CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM
3.4. Xác định các dạng phân tử lipid phân cực
3.4.4.1. Dạng phân tử diacylglyceryl-N,N,N-trimethylhomoserine (DGTS)
CTPT: CxHyNO7
Đầu phân cực DGTS chứa gốc trimethylhomoserine (-C7H14NO3). Tùy thuộc vào cấu tạo của đuơi khơng phân cực, DGTS thuộc loại diacyl. Để xác định dạng phân tử của DGTS căn cứ vào 5 dấu hiệu:
(i) Thời gian lưu dự kiến: (3,5 – 5,5) n phút.
(ii) Trên event 3, xuất hiện ion âm dạng adduct [M+HCOO]- cĩ cường độ peak thấp nên với những phân tử DGTS cĩ hàm lượng ít thì khĩ xác định, khơng thấy xuất hiện ion [M-H]-.
(iii) Trên event 1, xuất hiện ion dương [M+H]+ cĩ cường độ peak lớn nhất với m/z là số chẵn.
(iv) Khối lượng phân tử tùy thuộc vào cấu tạo của đuơi khơng phân cực, thường nằm trong khoảng m/z 650 - 800.
(v) Cơng thức phân tử tương ứng cĩ dạng -NO7.
Các dữ kiện phổ khối:
+ Lồi rong Nâu Lobophora sp.: cĩ 27 dạng phân tử DGTS xác định theo giá trị khối lượng tăng dần và thời gian lưu:
Rt 4,85: DGTS 28:0; MS- m/z 656,5459 [M+H]+; MS2- m/z 446,3490 [M+H- C14H26O]+, 428,3395 [M+H-C14H28O2]+, 236,1517 [C10H22NO5]+.
Rt 4,73: DGTS 30:1; MS- m/z 682,5609 [M+H]+; MS2- m/z 456,3605 [M+H- C14H26O2]+, 454,3605 [M+H-C14H28O2]+, 446,3415 [M+H-C16H30O2]+, 428,3435 254,2174 [C16H30O2]-, 236,1637 [C10H22NO5]+.
Rt 4,49: DGTS 30:0; MS- m/z 684,5776 [M+H]+; MS2- m/z 474,3867 [M+H- C14H26O]+, 456,3691 [M+H-C14H28O2]+, 446,3528 [M+H-C16H30O]+, 428,3239 [M+H-C16H32O2]+, 236,1525[C10H22NO5]+.
Rt 4,76: DGTS 32:3; MS- m/z 706,5623 [M+H]+; MS2- m/z 478,3508 [M+H- C14H28O2]+, 446,3545 [M+H-C18H28O]+, 428,3412 [M+H-C18H30O2]+, 236,1528 [C10H22NO5]+.
Rt 4,37: DGTS 32:1; MS- m/z 710,5923 [M+H]+; MS2- m/z 500,3922 [M+H- C14H26O]+, 482,3956 [M+H-C14H28O2]+, 474,3932 [M+H- C16H28O]+, 456,3733 [M+H- C16H30O2]+, 454,3615 [M+H-C16H32O2]+, 446,3634 [M+H-C18H34O2]+, 236,1512 [C10H22NO5]+.
Rt 4,58: DGTS 32:2; MS- m/z 708,5767 [M+H]+; MS2- m/z 480,3584 [M+H- C14H28O2]+, 456,3533 [M+H-C16H28O2]+, 428,3276 [M+H-C18H32O2]+.
Rt 4,16: DGTS 32:0; MS- m/z 712,6104 [M+H]+; MS2- m/z 484,4134 [M+H- C14H28O2]+, 474,3838 [M+H-C16H30O]+, 456,3706 [M+H-C16H32O2]+, 428,3336 [M+H-C18H36O2]+, 236,1411[C10H22NO5]+.
Rt 4,58: DGTS 34:4; MS- m/z 732,5736 [M+H]+; MS2- m/z 476,3312 [M+H- C16H32O2]+, 474,3648 [M+H-C18H26O]+, 456,3706 [M+H-C18H28O2]+, 454,3515 [M+H-C18H30O2]+, 428,3231 [M+H-C20H32O2]+, 236,1115 [C10H22NO5]+.
