CHƯƠNG I. TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.2. Phương pháp theo dõi các chỉ tiêu nghiên cứu
2.3.2.1. Theo dõi các chỉ tiêu môi trường.
- Nhiệt độ nước trong quá trình thí nghiệm được theo dõi hàng ngày, mỗi ngày đo 2 lần (7h và 14h) bằng nhiệt kế thuỷ ngân.
- Oxi hoà tan đo bằng bộ các dung dịch thử sera của Đức.
- pH được xác định bằng các dung dịch thử sera của Đức, mỗi ngày đo 2 lần (7h và 14h).
- NH3 cũng được kiểm tra bằng các dung dịch thử sera của Đức, kiểm tra NH3
mỗi ngày 1 lần
- Độ kiềm được xác định bằng các dung dịch thử sera của Đức, mỗi ngày đo 1 lần.
- Độ mặn xác định bằng ống đo tỉ trọng kế, mỗi ngày đo 1 lần.
2.3.2.2. Theo dõi tốc độ tăng trưởng:
+ Tốc độ tăng trưởng về khối lượng (Daily Weight Gain) Phương pháp xác định khối lượng của cá
Khối lượng của cá được kiểm tra 30 ngày 1 lần, dùng cân trọng lượng 1 kg, sai số 2 (g)
Dùng vợt bắt ngầu nhiên 10 con, đem cân để xác định khối lượng, số lượng mẫu mỗi công thức kiểm tra là 30 mẫu.
1 2
1 2
T T
W DWG W
−
= −
Trong đó
W2 : Khối lượng trung bình tại thời điểm T2 (g) W1 : Khối lượng trung bình tại thời điểm T1 (g)
DWG: Tốc độ tăng trưởng theo khối lượng(g/con/ngày)
• Tốc độ tăng trưởng về chiều dài (Daily Length Gain) Phương pháp xác định chiều dài của cá
Chiều dài của cá được tiến hành đo 30 ngày 1 lần, bằng thước đo có sai số 1 (mm).
Dùng vợt bắt ngẫu nhiên 10 con, đem đo để xác định chiều dài, số lượng mẫu mỗi công thức kiểm tra là 30 mẫu.
1 2
1 2
T T
L DLG L
−
= −
Trong đó
L2 : Chiều dài trung bình tại thời điểm T2 (g) L1 : Chiều dài trung bình tại thời điểm T1 (g)
DLG: Tốc độ tăng trưởng theo chiều dài (cm/con/ngày)
• Tỷ lệ sống (Survival rate)
Kiểm tra tỉ lệ sống qua các tháng nuôi bằng công thức:
Số cá sống
SR(%) = x 100 Số cá thả ban đầu
SR (%): Tỉ lệ sống 2.3.2.3. Các chỉ tiêu về nuôi vỗ.
• Nghiên cứu về đặc điểm sinh sản cá Ong bầu:
- Tuổi và khối lượng thành thục lần đầu: Xác định khối lượng và tuổi cá đạt tuyến sinh dục giai đoạn IV lần đầu tiên.
Tuổi của cá được kiểm tra bằng phương pháp đo vảy: Nguyên tắc xác định tuổi và sự phát triển của cá dựa vào đặc tính của vảy và xương có cấu tạo thành lớp dưới dạng những vòng luân phiên gồm những bản mỏng và gai xương. Mỗi vòng xác định như vảy hoặc trên xương tương ứng với mỗi một năm sống của cá. Để xác định tuổi của vảy cá trước tiên giữ gìn vảy ở nơi khô ráo, phải rửa vảy trong nước Amoniac hoặc trong nước lã và dùng bàn chải mềm để đánh tan chất nhờn trên vảy cá sao cho vảy cá nhìn trong suốt. Sau đó dùng kính hiển vi để đọc tuổi của cá hoặc dùng kính lúp[9].
- Khối lượng của cá được kiểm tra bằng cân điện tử.
