Việc chẩn đoán sớm BKVN sau ghép thận ban đầu còn gặp nhiều khó khăn và thách thức do triệu chứng lâm sàng không đặc hiệu, nhiều trường hợp có thể nhầm với giai đoạn thải ghép cấp khi sử dụng các thuốc ức chế miễn dịch chống thải ghép.
Quy trình chẩn đoán được nhiều trung tâm hiện nay thực hiện bao gồm xét nghiệm nước tiểu để tìm “tế bào bẫy” (decoy cell), thể "Haufen" hoặc định lượng BKV trong nước tiểu và trong máu bằng kỹ thuật real-time PCR [71]. Thể Haufen có thể phát hiện được bằng kính hiển vi điện tử. Việc xác định thể Haufen được báo cáo liên quan đến BKVN có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, với giá trị chẩn đoán dương tính (positive predictive value, PPV) và giá trị chẩn đoán âm tính (negative predictive value, NPV) đều trên 97% [37]. Nước tiểu có thể được sàng lọc cho BKV bằng phương pháp tế bào học hoặc định lượng BKV-DNA. Các tế bào biểu mô ống thận có nhiễm BKV được đổ vào nước tiểu - tế bào decoy (Hình 1.3). Trong so sánh tế bào học nước tiểu với PCR nước tiểu, tế bào decoy có độ nhạy chỉ 25% và độ đặc hiệu 84% đối với BKVN so với PCR nước tiểu đạt độ nhạy, độ đặc hiệu tương tứng là 100% và 78% [33]. Tuy nhiên, những kết quả ban đầu này cần được nghiên cứu
trên số mẫu lớn hơn, và nếu được kiểm chứng thì đây có thể là một phương pháp không xâm lấn, có chi phí thấp trong sàng lọc BKVN [71].
1.4.2. Sinh thiết thận
Hiện nay xét nghiệm sinh thiết mô bệnh học (xác định bằng hóa mô miễn dịch, in situ hybridization hay PCR) kèm theo bằng chứng của viêm thận kết mạc hoặc creatinine huyết thanh tăng cao vẫn được coi là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán BKVN. Tuy nhiên, hiện nay xét nghiệm sinh thiết mô bệnh học (xác định bằng hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ hay PCR) kèm theo bằng chứng của viêm thận kẽ hoặc creatinine huyết thanh tăng cao vẫn được coi là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán BKVN.
Xét nghiệm được khuyến cáo thực hiện ít nhất 2 lần lặp lại, hạn chế tối đa sai số trong lấy mẫu và ưu tiên mẫu có chứa các mô tế bào tủy thận. Do đó, khi có kết quả BKV trong máu kèm creatinine huyết thanh tăng cao hoặc khi tình trạng virus trong máu cao dai dẳng mặc dù đã giảm ức chế miễn dịch, bệnh nhân nên được chỉ định xét nghiệm sinh thiết mô bệnh học [21]. Chiến lược này dựa trên hiện tượng BKV trong máu được ghi nhận giảm có giá trị trong vòng 6 tháng sau khi giảm ức chế miễn dịch. Như vậy, việc theo dừi thường xuyờn sự hiện diện của BKV trong mỏu cú vai trũ rất quan trọng trong quản lý và theo dừi điều trị bệnh nhõn sau ghộp thận [24], [68].
Hình 1. 3. Các tế bào decoy trong nước tiểu [71].
1.4.3. Chẩn đoán sinh học phân tử 1.4.3.1. Dấu ấn sinh học Biomarker
Ngoài ra, dấu ấn sinh học mRNA trong BKVN cũng đang được quan tâm.