Rt 4,43: DGTS 34:3; MS- m/z 734,5875 [M+H]+; MS2- m/z 496,3748 [M+H- C16H30O]+, 478,3521 [M+H-C16H32O2]+, 474,3762 [M+H-C18H28O]+, 456,3699 [M+H-C18H30O2]+, 454,3615 [M+H-C18H32O2]+, 428,3399 [M+H-C20H36O2]+, 236,1511 [C10H22NO5]+.
Rt 4,22: DGTS 34:2; MS- m/z 736,6072 [M+H]+; MS2- m/z 500,3806 [M+H- C16H28O]+, 482,3813 [M+H-C16H30O2]+, 480,3718 [M+H-C16H32O2]+, 474,3849 [M+H- C18H30O]+, 456,3705 [M+H-C18H32O2]+, 454,3720 [M+H-C18H34O2]+, 236,1512 [C10H22NO5]+.
Rt 4,07: DGTS 34:1; MS- m/z 738,6226 [M+H]+; MS2- m/z 500,3915 [M+H- C16H30O]+, 482,3842 [M+H-C16H32O2]+, 474,3799 [M+H-C18H33O]+, 456,3686 [M+H-C18H34O2]+, 236,1556 [C10H22NO5]+.
Rt 4,19: DGTS 36:4; MS- m/z 760,6036 [M+H]+; MS2- m/z 504,3650 [M+H- C16H32O2]+, 482,3883 [M+H-C18H30O2]+, 478,3468 [M+H-C18H34O2]+, 474,3764 [M+H-C20H30O]+, 456,3732 [M+H-C20H32O2]+, 236,1769 [C10H22NO5]+.
Rt 4,01: DGTS 36:2; MS- m/z 764,6344 [M+H]+; MS2- m/z 508,3644 365
[M+H-C16H32O2]+, 500,3966 [M+H-C18H32O]+, 482,3841 [M+H-C18H34O2]+, 480,3904 [M+H-C18H36O2]+, 456,3661 [M+H-C20H36O2]+, 438,4273, 236,1115 [C10H22NO5]+.
Rt 4,07: DGTS 38:5; MS- m/z 786,6186 [M+H]+; MS2- m/z 530,3683 [M+H- C16H32O2]+, 522,3877 [M+H-C18H32O]+, 504,3706 [M+H-C18H34O2]+, 482,3823 [M+H-C20H32O2]+, 456,3724.
Rt 4,82: DGTS 38:1; MS- m/z 794,6813 [M+H]+; MS2- m/z 530,4469 [M+H- C18H34O2]+, 500,4154 [M+H-C16H30O]+.
+ Lồi rong Lục Halimeda incrasata Lamx.: cĩ 17 dạng phân tử DGTS xác định theo giá trị khối lượng tăng dần và thời gian lưu:
Rt 5,16: DGTS 28:0; MS- m/z 656,5396 [M+H]+; MS2- m/z 446,3411 [M+H- C14H26O]+, 428,3267 [M+H-C14H28O2]+.
Rt 4,83: DGTS 30:0; MS- m/z 684,5731 [M+H]+; MS2- m/z 474,3652 [M+H- C14H26O]+, 456,3704 [M+H-C14H28O2]+, 446,3256[M+H-C16H30O]+, 428,3334 [M+H- C16H32O2]+, 236,1513 [C10H22NO5]+.
Rt 5,07: DGTS 32:3; MS- m/z 706,5552 [M+H]+; MS2- m/z 478,3512 [M+H- C14H28O2]+, 456,3522 [M+H-C16H26O2]+, 446,3468 [M+H-C18H28O]+, 428,3312 [M+H- C18H30O2]+.
Rt 4,68: DGTS 32:1; MS- m/z 710,5839 [M+H]+; MS2- m/z 456,3635 [M+H- C16H30O2]+, 454,3556 [M+H-C16H32O2]+, 428,3312 [M+H-C18H34O2]+.
Rt 4,44: DGTS 32:0; MS- m/z 712,6067 [M+H]+; MS2- m/z 474,3835 [M+H- C16H30O]+, 456,3553 [M+H-C16H32O2]+.
Rt 4,92: DGTS 34:4; MS- m/z 732,5649 [M+H]+; MS2- m/z 456,3611 [M+H- C18H28O2]+, 428,3223 [M+H-C20H32O2]+.