- Đặc điểm hình thái bên ngoài và tổ chức tế bào học vào thời điểm phát dục của tuyến sinh dục
Dựa vào hình thái bên ngoài có thể kiểm tra khả năng phát dục của cá
Dựa vào tổ chức tế bào học: Có thể quan sát tuyến sinh dục dựa trên phương pháp mô học. Quy trình làm một tiêu bản của cá bao gồm các bước cơ bản sau:
Xử lý mẫu: Mẫu mô thu được từ cá sống hay mới chết, kích thước mẫu khoảng 0,5 cm3 . Mẫu được cố định trong formalin đệm trung tính 10% hay dung dich Bouin. Sau khi cố định 24 - 48 (h) mẫu được khử nước qua một loạt dung dịch alcohol với nồng độ cồn tăng dần đến 100%. Mẫu được làm sạch cồn trong các dung dịch toluên, benzen hay xylen trước khi đúc khối với paraffin nóng (58-60 0C).
Cắt mẫu: Mẫu mụ trong khối paraffin đặc cắt thành cỏc phiến mỏng (5-7àm) với một microtome. Các phiến mô được đặt trên lamen, làm sạch paraffin và tái khử trước khi đem nhuộm.
Nhuộm mẫu: Sử dụng thuốc nhuộm Hematoxylin và Eosin (H&E) thường được dùng kết hợp để nhận biết các cấu trúc tế bào và ngoại bào. H&E được sử dụng nhiều nhất vì khả năng bộc lộ một giới hạn rộng các thành phần khác nhau của mô. Hematoxylin nhuộm nhân tế báo và các cấu trúc có tính acid có màu xanh. Ngược lại eosin nhuộm các protein nguyên sinh chất và các cấu trúc ngoại bào có hồng đến đỏ. Các phương pháp nhuộm chuyên biệt được dùng cho việc nhận biết các thành phần đặc trưng
Giữ tiêu bản: Mẫu mô đã nhuộm được xử lý với alcohol (70, 90 và 100%) để loại bỏ nước và các chất, làm sạch mẫu. Mẫu mô được phủ một lớp lamelle và dán keo xung quanh lamelle[12].
Cá đực kiểm tra khi thấy sẹ bắt đầy chảy ra. Cá cái kiểm tra khi thấy trứng từ lỗ sinh dục.
• Nghiên cứu về quá trình tích lũy và chuyển hóa vật chất dinh dưỡng
- Độ béo Fulton (%) :
- Độ béo Clark (%) :
Trong đó: Q : Độ béo Fulton Pg : Trọng lượng toàn thân (g) P0(g) : Trọng lượng cá bỏ nội quan (g)
L0 : Chiều dài từ mõm đến cuối phần phủ vẩy trên vây đuôi (cm)
3 0
100 . l Pg Q=
) 100 ( 0
3 0
0 x
l P g Q =
- Ball mỡ: Theo thang 6 bậc từ Ball0 đến Ball5 (Pravdin, 1973)[9].
Ball0: Ruột không có mỡ, đôi khi ruột non có lớp màng trắng mỏng bao phủ, giữa các mẫu của ruột non thấy rõ các sợi của màng này.
Ball1: Có một dải mỡ mỏng giữa phần thứ hai và thứ ba của ruột non, đôi khi mép trên phần thứ hai có một dãi mỡ rất hẹp đứt quãng.
Ball2: Có một dải mỡ hẹp tương đối dày ở giữa phần thứ hai và thứ ba của ruột non, ở mép trên phần thứ hai có dãi mỡ hẹp liên tục không dứt quãng, ở mép dưới phần thứ ba có chỗ thấy rõ mỡ nằm thành những phần nhỏ riêng biệt.
Ball3: Có dải mỡ rộng ở phần thứ hai và thứ ba của ruột. Ở phần ruột cuối hậu môn, trong đa số các trường hợp đều có lớp mỡ mỏng.
Ball4: Ruột hầu như hoàn toàn bị mỡ bao phủ, chỉ trừ những chỗ trống mà qua đó ta có thể nhìn thấy ruột.
Ball5: Tất cả ruột đều bị bao phủ bởi lớp mỡ dày, không có chỗ trống nào, những u mỡ ở hai bên mấu ruột rất lớn.
- Tích lũy protein, lipid ở cơ theo giai đoạn IV của phát triển tuyến sinh dục: Gởi mẫu phân tích ở Khoa Chăn nuôi Thú y đại học Nông Lâm Huế.