Phương pháp xác định các chỉ tiêu đánh giá phẩm chất tinh dịch

2.3. Phương pháp nghiên cứu

2.3.1. Phương pháp xác định các chỉ tiêu đánh giá phẩm chất tinh dịch

- Tinh bò được khai thác bằng âm đạo giả sau khai thác được kiểm tra bằng cách nhìn vào ống nghiệm đựng tinh để xác định số ml tinh dịch (V) của mỗi lần khai thác.

+ Màu sắc: các chỉ tiêu này được xác định bằng phương pháp cảm quan các cơ quan thị giác (nhìn).

2.3.1.2. Hoạt lực của tinh trùng A (%)

Chỉ tiêu này được xác định bằng phương pháp quan sát qua kính hiển vi với độ phóng đại 200 lần, cụ thể:

Dùng micropipét hút 0,1 ml tinh dịch + 0,09 ml dung dịch nước muối sinh lý nhỏ phiến kính khô, sạch, ấm (350C - 370C). Dùng lamen đậy lên tinh dịch quét đều bốn cạnh của lamen. Tiến hành soi trên kính hiển vi với độ phóng đại 200 lần, quan sát trên toàn vi trường xác định tỷ lệ tinh trùng tiến thẳng. Tiến hành ước lượng tỷ lệ phần trăm số tinh trùng tiến thẳng so với tổng số tinh trùng có trong vi trường mà ta quan sát được. Việc đánh giá cho điểm được tiến hành theo thang điểm 10 của Milovanov

2.3.1.3. pH tinh dịch

Đo pH tinh dịch bằng giấy đo pH (1-14) của hãng Merck-Đức: Dùng đũa thủy tinh lấy 1 giọt dinh dịch nhỏ lên giấy pH và sau 3 giây thì so sánh màu của giấy với bảng màu chuẩn.

2.3.1.4. Tỷ lệ tinh trùng sống

Theo phương pháp của Milovanov như sau: Nhỏ 1 giọt tinh dịch lên lam kính + 2 giọt Eosin 5%, đảo nhẹ rồi sau đó nhỏ 4 giọt Nogrosin 10%. Đảo nhẹ nhàng, để ấm 370C trong 30 giây. Lấy 1 giọt phết kính dàn mỏng đều đưa lên kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần đếm tổng số 500 tinh trùng rồi tính tỷ lệ

%, bằng phép số học thông thường. Tinh trùng chết là những tinh trùng bắt màu đỏ Eosin.

2.3.1.5. Nồng độ tinh trùng trong tinh dịch (C – tỷ/ml)

Sử dụng phương pháp xác định nồng độ tinh trùng bằng buồng đếm Newbouer: Dùng ống pha loãng bạch cầu để hút tinh dịch đến vạch 0,5, hút tiếp dung dịch NaCl 0,3% đến vạch 11. Bịt 2 đầu ống pha loãng bằng ngón tay trái và ngón tay giữa lắc nhẹ 5 - 6 lượt cho tinh dịch trộn đều với dung dịch NaCl mức độ pha loãng 200 lần. Sau đó bỏ đi 5 - 6 giọt ban đầu, nhỏ hỗn hợp này vào trong buồng đếm sau đó đưa lên kính hiểm vi có độ phóng đại 200 lần để đếm tinh trùng.

Cách đếm: Xác định ô đếm: 5 ô lớn, 4 ô ở 4 góc và 1 ô ở giữa đếm ở từng ô một và ghi cụ thể, dựa vào đầu tinh trùng để đếm, cách đếm trong một ô có 16 ô con, đếm theo hình zíc zắc.

Xác định số tinh trùng trong 5 ô lớn bằng 5 x 16 = 80 ô con là n và xác định nồng độ tinh trùng tính theo công thức C = n. 106/1 ml (mỗi một tinh trùng đại diện cho một triệu tinh trùng có trong tinh dịch).

2.3.1.6. Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K)

Sử dụng phương pháp Chemineau (1991). Lấy một giọt tinh dịch nhỏ phiến kính. Đặt chiều rộng lam kính trùng khít với cạnh ngang tinh dịch và nghiêng phiến kính A một góc 450, kéo xuống nhẹ một lần sao cho tinh dịch dàn đều trên phiến kính A. Để phiến kính có tinh dịch dàn đều tự khô trong không khí hoặc hơ nhẹ trên ngọn lửa đèn cồn để tinh trùng dính chặt trên lam kính, cố định 2 – 3 phút sau đó cho vòi nước chảy nhẹ vào lam kính (tránh tinh trùng bị trôi mất), vẩy khô. Dùng Methylen 5% hoặc đá Fucxin 5% hoặc Rosa bengad 5% nhỏ lên phiến kính để trong 5 phút. Đặt phiến kính lên kính hiểm vi với độ phóng đại 400 lần, đếm số tinh trùng kỳ hình và tổng số tinh trùng có trong vi trường (Đếm hết tinh trùng trong vi trường này xong mới chuyển sang vi trường khác cho đủ tổng số tinh trùng trong khoảng 300 – 500)

K(%)= Số tinh trùng kỳ hình

X 100 Tổng số tinh trùng đếm được

2.3.1.8. Tổng số tinh trùng tiến thẳng trong tinh dịch (VAC) Xác định bằng cách nhân tích số của V, A và C.

2.3.1.9. Tỷ lệ các lần lấy tinh đạt tiêu chuẩn (%)

Ghi chép tất cả các lần lấy tinh và tính toán bằng phương pháp số học thông thường:

Tỷ lệ các lần lấy tinh

đạt tiêu chuẩn (%) = Số lần lấy tinh đạt tiêu chuẩn

x 100 Tổng số lần khai thác