CHƯƠNG 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG
3.1. Đối tượng nghiên cứu
3.1.1. Vật liệu
- Các mẫu ruột tôm được thu thập từ vùng biển huyện Hải Hậu, tỉnh Nam
Định được sử dụng để phân lập các chủng vi khuẩn của đề tài.
- Các chủng vi sinh vật kiểm định được lấy từ bộ sưu tập các chủng của
Phòng Các chất chức năng sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, bao gồm E. coli ATCC 25922, Salmonella
typhi ATCC 14028, Staphylococcus aureus ATCC 25923; Vibrio
parahaemolyticus, Vibrio harveyi.
3.1.2. Dụng cụ máy móc, thiết bị, hố chất
- Kính hiển vi Nikon YS100, máy ly tâm Hittich MIKRO 185, tủ nuôi lắc Wise Cube, nồi khử trùng Tomy ES 315, bốc cấy, cân điện tử, tủ ủ, buồng đếm hồng cầu và một số dụng cụ khác.
- pH kế
- Tỷ trọng kế, tủ sấy, bình hút ẩm
- Ống đong, cốc đong, pipet, que cấy, đầu côn, ống ly tâm, ống falcon, duran, đĩa petri, bình tam giác các loại.
- NaOH, HCl, …
3.1.3. Môi trường nuôi cấy vi sinh vật
- Môi trường phân lập:
Môi trường Luria-Bertani (LB-agar): peptone 10 g, cao nấm men 5 g, NaCl
5 g, agar 20g, pH 7, nước cất vừa đủ 1 lít.
Nutrient Broth (NB-agar): peptone 10 g, cao thịt bò 5 g, NaCl 5 g, agar 20g,
pH 7, nước cất vừa đủ 1 lít.
- Các mơi trường ni cấy vi sinh vật được khử trùng ở 121°C trong 20 phút, để nguội trước khi sử dụng.
21
- Hoá chất: Kit E.Z.N.A. ® Bacterial của hãng OMEGA, Master Mix (Invitrogen, Mỹ).
- Môi trường LB với các thành phần như trên có bổ sung các cơ chất tinh
bột (0,2%, w/v), Carboxymethyl cellulose (CMC) (0,2%, w/v) và casein (0,2%,
w/v), được sử dụng trong nghiên cứu hoạt tính của các enzyme ngoại bào tương ứng amylase, celluase, protease bằng phương pháp khuếch tán.