2.1.1. Thuốc nghiờn cứu
Bài thuốc “Tiền liệt linh phương giải” với 12 vị thuốc ủều ủạt tiờu chuẩn bào chế theo Dược ủiển Việt Nam III, do Cụng ty cổ phần dược liệu Trung
ương II cung cấp.
Bào chế dưới dạng thuốc sắc tại Khoa Dược - Bệnh viện Đa khoa YHCT Hà Nội theo quy trỡnh sau:
Đảng sõm: Loại bỏ tạp chất, rửa sạch, ủ mềm, thỏi lỏt dày, sao quạ Sinh ủịa: Loại bỏ tạp chất, rửa sạch, ủ mềm, thỏi lỏt dày, sấy khụ. Bạch linh: Ngõm mềm, rửa sạch, gọt bỏ vỏ, thỏi phiến dày, sấy khụ. Bạch truật: Loại bỏ tạp chất, rửa sạch, ủ mềm, thỏi lỏt dày, sấy khụ. Phỏ cố chỉ: Tẩm nước muối với tỷ lệ 10 kg dược liệu: 0,2 kg muối, sao qua cho phồng thơm.
Nhục quế: Loại bỏ tạp chất, cạo bỏ lớp bần, gọt thành miếng mỏng. Trần bỡ: Rửa sạch, cạo hết cựi phớa trong, thỏi mỏng, phơi khụ.
Thỏ ty tử: Loại bỏ tạp chất và hạt lộp, rửa sạch, phơi rỏo, tẩm nước muối với tỷ lệ 10 kg dược liệu: 0,2 kg muối, sao cho nổủềụ
Xa tiền tử, Cự mạch, í dĩ, Bồ hoàng : Dựng sống Tất cả làm thành thang sắc.
* Cỏch sắc:
Bồ hoàng ủể riờng. Cho cỏc vị Thỏ ty tử, Xa tiền tử, í dĩ vào tỳi vảị Cho vào ấm tỳi vải và cỏc vị thuốc cũn lại, ủổ nước ngập khoảng 3cm (khoảng 1000ml), ủun sụi õm ỉ trong khoảng hai giờ. Chắt lấy nước sắc lần 1. Tiếp tục cho nước ngập thuốc, sắc lần 2. Chắt lấy nước sắc lần 2. Trộn 2 nước sắc lại cụ ủến khi cũn khoảng 250ml chắt ra chia làm 2 nửa, cho Bồ hoàng vào, khuấy ủều và cho bệnh nhõn uống 2 lần trong ngàỵ
2.1.2. Thuốc ủối chứng
Trong nghiờn cứu này sử dụng thuốc ủối chứng là Tadenan. Quy cỏch ủúng gúi: hộp 3 vỉ x 10 viờn.
Dạng bào chế: Viờn nang mềm.
Thành phần: Dịch chiết Pygeum africanum 50mg.
Sản xuất tại Phỏp. Sốủăng ký: VN - 10223 - 05. Số lụ sản xuất: 12012. Nhập khẩu bởi Cụng ty cổ phần dược liệu Trung ương IỊ
Tadenan là thuốc thảo mộc ủược chiết xuất từ vỏ cõy mận chõu Phi (Pygeum africanum ) cú nhiều Steroid.
Theo cỏc nhà nghiờn cứu, Tadenan cú tỏc dụng tỏi sinh tổ chức tuyến TTL và tạo lập sự bài tiết nước tiểu, tạo lập chức năng của TTL, nú ức chế
tăng sinh nguyờn bào sợi là tế bào trước ủú bị bFGF kớch thớch.
Người ta ủó làm thực nghiệm và cho thấy rằng Tadenan cải thiện chức năng bàng quang, cải thiện cấu trỳc TTL do ức chế yếu tố tăng trưởng bFGF - yếu tố làm tăng sinh mụ sợị Tadenan khụng tỏc dụng ảnh hưởng ủến Androgen và Oestrogen.
2.2. ĐỐI TƯỢNG NGHIấN CỨU
2.2.1. Đối tượng nghiờn cứu trờn thực nghiệm
Tiến hành kiểm nghiệm ủộc tớnh cấp và ủộc tớnh bất thường của bài thuốc tại Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương
Thử nghiệm trờn chuột nhắt trắng chủng Swiss, khụng phõn biệt giống,
ủảm bảo xuất phỏt ủiểm sinh lý bỡnh thường, do Viện vệ sinh dịch tễ trung
ương cung cấp, ủược nuụi trong ủiều kiện thoỏng mỏt, ủảm bảo vệ sinh, chế ủộăn uống theo nhu cầụ
Số lượng 40 con.