Trong cụng bố của Ding và cộng sự, giỏ trị là 6,5 ì 105 VP1 mRNA/ng RNA được thiết lập như một ngưỡng dự báo của BKVN [85]. Ngưỡng này đã được xác nhận trong một nghiên cứu khác, 12 trong số đó đã được kiểm tra sinh thiết BKVN [72].
mRNA granzyme B nước tiểu và mức mRNA protease inhibitor -9 cũng được chứng minh là dự báo về sự suy giảm chức năng ghép, cho thấy các nghiên cứu mới trong tương lai. Cơ sở dữ liệu mRNA nước tiểu có thể cung cấp thêm thông tin chẩn đoán và tiờn lượng ngoài sinh thiết thận trong tương lai khi cú những căn cứ rừ ràng hơn [71].
1.4.3.2. Realtime PCR
Phát hiện BKV trong huyết tương bằng kỹ thuật real-time PCR rất nhạy và đặc hiệu cho BKVN. Tùy thuộc vào nghiên cứu, độ nhạy có thể đạt 100% và độ đặc hiệu là khoảng 90%, với PPV là 50% và NPV là 100%, vượt trội hơn so với việc phát hiện BKV-DNA trong nước tiểu bằng xét nghiệm tìm tế bào decoy hoặc PCR.
Đây là phương pháp sàng lọc lý tưởng ở hầu hết các trung tâm ghép tạng [71]. Đồng thời, BKV máu rò rỉ trong nước tiểu là phổ biến và có thể xảy ra ở 30% số người ghép thận [49]. Với ưu điểm của real-time PCR huyết tương và giá trị tiên đoán của nó lớn hơn cho BKVN, không cần thực hiện xét nghiệm nước tiểu BKV trước khi xét nghiệm huyết tương [71]. Tuy nhiên, tương tự như các xét nghiệm real-time PCR trong theo dừi tải lượng EBV và CMV khỏc, hiện cú sự khỏc biệt đỏng kể trong cách thức phát triển kỹ thuật giữa các phòng thí nghiệm dẫn đến khó so sánh kết quả giữa các phòng thí nghiệm khác nhau cũng như xác định một giá trị ngưỡng trong chẩn đoán và điều trị BKVN [24]. Vấn đề này đã được Bechert và cộng sự nghiên cứu chi tiết khi so sánh kết quả giữa các kỹ thuật real-time PCR cũng như các bộ mồi đã công bố [63]. Tuy nhiên, Hirsch và cộng sự xác định rằng mức BKV huyết tương > 104 copy/ml trong hơn 4 tuần có liên quan đến sự xuất hiện của BKVN với độ đặc hiệu 93% [34] và giá trị này cũng được nêu trong các hướng dẫn và khuyến cáo gần đây [32], [68]. Khuyến nghị này cũng đang được các trung tâm
ghép tạng sử dụng và cùng khảo nghiệm, sự thay đổi được xác nhận là ít nhất 1 log nồng độ [24].
Tuy nhiên, hiện nay xét nghiệm sinh thiết mô bệnh học (xác định bằng hóa mô miễn dịch, lai tại chỗ hay PCR) kèm theo bằng chứng của viêm thận kẽ hoặc creatinine huyết thanh tăng cao vẫn được coi là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán BKVN.
Xét nghiệm được khuyến cáo thực hiện ít nhất 2 lần lặp lại, hạn chế tối đa sai số trong lấy mẫu và ưu tiên mẫu có chứa các mô tế bào tủy thận. Do đó, khi có kết quả BKV trong máu kèm creatinine huyết thanh tăng cao hoặc khi tình trạng virus trong máu cao dai dẳng mặc dù đã giảm ức chế miễn dịch, bệnh nhân nên được chỉ định xét nghiệm sinh thiết mô bệnh học [21]. Chiến lược này dựa trên hiện tượng BKV trong máu được ghi nhận giảm có giá trị trong vòng 6 tháng sau khi giảm ức chế miễn dịch. Như vậy, việc theo dừi thường xuyờn sự hiện diện của BKV trong mỏu cú vai trũ rất quan trọng trong quản lý và theo dừi điều trị bệnh nhõn sau ghộp thận [24], [68].