Rt 4,71: DGTS 34:3; MS- m/z 734,5868 [M+H]+; MS2- m/z 506,3562 [M+H- C14H28O2]+, 496,3571 [M+H-C16H30O]+, 478,3535 [M+H-C16H32O2]+, 474,3801 [M+H-C18H28O]+, 456,3654 [M+H-C18H30O2]+, 428,3346 [M+H-C20H34O2]+, 236,1668 [C10H22NO5]+.
Rt 4,32: DGTS 34:1; MS- m/z 738,6191 [M+H]+; MS2- m/z 482,3811 [M+H- C16H32O2]+, 474,3635 [M+H-C18H28O]+, 456,3643 [M+H-C18H30O2]+.
Rt 4,26: DGTS 34:0; MS- m/z 740,6357 [M+H]+; MS2- m/z 484,3904 [M+H- C16H32O2]+, 474,3745 [M+H-C18H34O]+, 456,3633 [M+H-C18H36O2]+.
Rt 4,47: DGTS 36:4; MS- m/z 760,6062 [M+H]+; MS2- m/z 522,3668 [M+H- C16H30O]+ 504,3711 [M+H-C16H32O2]+, 474,3867 [M+H-C20H30O]+, 456,3535 [M+H- C20H32O2]+.
Rt 4,14: DGTS 36:1; MS- m/z 766,6488 [M+H]+; MS2- m/z 528,4111 [M+H- C16H30O]+ 510,4142 [M+H-C16H32O2]+, 474,3738 [M+H-C20H36O]+, 456,3754 [M+H- C20H38O2]+, 432,2717.
Rt 4,47: DGTS 38:6; MS- m/z 784,5998 [M+H]+; MS2- m/z 528,3678 [M+H- C16H32O2]+, 456,3745 [M+H-C22H32O2]+.
Rt 3,99: DGTS 38:1; MS- m/z 794,6786 [M+H]+; MS2- m/z 538,4554 [M+H- C16H32O2]+, 474,3822 [M+H-C22H40O]+, 456,3776 [M+H-C22H42O2]+.
3.4.4.2. Dạng phân tử diaclyglycerylhydroxymethyl-N,N,N-trimethyl-beta- alanine (DGTA)
CTPT: CxHyNO7
CTCT: Dạng diacyl của phân tử DGTA (là dạng đồng phân của DGTS)
Đầu phân cực DGTA chứa gốc hydroxymethyl-trimethyl-beta-alanine (- C7H14NO3). Tùy thuộc vào cấu tạo của đuơi khơng phân cực, DGTA cũng thuộc loại diacyl. Để xác định dạng phân tử của DGTS căn cứ vào 5 dấu hiệu:
(i) Thời gian lưu dự kiến: (4,5 - 7) n phút.
(ii) Trên event 3, xuất hiện ion âm dạng adduct [M+HCOO]- cĩ cường độ peak thấp nên với những phân tử DGTS cĩ hàm lượng ít thì khĩ xác định, khơng thấy xuất hiện ion [M-H]-.
(iii) Trên event 1, xuất hiện ion dương [M+H]+ cĩ cường độ peak lớn nhất với m/z là số chẵn.
(iv) Khối lượng phân tử tùy thuộc vào cấu tạo của đuơi khơng phân cực, thường nằm trong khoảng m/z 650 - 850.
(v) Cơng thức phân tử tương ứng cĩ dạng -NO7.
Các dữ kiện phổ khối:
+ Lồi rong Nâu Lobophora sp.: cĩ 37 dạng phân tử DGTA xác định theo giá trị khối lượng tăng dần và thời gian lưu:
Rt 6,71: DGTA 28:0; MS- m/z 656,5454 [M+H]+; MS2- m/z 446,3511 [M+H- C14H26O]+, 428,3420 [M+H-C14H28O2]+, 236,1413 [glyceryltrimethylhomoserine- C10H22NO5]+.
Rt 6,5: DGTA 30:1; MS- m/z 682,5651 [M+H]+; MS2- m/z 472,3652 [M+H- C14H26O]+, 454,3696 [M+H-C14H28O2]+, 446,3415 [M+H-C16H28O]+, 428,3349 [M+H-C16H30O2]+, 236,1401[C10H22NO5]+.
