi triều cạn, lộ bề mặt nền rừng để bảo đảm không chịu ảnh hưởng của yếu tố môi trường. Mẫu được cố định ở 40C trong thùng đá và đưa về bảo quản trong tủ đông để định danh.
- Định danh theo tài liệu “Crab of China Sea” của Dai, A.I. et al. (1991),
“Fiddler crabs of the world Ocypodidae: genus Uca” của Crane (1976) và hiệu chỉnh tên khoa học theo tài liệu “An annotated checklist of extant Brachyuran crab of the world” của Peter, P. K. Ng et al. (2008). Mô tả Ba khía, nhận dạng các nhóm Ba khía theo các đặc điểm màu sắc,kích thước chiều dài, chiều rộng, hình dạng mai, càng, chiều dài, chiều rộng ức, bụng, ngón kẹp… (Peter, P. K.
Ng. et al. 2008).
* Bố trí thí nghiệm ăn lá của Ba khía
- Mẫu lá: được cân trọng lượng trước, đo chiều dài, rộng của lá. Chọn những lá đồng cỡ. Mỗi mẫu lá sử dụng kéo cắt dọc theo gân chính của lá chia làm đôi (cắt bỏ phần gân chính), một phần được dùng cho Ba khía ăn, một phần làm mẫu đối chứng, cân xác định trọng lượng tươi trước khi thí nghiệm.
- Ba khía: qua khảo sát chọn khu vực Ba khía phân bố nhiều trong rừng ngập mặn, đem cân trọng lượng, chọn những con đực và cái có kích cỡ tương đương nhau. Để sau thời gian 24 giờ cho ba khía thải hết phân từ việc ăn thức ăn ngoài môi trường, tiến hành thí nghiệm.
- Khung nuôi: chuẩn bị các khung lưới (40 cm x 40 cm x 40 cm). Đáy có lót 1 lớp gỗ mỏng. Thí nghiệm để trực tiếp trên nền rừng tự nhiên, ngập nước bán liên tục, dưới tán rừng ngập mặn, thủy triều lên xuống 02 lần/ngày, lúc thủy triều lên cao ngập đáy khung 2 – 6 cm.
* Thí nghiệm 1: Xác định loại lá ưa thích của Ba khía
Bố trí thí nghiệm có 4 nghiệm thức (NT), mỗi NT có 3 lần lặp lại, theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên. Trong đó, NT2 và NT4 làm NT đối chứng của các NT1 và NT3:
NT1: Ba khía + hỗn hợp lá xanh (Đước, Mấm, Vẹt).
NT2 (đối chứng): hỗn hợp lá xanh (Đước, Mấm, Vẹt) (không Ba khía).
NT3: Ba khía + hỗn hợp lá vàng (Đước, Mấm, Vẹt).
NT4 (đối chứng): hỗn hợp lá vàng (Đước, Mấm, Vẹt) (không Ba khía).
Trong đó, mẫu lá: chọn những loại lá đồng cỡ (chiều dài: lá Đước 10 cm, lá Mấm dài 5 cm, lá Vẹt 8 cm; chiều rộng: lá Đước 3 cm, lá Mấm 3 cm, lá Vẹt 2 cm). Ba khía: chọn những con đực và cái có kích cỡ tương tự nhau (170 - 190 g. Kích thước mai: 4,5 cm x 2,5 cm).
- Thí nghiệm được thực hiện trong các khung nuôi ngoài môi trường tự nhiên, các lá thí nghiệm được cân trở lại sau 12 giờ, 24 giờ và 48 giờ để khảo sát khả năng lựa chọn các loài lá cây rừng ngập mặn của Ba khía. Bảo quản trong bọc nylon kín.
63
* Thí nghiệm 2: Xác định các tình trạng lá chọn lựa ăn của Ba khía
Bố trí thí nghiệm có 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 3 lần lặp lại, bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên. Trong đó, NT2, NT4, NT6 làm nghiệm thức đối chứng của các NT1, NT3 và NT5.
NT1: Ba khía + lá Đước đôi màu vàng và lá Đước đôi màu xanh.
NT2 (đối chứng): Lá Đước đôi màu vàng, lá xanh (không Ba khía).
NT3: Ba khía + lá Mấm trắng màu vàng, lá Mấm trắng màu xanh.
NT4 (đối chứng): Lá Mấm trắng màu vàng, lá Mấm trắng màu xanh (không Ba khía).
NT5: Ba khía + lá Vẹt tách màu xanh, lá Vẹt tách màu vàng.
NT6 (đối chứng): lá Vẹt tách màu xanh, lá Vẹt tách màu vàng (không Ba khía).
Mẫu lá được chọn với những loại lá đồng cỡ. Sử dụng thước để đo dài, rộng tương đối và trung bình của lá (chiều dài lá Đước 10 cm, lá Mấm 5 cm, lá Vẹt 8 cm; chiều rộng lá Đước 3 cm, lá Mấm 3 cm, lá Vẹt 2 cm). Ba khía chọn những các các thể có kích cỡ tương tự nhau (150 - 170 g, kích thước mai: 45 mm x 2,5 mm) (Macintosh et al., 2002).
- Thí nghiệm được thực hiện trong các khung nuôi ngoài môi trường tự nhiên. Các lá thí nghiệm được cân trở lại sau 12 giờ, 24 giờ và 48 giờ để khảo sát khả năng lựa chọn các tình trạng lá rừng ngập mặn của Ba khía (Ashton, 2002).
Mẫu được bảo quản trong bọc nylon kín.
* Thí nghiệm 3: Xác định hàm lượng C, N, P trong phân Ba khía sau khi cho ăn các loại lá khác nhau.
