2013) [112]
1.3.2.2. Ứng dụng kỹ thuật Scopions ARMS trong xét nghiệm gen KRAS,
BRAF
Kỹ thuật Scorpions ARMS cho phép phát hiện được bảy dạng đột biến hay gặp nhất nằm trên codon 12, 13 của gen KRAS và đột biến V600E trên
codon 600 của gen BRAF. Rafael G A và cộng sự sử dụng kỹ thuật Scorpions Bước 1: Mồi của Scorpions
gắn với sợi khuôn DNA ở
vùng mục tiêu thăm dò.
Bước 2: Mồi của Scorpions khuếch đại kéo dài bởi
DNA polymerase và dừng lại bởi các nhóm chặn dừng sao chép.
Bước 3: Nhiệt độ phản ứng
PCR và phần mồi mới kéo dài làm biến tính phân tử Scorpions.
Bước 4: Phản ứng PCR
nguội, Scorpion với mồi mới đã kéo dài sắp xếp lại
cấu trúc. Fluorophor khơng cịn bị ức chế bởi quencher
nên phát tín hiệu. Nếu mồi k h ô n g đ ư ợc k é o d à i , Scorpions sẽ tái lập cấu trúc ban đầu và tín hiệu của
fluorophore bị dập tắt bởi quencher. ^ ^ ^ ^ ^
ARMS phát hiện được 7 dạng đột biến tại codon 12 và 13 gen KRAS là:
G12D, G12A, G12V, G12S, G12R, G12C, và G13D chiếm 43% trong 427 người bệnh ung thư đại trực tràng [97].
Từ tháng 4 năm 2009 đến tháng 3 năm 2010, Bando H và cộng sự
nghiên cứu trên 159 mẫu ung thư đại trực tràng sử dụng kỹ thuật Scopions
ARMS và giải trình tự trực tiếp. Trong đó 59 (37,0%) mẫu đột biến gen
KRAS được phát hiện bởi kỹ thuật giải trình tự trực tiếp và 70 (44,0%) mẫu đột biến gen KRAS được phát hiện bởi kỹ thuật Scopions ARMS. Tất cả các
mẫu đột biến gen KRAS xác định bởi kỹ thuật giải trình tự trực tiếp cũng đã được xác định bởi kỹ thuật Scopions ARMS. Tuy nhiên, 11 mẫu trong số 70
mẫu đột biến gen KRAS được xác định bởi kỹ thuật Scopions ARMS không được phát hiện bởi kỹ thuật giải trình tự trực tiếp [113]. Franklin W A và cộng
sự sử dụng cả hai kỹ thuật Scorpions ARMS và giải trình tự trực tiếp để xác
định đột biến gen KRAS trên 59 mẫu mô ung thư đại trực tràng. Kết quả của
kỹ thuật Scorpions ARMS phát hiện được 43% số mẫu có đột biến gen KRAS trong khi kỹ thuật giải trình tự phát hiện được 36% số mẫu có đột biến gen
KRAS [114]. Krol và cộng sự sử dụng kỹ thuật Scopions ARMS nghiên cứu so sánh đột biến gen KRAS và BRAF trên mẫu mô thu được bằng sinh thiết
và mẫu mô thu được bằng phẫu thuật. Tần số đột biến gen KRAS phát hiện được là 33,9% và đột biến gen là BRAF 19,0%. Sự phù hợp của tình trạng đột
biến gen KRAS giữa mẫu mô thu được bằng sinh thiết và mẫu mô thu được
bằng phẫu thuật là 97,4% [115]. Kỹ thuật Scorpions ARMS có chi phí cao, chỉ phát hiện được các dạng đột biến có chủ định trước theo thiết kế của mồi,
nhưng thời gian thực hiện ngắn và nổi bật là có độ nhạy cao ngay cả với
1.4. ĐIỀU TRỊ ĐÍCH EGFR TRONG UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG 1.4.1. Cấu trúc của phân tử Cetuximab
Cetuximab là một kháng thể đơn dòng của lớp IgG1 có tác dụng trên
EGFR người và bao gồm 4 chuỗi polypeptide, hai chuỗi nặng giống hệt nhau, mỗi chuỗi gồm 449 axit amin và hai chuỗi nhẹ giống hệt nhau mỗi chuỗi gồm 214 axit amin [117].