CHƢƠNG 5 : THỰC NGHIỆM
5.2 Sắc ký cột cao Ea3
5.2.1 Xử lý phân đoạn Ea3.2
Hình 23: SKLM phân đoạn Ea3.2 Hình 24: SKC phân đoạn Ea3.2
Tiến hành SKC phân đoạn Ea3.2 khối lƣợng là 2,8 g bằng cột cĩ đƣờng kính 2.8 cm và 50 g silica gel, giải ly cột với dung mơi Ea:PE = 8:2 và tăng dần độ phân cực dung mơi. Dùng các lọ bi cĩ thể tích 50 ml để hứng dung dịch sau sắc ký đồng thời kết hợp SKLM để theo dõi tiến trình giải ly cột. Thu gom các lọ cho kết quả SKLM tƣơng tự nhau và cơ quay thu hồi dung mơi chúng tơi cĩ đƣợc tất cả 5 phân đoạn. Cụ thể ở Bảng 2.
Ea:PE 9:1
Bảng 2: Kết quả khảo sát phân đoạn Ea3.2 Ký hiệu phân đoạn Dung mơi giải ly cột Khối lƣợng các
phân đoạn (g) Nhận xét qua SKLM
Ea3.2.1 Ea:PE = 8:2 0,25 vệt màu xanh kéo dài, rất mờ
Ea3.2.2 Ea:PE = 9:1 0,48 SKLM cho thấy vệt xanh rất đậm, khơng cĩ vết rõ ràng
Ea3.2.3 Ea 0,47
Vết chính màu tím trịn, cĩ vệt dơ ở phía trên và dƣới, kết tinh cho tinh thể màu
trắng
Ea3.2.4 Ea:Me = 9:1 0,12 Vệt dài, cĩ vết chính màu tím mờ
Ea3.2.5 Me 0,6 Vệt xanh đen dài, khơng cĩ vết chính
Tiếp tục xử lý phân đoạn Ea3.2.3. Sử dụng cột sắc ký đƣờng kính 0,9 cm, chiều dài 40 cm và 15 g silica gel để tiến hành làm sạch chất. Dung mơi sắc ký cột ban đầu là Ea:PE = 9:1 nhằm loại bỏ các vết dơ ở phía trên của vết chính và tăng dần độ phân cực dung mơi giải ly đến khi thu đƣợc vết tím đồng nhất trên SKLM, với Rf = 0,5, dung mơi giải ly bản mỏng là C:Me = 8:2. Chúng tơi đặt tên cho hợp chất này là TUYEN_Hydbon và cho kết tinh ở nhiệt độ phịng để tiến hành gởi mẫu phân tích phổ NMR tại Viện Khoa Học Cơng Nghệ Quốc Gia, số 18 Hồng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, Hà Nội.
Hình 26: SKLM TUYEN_Hydbon với ba hệ dung mơi giải ly khác nhau
SKLM phân đoạn Ea3.2.3, dung mơi giải ly Ea:Me = 9:1
SKC phân đoạn Ea3.2.3
SKLM TUYEN_Hydbon
Hình 25: Quá trình làm tinh sạch hợp chất TUYEN_Hydbon
Tinh thể TUYEN_Hydbon 2 1 3 1 Ea = 9:1 2 C:Me = 8:2 3 Ea:Me = 9:1
Giải đốn phổ NMR hợp chất TUYEN_Hydbon
Từ kết quả phổ proton 1H-NMR cĩ đƣợc, chúng tơi thấy rằng hợp chất TUYEN_Hydbon cĩ số lƣợng proton quá lớn (qua cƣờng độ tích phân cĩ thể ƣớc đốn số H gắn trên carbon bão hịa nhiều hơn gấp khoảng 200 lần so với số proton gắn trên carbon bất bão hịa), ngồi ra khơng cĩ tín hiệu mũi nào cho thấy sự xuất hiện của các loại nhĩm chức cũng nhƣ proton của carbon olefin. Bên cạnh đĩ đƣờng nền dung mơi bị nhiễu mạnh. Do dĩ chúng tơi kết luận, TUYEN_Hydbon cĩ thể là một hỗn hợp các alkan cĩ mạch carbon dài và dừng cơng việc khảo sát trên phân đoạn Ea3.2.
Tuy đây là một kết quả khơng đạt đƣợc nhƣ mong muốn nhƣng qua những cơng đoạn xử lý và giải đốn phổ trên đã cho riêng bản thân tơi một kinh nghiệm thực tiễn rất quan trọng, SKLM chỉ cĩ thể giúp đánh giá về sự tinh sạch của một hợp chất cũng nhƣ xác định giá trị Rf , so sánh độ phân cực của các chất ở một mức độ tƣơng đối. Từ đĩ tơi sẽ lƣu ý hơn, tinh tế hơn để tiếp tục thực hiện đề tài một cách hiệu quả.