PHƢƠNG PHÁP – PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU

NGHIÊN CỨU

4.1 Phƣơng pháp

4.1.1 Tính chất nguyên liệu

Nguyên liệu tƣơi sau khi thu hái đƣợc rửa sạch, loại bỏ những phần bị sâu bệnh, nấm mĩc, vàng héo, tách riêng phần thân và lá; đem phơi giĩ đến gần khơ rồi sấy ở nhiệt độ 45-50C đến khơ. Sau đĩ đem xay nhuyễn, thu đƣợc mẫu bột nguyên liệu.

4.1.2 Phương pháp chiết tách

Bột cây đƣợc chiết trong metanol bằng phƣơng pháp ngâm dầm, mỗi lần ngâm khoảng 12 giờ, thu đƣợc dịch chiết. Dịch chiết từ các lần ngâm đƣợc gom lại, cơ quay đuổi dung mơi thu đƣợc cao alcol tổng.

Điều chế cao PE, Ea, C và Me bằng phƣơng pháp chiết rắn-lỏng sắc ký cột nhanh, sơ đồ điều chế các loại cao cĩ độ phân cực khác nhau nhƣ hình 18.

Hình 17: Sơ đồ tổng quát điều chế các loại cao cĩ độ phân cực khác nhau

Rau má lá sen

Bột cây

Cao alcol tổng

Rửa sạch, loại bỏ phần hƣ hại Sấy khơ 45-50C

Ngâm dầm với metanol

Chiết rắn-lỏng với C Chiết rắn-lỏng với Ea Cao PE Cao C kg ) Rau má lá sen (90 kg) Cao Ea Cao Me Chiết rắn-lỏng với PE Chiết rắn-lỏng với Me

4.1.3 Phương pháp phân lập và tinh chế

Sử dụng phƣơng pháp SKC để tách các chất, dị tìm hệ dung mơi giải ly cột và kiểm tra quá trình SKC cũng nhƣ mức độ tinh sạch của hợp chất bằng SKLM

Dùng phƣơng pháp kết tinh lại để tinh chế hợp chất.

4.1.4 Phương pháp xác định cấu trúc

Dựa trên dữ liệu các loại phổ NMR, MS đƣợc gởi đo tại Viện Khoa Học Cơng Nghệ Quốc Gia, số 18 Hồng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, Hà Nội.

4.2 Phƣơng tiện

4.2.1 Dụng cụ

Tủ sấy: dùng để sấy nguyên liệu và các dụng cụ bằng thủy tinh.

Máy cơ quay: để thu hồi dung mơi, làm khơ mẫu trƣớc khi gởi đo phổ. Cột sắc ký cĩ đƣờng kính (d), chiều dài (l) nhƣ sau:

+ d = 5,0 cm, l = 55 cm + d = 2,8 cm, l = 40 cm + d = 2,0 cm, l = 40 cm + d = 0,9 cm, l = 45 cm + d = 0,7 cm, l = 30 cm

Một số dụng cụ khác: lọ bi, chai đựng dung dịch, các loại cốc thủy tinh, bình chiết, đũa thủy tinh, bếp điện, cân điện tử,…

4.2.2 Hĩa chất

Silica gel 60 (0,04-0,06 mm) Scharlau và bản mỏng tráng sẵn (Merck, Đức). Dung mơi: eter dầu hỏa, cloroform, etyl acetat, metanol, etanol, acid formic, acid acetic, acetone.

Na2SO4 dùng để làm khan dung mơi.

4.2.3 Thời gian, địa điểm

Thời gian: từ tháng 01/2011 đến tháng 05/2011.

Đề tài: “Phân lập chất từ cao etyl acetat của cây rau má lá sen Hydrocotyle bonariensis L., họ ngị (Apiaceae)” đƣợc thực hiện tại phịng thí nghiệm Hĩa hữu

cơ và phịng thí nghiệm Lý-Sinh, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, trƣờng Đại Học Cần Thơ.