Rt 6,59: DGTA 32:3; MS- m/z 706,5612 [M+H]+; MS2- m/z 496,3618 [M+H- C14H26O]+, 478,3543 [M+H-C14H28O2]+, 446,3437 [M+H-C18H28O]+, 428,3448 [M+H-C18H30O2]+, 236,1537 [C10H22NO5]+.
Rt 6,32: DGTA 32:2; MS- m/z 708,5813 [M+H]+; MS2- m/z 498,3774 [M+H- C14H26O]+, 480,3655 [M+H-C14H28O2]+, 446,3509 [M+H-C18H30O]+, 428,3392 [M+H-C18H32O2]+, 236,1423 [C10H22NO5]+.
Rt 5,96: DGTA 32:1; MS- m/z 710,5983 [M+H]+; MS2- m/z 500, 3774 [M+H- C14H26O]+, 482,3875 [M+H-C14H28O2]+, 474,3904 [M+H-C16H28O]+, 472,3636 [M+H-C16H28O]+, 456,3533 [M+H-C16H30O2]+, 454,3615 [M+H-C16H32O2]+, 446,353 [M+H-C18H32O]+, 236,1612 [C10H22NO5]+.
Rt 6,89: DGTA 34:6; MS- m/z 728,5457 [M+H]+; MS2- m/z 518,3253 [M+H- C14H26O]+, 500,3473 [M+H-C14H28O2]+, 446,3511 [M+H-C20H26O]+, 428,3231 [M+H-C20H28O2]+.
Rt 6,53: DGTA 34:5; MS- m/z 730,5541 [M+H]+; MS2- m/z 520,3630 [M+H- C14H26O]+, 502,3661 [M+H-C14H28O2]+, 446,3487 [M+H-C20H28O2]+, 428,3343 [M+H-C20H30O2]+, 236,1615 [C10H22NO5]+.
Rt 6,2: DGTA 34:4; MS- m/z 732,5674 [M+H]+; MS2- m/z 522,3753 [M+H- C14H26O2]+, 504,3730 [M+H-C14H28O2]+, 446,3495 [M+H-C20H30O]+, 428,3378 [M+H-C20H32O2]+.
Rt 6,05: DGTA 34:3; MS- m/z 734,582 [M+H]+; MS2- m/z 524,3960 [M+H- C14H26O]+, 506,3819 [M+H-C14H28O2]+, 498,3959, 480,3784, 478,3551 [M+H- C16H32O2]+, 474,3584 [M+H-C18H28O]+, 456,3717 [M+H-C18H30O2]+, 446,3515 [M+H-C20H32O]+, 428,3433 [M+H-C20H34O2]+.
Rt 5,81: DGTA 34:2; MS- m/z 736,6094 [M+H]+; MS2- m/z 526,4107 [M+H- C14H26O]+, 498,3788 [M+H-C14H28O2]+, 498,3959, 480,3684 [M+H-C16H32O2]+, 474,3795 [M+H-C18H30O]+, 456,3671 [M+H-C18H32O2]+, 446,3490 [M+H- C20H34O]+ 428,3231 [M+H-C20H36O2]+, 236,1413 [C10H22NO5]+.
Rt 5,48: DGTA 34:1; MS- m/z 738,6298 [M+H]+; MS2- m/z 500,3955 [M+H- C16H30O]+, 482,3784 [M+H-C16H32O2]+, 474,3783 [M+H-C18H32O]+, 456,3721 [M+H-C18H34O2]+, 236,1485[C10H22NO5]+.
Rt 5,27: DGTA 34:1; MS- m/z 752,6434 [M+H]+; MS2- m/z 514,4129 [M+H- C16H30O]+, 488,4024 [M+H-C18H32O]+, 474,3751.
Rt 6,38: DGTA 34:1; MS- m/z 756,5699 [M+H]+; MS2- m/z 518,3465 [M+H- C16H30O]+, 474,3853 [M+H-C18H34O2]+.
Rt 6,02: DGTA 36:5; MS- m/z 758,5821 [M+H]+; MS2- m/z 522,3921,
520,3371 [M+H-C16H30O]+, 502,3531 [M+H-C16H32O2]+, 474,3830 [M+H- C20H28O]+.