Trọng lượng 18 - 22 gram, ủược giữ ổn ủịnh 3 ngày trước khi tiến hành thử nghiệm.
2.2.2. Đối tượng nghiờn cứu trờn lõm sàng
Cỏc bệnh nhõn nam ủiều trị tại khoa Ngoại Bệnh viện ủa khoa YHCT Hà Nội từ thỏng 1/2009 - thỏng 7/2010, ủược chẩn ủoỏn xỏc ủịnh PĐLT-TTL,
ủảm bảo cỏc tiờu chuẩn nghiờn cứu:
2.2.2.1. Tiờu chuẩn lựa chọn bệnh nhõn
* Theo YHHĐ: Bệnh nhõn cú chỉủịnh ủiều trị nội khoa
- RLTT mức ủộ trung bỡnh ủến nặng: Điểm IPSS ≥ 8, ủiểm CLCS ≥ 3. - Siờu õm: Khối lượng TTL ≥ 25gam, TTL cú mật ủộ õm ủồng nhất, trũn
ủều, ranh giới rừ. Thể tớch NTTD < 100ml. - Xột nghiệm mỏu: PSA < 10ng/ml.
* Theo YHCT
Bệnh nhõn cú biểu hiện chứng long bế, cỏc triệu chứng theo vọng, văn vấn, thiết thuộc thể Thận dương hư: tiểu tiện yếu, khụng thụng, khú ủi, thậm chớ nhỏ giọt, sức bài niệu yếu, lưng gối ủau mỏi cú cảm giỏc lạnh, sợ lạnh, chõn tay khụng ấm, lưỡi nhợt, rờu lưỡi trắng, mạch trầm tế hoặc trầm trỡ.
2.2.2.2. Tiờu chuẩn nhận bệnh nhõn
- Những bệnh nhõn tự nguyện tham gia nghiờn cứụ - Những bệnh nhõn ≥ 50 tuổị
- Khụng mắc cỏc bệnh cấp tớnh.
- Xột nghiệm Ure, Creatinin bỡnh thường; ALT, AST bỡnh thường - Điều trị nội trỳ tại Bệnh viện.
2.2.2.3. Tiờu chuẩn loại trừ bệnh nhõn
Loại trừ những bệnh nhõn sau ra khỏi ủối tượng nghiờn cứu: - Bớ ủỏi hoàn toàn hoặc bớ ủỏi khụng hoàn toàn (NTTD ≥ 100ml).
- Bệnh nhõn ủang ủiều trị bệnh bằng thuốc khỏc hoặc dừng thuốc trong vũng 3 thỏng tớnh ủến thời ủiểm khỏm.
- Nghi ngờ ung thư TTL: PSA ≥ 10ng/ml.
- Bệnh lý ủường tiết niệu: Suy thận, sỏi thận, viờm ủường tiết niệu cấp... - Cú bệnh khỏc cần ưu tiờn ủiều trị.
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.3.1. Phương phỏp nghiờn cứu thực nghiệm
Xỏc ủịnh ủộc tớnh cấp (Determination of acute toxicity), về nguyờn tắc là phải xỏc ủinh LD50 hay liều chết trung bỡnh (mean lethal dose) tức là liều làm chết 50% số con vật thớ nghiệm trong những ủiều kiện nhất ủịnh. Việc xỏc
ủịnh LD50 rất quan trọng khi nghiờn cứu vị thuốc vỡ:
1. LD50 là một thụng số rất quan trọng ủểủỏnh giỏ ủộc tớnh và ủộ an toàn của thuốc;
2. Biết LD50 sẽ cú phương phỏp dựng liều thực nghiệm trờn ủộng vật một cỏch ủỳng ủắn;
3. Biết LD50 trờn ủộng vật cú thể suy ra liều dựng an toàn cho người; 4. Biết LD50 thuốc ủú vào dựng cho người hay khụng. Chớnh vỡ vậy Tổ
chức Y tế thế giới cũng như hầu mới xỏc ủịnh ủược ủiều trị là một thụng số
quan trọng quyết ủịnh xem cú nờn ủưa hết cỏc nước ủều qui ủịnh phải xỏc
ủịnh ủộc tớnh cấp khi nghiờn cứu một thuốc [7], [12] .
Chỳng tụi tiến hành thử nghiệm ủộc tớnh cấp của bào thuốc tại Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương.
