2.3. Phơng pháp nghiên cứu
2.3.5. Phơng pháp đánh giá chất lợng sản phẩm
a. Xác định nhanh bằng phơng pháp quang phổ [27]
* Nguyên tắc: Với các chất màu, độ hấp thụ màu của dung dịch ở một bớc sóng nào đó luôn phụ thuộc vào nồng độ dung dịch đó theo tỷ lệ nhất định.
* Tiến hành: Sử dụng pipet tự động lấy 100 àl dầu gấc, sau đó cho vào bình định mức 25 ml. Định mức trong bình 25 ml bằng hỗn hợp dung môi hexan và axeton (tỷ lệ 3: 2). Hút 4 ml dung dịch trong bình định mức và 12 ml hỗn hợp dung môi hexan và axeton (tuỳ theo hệ số pha loãng), lắc đều sau đó
đem đi đo ở máy so màu Thermospectro ở các bớc sóng khác nhau (chú ý:
làm trong bình tối màu để tránh sự phân huỷ carotenoid). Với các mẫu bảo quản ở nhiệt độ lạnh cần chú ý là do hàm lợng carotenoid trong dầu gấc rất lớn, chúng dễ dàng kết tinh thành các tinh thể có màu đỏ sẫm. Vì vậy, trớc khi sử dụng để phân tích carotenoid, ta cần bỏ vào tủ ấm ở nhiệt độ 30 - 32 0C
để làm tan giá tinh thể carotenoid.
* Công thức tính Carotenoid
- Carotenoid (mg/100 ml) = ( 0,216.A663 - 1,22.A645 - 0,304.A505
+ 0,425.A453) ì Hệ số pha loãng
* Công thức tính Lycopen
Lycopen (mg/ 100 ml) = ( 0,0458.A663 + 0,204.A645 + 0,372.A505 -0,0806.A453) ì Hệ số pha loãng Trong đó:
A663 là giá trị đo ở bớc sóng 663 nm A645 là giá trị đo ở bớc sóng 645 nm A505 là giá trị đo ở bớc sóng 505 nm A453 là giá trị đo ở bớc sóng 453 nm
b. Phơng pháp sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Cột phân tích RP 18 (250 mm x 4 mm, 5 àm)
Detector UV-VIS, bớc sóng phát hiện 454 nm, v = 10 àl.
Dung dịch mẫu chuẩn có nồng độ: 0,0092mg/ml
Bảng 2.1. Chơng trình dung môi phân tích beta-caroten và lycopen
Pha động Acetonitril EtOH
0 - 10 phót 80 50- 20 50-
10 - 13 phót 50 50
13 - 15 phót 50 80- 50 – 20
15 – 20 phót 80 20
2.3.5.2. Phơng pháp xác định thành phần axit béo theo AOCS Ce1e-91
Chúng tôi este hóa mẫu bằng methanol với xúc tác là BF3 để tạo ra các methyl este của các axit béo tơng ứng cần xác định. Sau đó phân tích trên máy sắc kỹ khí detector FID. Chơng trình chạy máy sắc ký:
- Nhiệt độ detector FID: 2900C - Tốc độ khí H2: 35ml/phút - Không khí: 400ml/phút
- Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 2500C
- Chơng trình nhiệt độ lò: 600C giữ 2 phút, tăng 600C/phút đến 2000C giữ 3 phút, tăng 20C/phút đến 2500C giữ 10 phút.
- Tốc độ dòng khí mang N2: 1ml/phút, bơm mẫu theo kiểu chia dòng với tỷ lệ 25:1, thể tích bơm mẫu 1àl.
2.3.5.3. Phân tích vitamin E bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Cột phân tích: Lichrospher RP 18, kích thớc (250 mm x 4 mm, 5 àm) Nhiệt độ phân tích: 400C
Detector DAD, bớc sóng phát hiện 230nm
Pha động: hỗn hợp dung môi Acetonitril/nớc tỷ lệ 70/30 (v/v) Tốc độ dòng: 0,8ml/phút; Thể tích mẫu tiêm: 20àl
2.3.5.4. Xác định chỉ số Axit
Chỉ số axit là số mg KOH cần thiết để trung hoà các axit tự do có mặt trong 1 gam chÊt bÐo.
Dầu trong quá trình thuỷ phân tự nhiên sinh ra các axit béo tự do và glycerol. Chỉ số axit là một trong những phơng pháp hữu hiệu để xác định độ h hỏng của nguyên liệu bởi quá trình thuỷ phân.
* Tiến hành:
- Cân 3 5 g mẫu vào bình tam giác, thêm vào đó 50 ml dung môi hỗn - hợp đã đợc trung hoà, lắc cho tan dầu.
- Cho vào bình 5 giọt chỉ thị phenolphthalein và chuẩn độ bằng dung dịch KOH 0,1N đến khi xuất hiện màu hồng nhạt. Trờng hợp dầu xẫm màu phải dùng chất chỉ thị alkali xanh 6B ( khoảng 1 ml).
* Kết quả:
AV =
m V N× 1× , 56
Trong đó:
AV: Chỉ số axit (mg KOH/g chất béo)
N: Nồng độ đơng lợng gam của dung dịch KOH
V: Thể tích dung dịch KOH đã dùng khi chuẩn mẫu ( ml) m: Khối lợng mẫu thử (g)
2.3.5.5. Xác định chỉ số Peroxyt
Chỉ số peroxit là số gam iod đợc giải phóng ra khi cho dung dịch iodua kali tác dụng với 100 g chất béo dới tác dụng của các peroxit có trong dầu gấc. Chỉ số peroxit đặc trng cho sự ôi khét của dầu gấc.
* Tiến hành: Cân mẫu vào bình tam giác 250 ml đã sấy khô trớc. Lợng mẫu cân đợc khuyến cáo nh sau:
Bảng 2.2. Chỉ số peroxyt và lợng mẫu dự kiến cân
Chỉ số peroxit dự kiến (meq O2/ kg) Khối lợng mẫu (g)
0 12- 5 - 2
12 20- 2 - 1,2
20 30- 1,2 - 0,8
30 50- 0,8 - 0,5
50 90- 0 -,5 0,3
- Cho vào bình chứa 25 ml dung môi peroxit (chloroform:axit axêtic = 2:3) và lắc cho hoà tan dầu vào dung môi. Chuẩn bị dung dịch KI bão hoà bằng cách pha KI tinh thể vào nớc cất theo tỷ lệ 10 g KI/ 6 ml nớc cất.
- Thêm vào bình chứa dung môi và mẫu 1 ml dung dịch KI bão hoà mới pha. Đậy ngay nút lại và lắc đều bình trong 1 phút. Để bình chứa mẫu 5 phút trong bóng tối, sau đó thêm 75 ml nớc cất và chuẩn lợng iod thoát ra bằng dung dịch natri thiosulfat với sự có mặt của hồ tinh bột.
- Đồng thời tiến hành làm mẫu trắng trong những điều kiện tơng tự.
* Kết quả:
PV = − 0 ×5 P
V
V (milimol peroxyt/ kg)
PV = − 0 ×10 P
V
V (mili đơng lợng oxy hoạt động/ kg) (meqO2/ kg)
PV = V−V0×80
(microgam oxy hoạt động/ g) Trong đó:
PV: Chỉ số peroxit
V: Thể tích natri thiosulfate 0,01 N đã sử dụng cho mẫu phân tích V0: Thể tích natri thiosulfate 0,01 N đã sử dụng cho mẫu trắng P : Trọng lợng mẫu phân tích (g)
chơng ba: kết quả và thảo luận