Rt 5,72: DGTA 36:4; MS- m/z 760,6001 [M+H]+; MS2- m/z 522,3881 [M+H- C16H30O]+, 504,3641 [M+H-C16H32O2]+, 474,3866 [M+H-C20H30O]+, 456,3665 [M+H-C20H32O2]+, 236,1517 [C10H22NO5]+.
Rt 5,51: DGTA 36:3; MS- m/z 762,6193 [M+H]+; MS2- m/z 524,3906 [M+H- C16H30O2]+, 508,3945 [M+H-C16H30O2]+, 506,3831 [M+H-C16H32O2]+, 500,3887 [M+H-C18H30O]+, 498,3959 [M+H-C18H32O]+, 482,3887 [M+H-C18H32O2]+, 474,3787 [M+H-C20H32O]+, 456,3730 [M+H-C20H34O2]+, 236,1512 [C10H22NO5]+.
Rt 5,18: DGTA 36:1; MS- m/z 766,6548 [M+H]+; MS2- m/z 502,4039 [M+H- C18H32O]+, 500,3984 [M+H-C18H34O]+, 474,3777 [M+H-C20H36O]+.
Rt 5,84: DGTA 38:6; MS- m/z 784,6011 [M+H]+; MS2- m/z 522,382 [M+H- C18H30O]+, 504,3829 [M+H-C18H32O2]+, 498,3755 [M+H-C20H30O]+, 480,3495 [M+H-C20H32O2]+.
Rt 5,54: DGTA 38:5; MS- m/z 786,6138 [M+H]+; MS2- m/z 522,3842 [M+H- C18H32O]+, 504,3641 [M+H-C18H34O2]+, 500,3883 [M+H-C20H30O]+, 482,3842 [M+H-C20H32O2]+.
Rt 5,33: DGTA 38:4; MS- m/z 788,6306 [M+H]+; MS2- m/z 524,3876 [M+H- C18H32O]+, 506,3880 [M+H-C18H34O2]+, 502,4468 M+H-C20H30O]+, 500,3884 [M+H-C20H32O]+, 482,3862 [M+H-C20H34O2]+.
Rt 5,21: DGTA 38:3; MS- m/z 790,6501 [M+H]+; MS2- m/z 526,4107 [M+H- C18H32O]+, 524,3980 [M+H-C18H36O2]+, 508,4064 [M+H-C18H34O2]+, 502,4126 [M+H-C20H32O]+, 482,3862 [M+H-C20H34O2]+. Rt 6,56: DGTA 40:10; MS- m/z 804,5707 [M+H]+; MS2- m/z 518,3253 [M+H-C20H30O]+. Rt 6,23: DGTA 40:9; MS- m/z 806,5888 [M+H]+; MS2- m/z 522,3923 [M+H- C20H28O]+, 502,3488 [M+H-C20H32O2]+. Rt 5,81: DGTA 40:8; MS- m/z 808,6031 [M+H]+; MS2- m/z 522,3762 [M+H- C20H30O]+, 504,6488 [M+H-C20H32O2]+. Rt 5,69: DGTA 40:7; MS- m/z 810,617 [M+H]+; MS2- m/z 522,3888 [M+H- C20H32O]+, 506,3976 [M+H-C20H32O2]+.
Rt 5,39: DGTA 40:6; MS- m/z 812,6332 [M+H]+; MS2- m/z 526,4123 [M+H- C20H30O]+, 524,3980 [M+H-C20H32O]+, 522,3815 [M+H-C20H34O]+, 508,4074 [M+H-C20H32O2]+, 506,3802 [M+H-C20H34O2]+, 504,3840 [M+H-C20H36O2]+.
Rt 5,21: DGTA 40:5; MS- m/z 814,6478 [M+H]+; MS2- m/z 528,4043 [M+H-
C20H30O]+, 526,4107 [M+H-C20H32O]+, 524,4093 [M+H-C20H34O]+, 522,3661 [M+H- C20H36O]+, 510,3973 [M+H-C20H32O2]+, 506,3881 [M+H-C20H36O2]+.
+ Lồi rong Lục Halimeda incrasata Lamx.: khơng cĩ dạng phân tử DGTA.