Phương phỏp thử: Phương phỏp nghiờn cứu tỏc dụng của thuốc từ dược thảo năm 2006 theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giớị Mẫu thử: Dựng dạng sắc cụ ủặc tối ủa (200ml nước sắc 5 thang TLLPG), với cỏc mức liều sau: Mức liều 1: 20ml mẫu thử/ kg chuột x 1lần uống (gấp 25 lần liều dựng ở người) Mức liều 2: 20ml mẫu thử/ kg chuột/1lần uống x 2 lần uống, mỗi lần uống cỏch nhau 2 giờ (gấp 50 lần liều dựng ở người) Mức liều 3: 20ml mẫu thử/ kg chuột/1lần uống x 3 lần uống, mỗi lần uống cỏch nhau 2 giờ, (gấp 75 lần liều dựng ở người)
Chuột ủược cho nhịn ăn 15 giờ trước khi thớ nghiệm, nước uống theo nhu cầụ Kiểm tra cõn nặng trước khi thử nghiệm. Chuột ủạt cỏc yờu cầu về
cõn nặng ủược ủưa vào thử nghiệm.
Cỏch thử: Đưa mẫu thử dưới dạng hỗn dịch theo ủường uống. Lấy thể
tớch mẫu thử theo quy ủịnh ủưa thẳng vào dạ dày chuột bằng kim cong ủầu tự. Tiến hành thử nghiệm chớnh thức trờn 40 chuột, chia thành 4 nhúm gồm 1 nhúm chứng dựng nước cất và 3 nhúm thử với 3 mức liều thửủó dự tớnh. Nhúm chuột Liều dựng (ml mẫu thử/20g chuột) Liều dựng (ml mẫu thử/kg chuột) Số chuột thớ nghiệm Nhúm chứng 0,4ml nước x 3 lần --- 10 Mức liều 1 0,4ml mẫu thử x 1 lần 20,0ml x 1 lần 10 Mức liều 2 0,4ml mẫu thử x 2 lần 40,0ml x 2 lần 10 Mức liều 3 0,4ml mẫu thử x 3 lần 60,0ml x 3 lần 10
Theo dừi, mụ tả chi tiết cỏc triệu chứng khỏc thường của chuột sau khi uống thuốc, ghi chộp ủầy ủủ.
Lịch theo dừi: Theo dừi chuột sau khi thử trong 24 giờ ủầu, và theo dừi hoạt ủộng của chuột trong 7 ngày, số chuột sống/chết.
2.3.2. Phương phỏp nghiờn cứu lõm sàng
2.3.2.1. Thiết kế nghiờn cứu
Nghiờn cứu thuần tập, can thiệp thử nghiệm lõm sàng mở, so sỏnh kết quả trước và sau ủiều trị, cú ủối chứng.
2.3.2.2. Chọn mẫu - chia nhúm
Bệnh nhõn ủảm bảo tiờu chuẩn nghiờn cứu ủược chia thành 2 nhúm: nhúm nghiờn cứu và nhúm ủối chứng, mỗi nhúm tối thiểu 30 bệnh nhõn. Bệnh
nhõn ủó chọn ủược ủỏnh số thứ tự từ 1 ủến hết, phõn bố vào 2 nhúm một cỏch ngẫu nhiờn, số lẻ vào nhúm nghiờn cứu, số chẵn vào nhúm ủối chứng.
2.3.2.3. Phương phỏp ủiều trị
Nhúm nghiờn cứu: Bệnh nhõn ủược ủiều trị bằng nước sắc TLLPG, mỗi ngày một thang chia 2 lần uống 9 giờ và 15 giờ, mỗi lần uống 125ml khi thuốc cũn ấm.
Nhúm ủối chứng: Bệnh nhõn ủược ủiều trị bằng Tadenan 50mg, mỗi ngày uống 2 lần vào 9 giờ và 15 giờ, mỗi lần uống 1 viờn.