Thí nghiệm thực hiện có 6 NT, mỗi NT có 3 lần lặp lại nhưng cho ăn từng loại lá khác nhau:
NT1: Ba khía + lá Đước đôi màu vàng.
NT2: Ba khía + lá Đước đôi màu xanh.
NT3: Ba khía + lá Mấm trắng màu vàng.
NT4: Ba khía + lá Mấm trắng màu xanh.
NT5: Ba khía + lá Vẹt tách màu xanh.
NT6: Ba khía + lá Vẹt tách màu vàng.
- Thu mẫu phân Ba khía để đánh giá dinh dưỡng đóng góp vào đất rừng.
Sau 48 giờ bố trí thí nghiệm, Ba khía ăn các loại lá khác nhau nên thải ra phân đều có hàm lượng dinh dưỡng khác nhau. Tiến hành thu mẫu phân trên miếng gỗ để tiến hành phân tích các chỉ tiêu dinh dưỡng C, N, P. Để khô trong điều kiện bình thường, sau đó bảo quản trong bọc nylong kín. Thí nghiệm có 6 NT x 3 lặp lại = 18 mẫu phân.
64
* Xác định trọng lượng lá được Ba khía ăn
Mẫu lá được cân trọng lượng trước và sau khi cho Ba khía ăn trong các thí nghiệm. Sau đó, xác định khối lượng lá được ba khía ăn trong thí nghiệm theo công thức:
Z = X – Y Trong đó:
X: trọng lượng của lá mất đi tự nhiên sau thí nghiệm (mẫu đối chứng).
Y: trọng lượng của lá sau thí nghiệm (mẫu lá làm thí nghiệm).
Z: trọng lượng của mẫu lá do Ba khía ăn.
X = dwađc – dwbđc (sử dụng cho mẫu đối chứng).
Y = dwaTN – dwbTN (sử dung cho mẫu thí nghiệm).
dwađc : trọng lượng trước thí nghiệm của mẫu lá đối chứng dwbđc : trọng lượng sau thí nghiệm của mẫu lá đối chứng dwaTN : trọng lượng trước thí nghiệm của mẫu lá thí nghiệm dwbTN : trọng lượng sau thí nghiệm của mẫu lá thí nghiệm
* Phân tích mẫu
Thành phần dinh dưỡng trong các mẫu lá
- Xác định tổng lượng chất hữu cơ C. Lá được tro hóa khô ở 550oC để xác định hàm lượng C và quy ra chất hữu cơ theo tỉ lệ 1,724%.
- Xác định N tổng số: vô cơ bằng hỗn hợp H2SO4 – Salicyllic, H2O2 và sau đó chưng cất theo phương pháp Kjeldahl.
- Tính tỉ lệ
N N C
C %
/ %
- Phân tích tổng Lân (TP): vô cơ bằng hỗn hợp H2SO4 – Salicyllic, H2O2
và sau đó chưng cất theo phương pháp so màu.
Hàm lượng dinh dưỡng trong phân Ba khía
Mẫu phân và phân mang về chuyển toàn bộ mẫu cho vào khay nhựa sạch, để khô trong không khí thoáng mát, sạch (không phơi trực tiếp ngoài nắng).
Những mẫu đem nghiền mịn trong cối sứ bằng chày sứ bọc cao su, thao tác nhẹ nhàng. Mẫu sau khi nghiền trộn đều và đựng trong túi nylon, ghi nhãn và ký hiệu. Sau đó, tiến hành phân tích (Ngô Ngọc Hưng, 2004).
- Xác định tổng lượng N: vô cơ với H2SO4dd – CuSO4 – Se và chưng cất theo phương pháp Kjeldahl.
- Xác định tổng lượng chất hữu cơ C: phân tích theo phương pháp Walkley- Black.
- Xác định tỉ lệ C/N.
- Phân tích tổng Lân (TP): vô cơ với H2SO4(đậm đặc) – HClO4, hiện màu của phosphomolybdate, so màu trên máy quang phổ.
65
* Phân tích thành phần đạm trong lá cây rừng ngập mặn tại Cồn Trong Ông Trang
Mẫu lá cây được thu hai đợt vào mùa mưa (tháng 10 năm 2011) và mùa khô (tháng 3 năm 2012).
- Phương pháp thu mẫu
Ở mỗi khu vực nghiên cứu, lá cây được thu hai mẫu, bao gồm: lá xanh (lá vẫn còn ở trên cây), lá vàng (lá đã già và rụng xuống nền rừng nhưng chưa phân hủy).
Mẫu lá cây sau khi lấy xong được cho vào túi nylon và đặt mẫu vào thùng chứa nước đá, sau khi về phòng thí nghiệm phải cho ngay mẫu vào tủ lạnh để bảo quản (Ngô Ngọc Hưng, 2004).
- Phương pháp xử lý mẫu
Mẫu sau khi thu được rửa sạch bằng nước thường cho sạch tất cả đất và bụi bám trên bề mặt lá cây, sau đó rửa sạch lại bằng nước cất hoặc nước khử khoáng. Mẫu sau khi rửa sạch được cho vào túi giấy, sấy ở nhiệt độ 60oC trong 48 giờ. Mẫu sau khi khô sẽ được nghiền mịn bằng máy nghiền mẫu thực vật.
Sau khi nghiền, mẫu được rây qua rây 1 mm. Mẫu được trữ trong túi nylon bảo quản nơi khô mát (Ngô Ngọc Hưng, 2004).
- Phương pháp phân tích đạm tổng: Đạm tổng trong lá cây được phân tích theo phương pháp chuẩn tại Bộ môn Khoa học đất, Trường Đại học Cần Thơ.