Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hàng ngày lấy mẫu phõn tƣơi của lợn để xột nghiệm tỡm trứng giun đũa và theo dừi biểu hiện của lợn gõy nhiễm, theo dừi thời gian bắt đầu thải trứng và số lƣợng trứng giun đũa trong 1g phõn.
Mổ khỏm lợn bị bệnh sau gõy nhiễm để tỡm giun đũa ký sinh, kiểm tra bệnh tớch đại thể, lấy mẫu làm tiờu bản vi thể.
2.4.5. Phƣơng phỏp theo dừi cỏc biểu hiện lõm sàng của lợn bị bệnh giun đũa
Chỳng tụi sử dụng phƣơng phỏp chẩn đoỏn cơ bản là quan sỏt những biểu hiện của lợn: Thể trạng, ăn uống, vận động, niờm mạc và trạng thỏi phõn.
2.4.6. Phƣơng phỏp xột nghiệm mỏu để xỏc định một số chỉ số huyết học của lợn bị bệnh giun đũa và lợn khỏe của lợn bị bệnh giun đũa và lợn khỏe
- Số lƣợng hồng cầu, bạch cầu, hàm lƣợng huyết sắc tố đƣợc xỏc định bằng mỏy ABX Micros tại Phũng Huyết học - Trung tõm Chẩn đoỏn thỳ y Trung ƣơng.
- Cụng thức bạch cầu đƣợc xỏc định bằng phƣơng phỏp Tristova: Làm tiờu bản mỏu, nhuộm Giemsa, đếm số lƣợng từng loại bạch cầu và tớnh tỷ lệ phần trăm của mỗi loại.
2.4.7. Xỏc định mối tƣơng quan giữa số lƣợng giun đũa ký sinh với số trứng trong một gam phõn trứng trong một gam phõn
- Xột nghiệm và đếm số trứng giun đũa trong một gam phõn của lợn bị bệnh sau gõy nhiễm.
- Mổ khỏm và đếm số giun đũa ký sinh trờn mỗi lợn bị bệnh do gõy nhiễm Số liệu đƣợc xử lý trờn mỏy vi tớnh theo chƣơng trỡnh Statgraph Version 4,0 (1994) Statistic Company of USA.
2.4.8. Phƣơng phỏp xỏc định bệnh tớch đại thể, vi thể
- Phương phỏp xỏc định bệnh tớch đại thể: Mổ khỏm những lợn bị bệnh giun đũa sau khi gõy nhiễm (cú biểu hiện lõm sàng của bệnh giun đũa lợn), quan sỏt bằng mắt thƣờng và kớnh lỳp cỏc phần ruột non để tỡm giun đũa, chụp ảnh những vựng cú bệnh tớch điển hỡnh.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Nghiờn cứu biến đổi bệnh lý vi thể bằng phƣơng phỏp làm tiờu bản tổ chức học theo quy trỡnh tẩm đỳc parafin, nhuộm Hematoxilin - eosin, đọc kết quả dƣới kớnh hiển vi quang học Labophot - 2 và chụp ảnh bằng mỏy ảnh gắn trờn kớnh hiển vi.
Phương phỏp làm tiờu bản vi thể cỏc đoạn ruột non cú bệnh tớch đại thể theo thứ tự cỏc bước sau:
+ Lấy bệnh phẩm: Cắt phần ruột non cú nhiều giun đũa ký sinh. + Cố định bằng dung dịch Formol 10%.
+ Sau khi cố định lấy mẫu bệnh phẩm trong Formol 10% ra cắt mỏng 2 - 3 cm, rửa tổ chức dƣới vũi nƣớc chảy nhẹ từ 2 - 3 giờ để loại bỏ Formol cú trong tổ chức.
+ Khử nƣớc: Dựng cồn tuyệt đối để rỳt nƣớc trong bệnh phẩm ra. + Làm trong tiờu bản: Ngõm bệnh phẩm qua hệ thống Xylen.
+ Tẩm parafin: Ngõm bệnh phẩm đó làm trong vào cỏc cốc đó đựng parafin núng chảy, để ở tủ ấm nhiệt độ 560C.
+ Đổ Block: Rút parafin núng chảy vào khuụn giấy rồi đặt miếng tổ chức (bệnh phẩm) đó tẩm parafin vào. Khi parafin đụng đặc hồn toàn thỡ búc khuụn. Sửa lại Block cho vuụng vắn.
+ Cắt và dỏn mảnh: Cắt bệnh phẩm trờn mỏy cắt microtocom, độ dày mảnh cắt 3 - 4 àm. Dỏn mảnh cắt lờn phiến kớnh bằng dung dịch Mayer (lũng trắng trứng gà 1 phần, glyxeril 1 phần; 1 ml hỗn hợp trờn pha trong 19 ml nƣớc cất).
+ Nhuộm tiờu bản bằng phƣơng phỏp Hematoxilin - eosin. Phƣơng phỏp nhƣ sau: Tẩy nến bằng Xylen, sau đú ngõm tiờu bản tổ chức vào cồn Ethanol 96% trong 5 phỳt. Tiờu bản tổ chức đƣợc rửa dƣới dũng nƣớc chảy nhẹ trong 5 phỳt và nhuộm Hematoxilin trong 5 phỳt, sau đú lại rửa nƣớc trong 15 phỳt và nhuộm Eosin trong 1 - 2 phỳt. Rửa dƣới dũng nƣớc chảy nhẹ, làm khụ tiờu bản trong dung dịch cồn cú nồng độ tăng dần 96% đến 100% với thời gian giảm dần từ 5 phỳt đến 2 phỳt.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.4.9. Phƣơng phỏp theo dừi hiệu lực của thuốc tẩy giun đũa lợn
Chỳng tụi đó sử dụng 3 loại thuốc (Dextomax, Hanmectin - 25, Levamisol) để tẩy cho những lợn bị nhiễm giun đũa. Sau khi tiờm thuốc cho
lợn 15 ngày, xột nghiệm lại phõn bằng phƣơng phỏp Fulleborn. Nếu khụng tỡm thấy trứng giun đũa lợn trong phõn thỡ xỏc định thuốc cú hiệu lực triệt để với giun đũa, nếu vẫn thấy trứng giun đũa/g phõn nhƣng với số lƣợng giảm rừ rệt thỡ xỏc định thuốc cú hiệu lực với giun đũa nhƣng chƣa triệt để. Nếu số lƣợng trứng/gam phõn vẫn khụng giảm so với trƣớc khi dựng thuốc hoặc giảm khụng đỏng kể thỡ xỏc định thuốc khụng cú hiệu lực tẩy giun đũa.
Xỏc định độ an toàn của thuốc bằng cỏch theo dừi trạng thỏi sinh lý của lợn trƣớc và sau khi dựng thuốc. Cỏc vấn đề theo dừi chủ yếu gồm: ăn uống, đi lại, da và niờm mạc, cỏc phản ứng phụ khỏc.