Thời gian uống thuốc của 2 nhúm là 30 ngàỵ
2.3.2.4. Chỉ tiờu quan sỏt
* Chỉ tiờu quan sỏt tỏc dụng ủiều trị của bài thuốc
- Đỏnh giỏ mức ủộ RLTT theo thang ủiểm IPSS: Hướng dẫn bệnh nhõn tự trả lời cỏc cõu hỏi một cỏch chớnh xỏc nhất và chia 3 mức ủộ:
Rối loạn nhẹ: 0 - 7 ủiểm Rối loạn trung bỡnh: 8 - 19 ủiểm Rối loạn nặng: 20 - 35 ủiểm
- Đỏnh giỏ mức ủộ RLTT theo thang ủiểm CLCS: Hướng dẫn bệnh nhõn tự trả lời cỏc cõu hỏi giống như trờn và cũng chia 3 mức ủộ:
Rối loạn nhẹ: 0 - 2 ủiểm Rối loạn trung bỡnh: 3 - 4 ủiểm Rối loạn nặng: 5 - 6 ủiểm
- Thể tớch, khối lượng TTL (KTTL): Sử dụng mỏy siờu õm màu của hóng Philips Health Care (Mỹ). Đo kớch thước TTL và tớnh thể tớch TTL theo cụng thức Ellisoide: V = H ì L ì E ì 0,523 (cm³)
Trong ủú: H là chiều cao (cm); L là chiều rộng (cm); E là ủộ dầy (cm). 1cm³ thể tớch tuyến tương ủương với 1gram khối lượng tuyến.
- Thể tớch NTTD (VNTTD): Sau khi ủo thể tớch TTL, dặn bệnh nhõn ủi tiểu hết ủến mức tối ủa rồi tiền hành siờu õm lại, ủo thể tớch NTTD trờn siờu õm theo cụng thức như trờn, chuyển ủổi ủơn vị tớnh theo ml. Thời ủiểm ủo trước và sau ủiều trị.
- Chỉ tiờu quan sỏt theo YHCT:
Sắc diện, cảm giỏc sợ lạnh, rờu lưỡi (trắng hay vàng), số lần ủi tiểu, lượng nước tiểu, màu nước tiểu (trong hay ủục, màu vàng hay ủỏ), cảm giỏc khi tiểu tiểu tiện (tiểu khú, tiểu khụng liờn tục, tia tiểu nhỏ yếu, cảm giỏc núng niệu ủạo, cảm giỏc tức nhẹ vựng bụng dướị..), ủặc ủiểm của mạch. Cỏc triệu chứng này ủược theo dừi trước và sau ủiều trị.
* Chỉ tiờu quan sỏt tỏc dụng khụng mong muốn
- Cỏc chỉ số sinh lý: Đếm mạch quay và ủo huyết ỏp ủộng mạch cỏnh tay hàng ngày, ghi chộp cụ thể, chớnh xỏc. Thao tỏc sau khi bệnh nhõn hoàn toàn nghỉ ngơi ớt nhất 15 phỳt. Đếm mạch quay trong thời gian 1 phỳt, ủơn vị tớnh là lần/phỳt. Đo huyết ỏp ủộng mạch cỏnh tay bằng huyết ỏp kế thuỷ ngõn của Nhật, bệnh nhõn ở tư thế nằm, ủơn vị tớnh là mmHg.
- Cỏc triệu chứng: buồn nụn, chúng mặt, ủau ủầu, rối loạn tiờu hoỏ, mẩn ngứa, hoặc cỏc dấu hiệu khỏc… ủược theo dừi hàng ngàỵ
- Cỏc thụng số huyết học: Số lượng hồng cầu, cụng thức bạch cầu, số
lượng tiểu cầu; Và cỏc chỉ số sinh hoỏ: ALT, AST, Ure, Creatinin ủược theo dừi trước và sau ủiều trị.
2.3.2.5. Phương phỏp xử lý số liệu
Thuật toỏn thống kờ y sinh học (Chương trỡnh EPI - INFO 6.04).
