CHƢƠNG 3 : CƠ SỞ LÝ THUYẾT MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM
3.2 Một số kỹ thuật sắc ký
3.2.3 Sắc ký lớp mỏng
Sắc ký lớp mỏng (hay sắc ký bản mỏng) cịn gọi là sắc ký phẳng dựa chủ yếu vào hiện tƣợng hấp thu trong đĩ pha động là một dung mơi hoặc hỗn hợp các dung mơi, di chuyển ngang qua pha tĩnh là một chất hấp thu trơ, thí dụ nhƣ silica gel. Pha tĩnh này đƣợc tráng thành một lớp mỏng, đều, phủ lên một nền phẳng nhƣ tấm kiếng, tấm nhơm hoặc tấm plastic.
Bình sắc ký: một chậu, hũ, lọ,… bằng thủy tinh, hình dạng đa dạng, cĩ nắp đậy. Pha tĩnh: một lớp mỏng khoảng 0,25 mm của một loại chất hấp thu, thí dụ nhƣ silica gel, alumin,…đƣợc tráng thành một lớp mỏng, đều, phủ lên một nền phẳng nhƣ tấm kiếng, tấm nhơm hoặc tấm plastic.
Mẫu chất phân tích thƣờng là hỗn hợp gồm nhiều chất với độ phân cực khác nhau, thơng qua một ống vi quản, đƣợc đƣa lên lớp pha tĩnh ở vị trí cao hơn một chút so với mặt thống của chất lỏng đang chứa trong bình sắc ký.
Trong quá trình sắc ký, pha động di chuyển theo chiều từ dƣới lên nhờ lực mao quản, mỗi thành phần của mẫu chất sẽ di chuyển với một vận tốc khác nhau, đi phía
Dung mơi giải ly Chất hấp phụ Lớp giấy lọc Cao chiết Phễu lọc Hệ thống tạo chân khơng Bình tam giác Hình 14: Hệ thống chiết pha rắn
sau mực của dung mơi. Vận tốc di chuyển này phụ thuộc vào các tƣơng tác với pha tĩnh và pha động của các thành phần trong mẫu chất.
Đối với pha tĩnh là silica gel các chất kém phân cực sẽ di chuyển nhanh và các chất phân cực sẽ di chuyển chậm.
Giải ly bản mỏng
Chuẩn bị bình giải ly bản mỏng
Chuẩn bị bình cĩ kích thƣớc lớn hơn một chút so với kích thƣớc của bản mỏng. Cho dung mơi hoặc hỗn hợp dung mơi vào bình. Mực dung mơi khơng đƣợc cao hơn vị trí chấm mẫu trên bản mỏng.
Trƣớc khi cho tấm bản mỏng vào bình, bình cần đƣợc bão hịa dung mơi để cĩ một bầu khí quyển đồng nhất, để quá trình bão hịa dung mơi đƣợc nhanh ngƣời ta phủ bề mặt trong của bình bằng một tờ giấy lọc, nghiêng đảo nhẹ bình giải ly để dung mơi thấm ƣớt tờ giấy lọc.
Đặt tấm bản mỏng vào bình triển khai, cạnh đáy của bản ngập vào dung mơi giải ly khoảng 0,5-1 cm. Hệ dung mơi giải ly phù hợp là sau khi giải ly, hệ sẽ cho các vết chính cĩ Rf khoảng từ 0,3-0,6. Hình 15: Triển khai SKLM Các vết chấm mẫu trên bản mỏng Bình triển khai sắc ký Nắp đậy bình Giấy lọc
Hiện hình các vết sau khi giải ly
Sử dụng máy soi UV ở các bƣớc sĩng 254 và 365 nm.
Nhúng bản mỏng với dung dịch H2SO4 20% trong metanol. Sau đĩ hơ nĩng trên bếp điện đến khi các vết hiện rõ
Hình 16: Cách tính giá trị Rf Tiền tuyến dung mơi Mức xuất phát a b b a f
R Đoạn đƣờng di chuyển của hợp chất Đoạn đƣờng di chuyển của dung mơi
Phần 2
THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