2.3.2.6. Phương phỏp ủỏnh giỏ kết quả
* Đỏnh giỏ kết quả ủiều trị
- Dựa trờn quan sỏt sự biến ủổi của 3 chỉ tiờu nghiờn cứu: ủiểm IPSS,
ủiểm CLCS và thể tớch NTTD sau 30 ngày ủiều trị, ủỏnh giỏ kết quả ủiều trị
+ Tốt: Tỉ lệ giảm ≥ 50% so với trước ủiều trị. + Khỏ: 25% ≤ Tỉ lệ giảm < 50% so với trước ủiều trị. + Kộm: Tỉ lệ giảm < 25% hoặc khụng thay ủổi, hoặc tăng lờn. - Kết quả chung quỏ trỡnh ủiều trị: + Tốt: Cả 3 chỉ tiờu ủạt loại tốt. + Khỏ: 2 chỉ tiờu ủạt loại khỏ trở lờn. + Kộm: ≥ 2 chỉ tiờu ủạt loại kộm. - Đỏnh giỏ kết quả theo y học cổ truyền:
+ Ăn: Tốt: ngon miệng, cú cảm giỏc thốm ăn Khỏ: ăn ủược, khụng cú cảm giỏc thốm ăn, Kộm: chỏn ăn, ăn ớt. + Ngủ: Tốt: ≥ 5 tiếng/ủờm Khỏ: 4 - 5 tiếng/ủờm Kộm: < 4 tiếng/ủờm + Tiểu ủờm: Tốt: ≤ 1 lần Khỏ: 2 lần Kộm: ≥ 3 lần + Đại tiện: Tốt: ngày 1lần, phõn thành khuụn
Khỏ: thỉnh thoảng phõn tỏo hoặc phõn nhóo Kộm: thường xuyờn tỏo bún hoặc nhóo + Đau lưng: Tốt: giảm nhiều hoặc hết ủau Khỏ: giảm ớt. Kộm: ủau liờn tục, khụng giảm hoặc nặng lờn + Khả năng sinh lý: Tốt: gần như bỡnh thường Khỏ: kộm hơn bỡnh thường Kộm: khụng cũn
* Đỏnh giỏ về tỏc dụng khụng mong muốn của thuốc
- Sự xuất hiện của cỏc triệu chứng lõm sàng khụng mong muốn : Thay
ủổi chỉ số mạch, huyết ỏp; Buồn nụn, chúng mặt, mất ngủ, rối loạn tiờu hoỏ, dị ứng, mẩn ngứạ
- Sự thay ủổi của cỏc chỉ số xột nghiệm huyết học (số lượng hồng cầu, cụng thức bạch cầu) phản ỏnh chức năng tạo mỏu
- Sự thay ủổi cỏc chỉ số xột nghiệm hoỏ sinh (Ure, Creatinin, ALT, AST trong mỏu ; phõn tớch nước tiểu) phản ỏnh chức năng gan, thận.
2.4. ĐẠO ĐỨC NGHIấN CỨU
Thuốc nghiờn cứu ủược bào chế từ cỏc vị thuốc YHCT ủó ủược sử dụng lõu
ủời, trong bài thuốc khụng cú vị nào gõy ủộc với liều dựng theo cụng thức. Cỏc vị
thuốc này ủều ủạt tiờu chuẩn bào chế theo Dược ủiển Việt Nam III, kờ ủơn theo quy quy chế kờ ủơn thuốc YHCT.
Nghiờn cứu chỉ nhằm nõng cao kết quả ủiều trị cho bệnh nhõn, khụng nhằm bất kỳ mục ủớch nào khỏc.
Bệnh nhõn tỡnh nguyện tham gia nghiờn cứụ
Khi bệnh nhõn cú dấu hiệu nặng hoặc diễn biến bất thường thỡ chỳng tụi sẽ ngừng nghiờn cứu, thay ủổi phỏc ủồ ủiều trị và ghi nhận như một trường hợp thất bạị
Chương 3
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU
3.1. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU THỬ ĐỘC TÍNH CẤP. Bảng 3.1. Theo dừi trọng lượng cơ thể chuột
Trọng lượng trung bỡnh (g) Thời ủiểm
Nhúm Trước thử nghiệm Sau thử nghiệm
p
Nhúm chứng (n = 10) 18,75 ±±±± 0,26 26,95 ±±±± 1,04
Nhúm mức liều 1 (n = 10) 18,65 ±±±± 0,24 27,05 ±±±± 0,86 p1 > 0,05 Nhúm mức liều 2 (n = 10) 18,75 ±±±± 0,26 26,70 ±±±± 1,03 p2 > 0,05 Nhúm mức liều 3 (n = 10) 18,90 ±±±± 0,21 27,80 ±±±± 1,00 p3 > 0,05
Sau khi uống thuốc, theo dừi trong thời gian thử nghiệm, chuột ở nhúm chứng và cỏc nhúm thử nghiệm tăng trọng lượng cơ thể gần nhưủều nhaụ
Bảng 3.2. Theo dừi hoạt ủộng, ăn uống của chuột
Ngày Nhúm 01 02 03 04 05 06 07 Nhúm chứng (n = 10) bt bt bt bt bt bt bt Nhúm mức liều 1 (n = 10) bt bt bt bt bt bt bt Nhúm mức liều 2 (n = 10) bt bt bt bt bt bt bt Nhúm mức liều 3 (n = 10) bt bt bt bt bt bt bt
Sau khi uống thuốc và trong 7 ngày theo dừi cỏc lụ chuột thử nghiệm hoạt ủộng và ăn uống bỡnh thường khụng nhận thấy cú biểu hiện gỡ khỏc