Chƣơng 2 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. Phƣơng pháp thu thập số liệu
2.4.2. Phương pháp thu thập số liệu cho mục tiêu 2
2.4.2.1. Đặc điểm lâm sàng
Nghiên cứu lâm sàng được tiến hành tại Khoa Nội tiết - Chuyển hóa - Di truyền, Bệnh viện Nhi Trung ương.
Khi trẻ nhập viện sẽ được cân, đo chiều dài nằm với trẻ < 2 tuổi bằng
thước SECA, khám phát hiện các triệu chứng của nhiễm toan xê tôn: thở
nhanh, dấu hiệu và mức độ mất nước, li bì, hơn mê, các triệu chứng khác: co giật, vàng da, bỏbú, lưỡi to, thoát vị rốn, sự phát triển tâm thần vận động.
Phỏng vấn bố mẹ và gia đình để phát hiện tiền sử chậm phát triển trong tử
cung, chậm lớn, chậm tăng cân hoặc gầy sút, chậm phát triển tâm thần vận động.
2.4.2.2. Đặc điểm sinh hóa
Các xét nghiệm sinh hóa được tiến hành tại Khoa Sinh hóa, Bệnh viện Nhi Trung ương.
Định lượng glucose máu, HbA1c, ure, creatinin, điện giải đồ, khí máu
động mạch, tổng phân tích nước tiểu ở thời điểm chẩn đốn:
+ Định lượng glucose máu tĩnh mạch: Sử dụng phương pháp
hexokinase trên máy hóa sinh tự động Beckman Coulter AU5800/AU680 và thuốc thử định lượng glucose ORS 6221 của hãng OLYMPUS. 2 ml máu tĩnh
mạch được thu thập vào buổi sáng sớm khi bệnh nhân ngủ dậy hoặc thời điểm bệnh nhân đến khám. Trị số bình thường 3,3 - 5,5 mmol/l. Tăng khi > 7,1
mmol/l (lúc đói) theo khuyến cáo của hiệp hội Đái tháo đường trẻ em và vị
thành niên thế giới (ISPAD) [39].
+ Phương pháp định lượng HbA1c: Sử dụng máy hóa sinh tự động Beckman Coulter AU680 và thuốc thử định lượng HbA1c ORS6192 (hãng olympus). Xét nghiệm bao gồm 2 quy trình: định lượng HbA1c bằng phương pháp miễn dịch ức chế cạnh tranh, định lượng Hb toàn phần bằng kỹ thuật so màu, từ đó tính ra tỷ lệ HbA1c/Hb tồn phần để có % HbA1c. Trị số bình
thường 4 - 6,2%. Tăng khi > 6,5%, theo khuyến cáo của của hiệp hội Đái tháo đường trẻ em và vị thành niên thế giới (ISPAD) [39].
+ Định lượng ure máu bằng phương pháp đo màu, creatinin máu bằng
tự động Beckman Couldter AU5800/AU640. Trị số bình thường: ure máu bình
thường 2,5 - 6,4 mmol/l; creatinin máu bình thường 27-88 µmol/l [77].
+ Điện giải đồ: sử dụng phương pháp điện cực chọn lọc ion trên máy hóa sinh tự động Beckman Couldter AU5800/AU640. Trị số bình thường: natri 130-147 mmol/l, kali 3,7-5,1 mmol/l [77].
+ Phương pháp đo khí máu động mạch: sử dụng phương pháp điện hóa
(điện cực chọn lọc) trên máy GASTAT-603ie. Trị số bình thường pH 7,35 - 7,45, HCO3 -: 13-28 mEq/l. pH giảm khi <7,30; HCO3 - giảm khi < 15 mmol/l [77], [78].
- Định lượng insulin, C-peptid (đối với bệnh nhân chẩn đoán lần đầu
chưa điều trị insulin):
+ Định lượng insulin theo phương pháp miễn dịch hóa phát quang trên máy sinh hóa tự động Hitachi 704 của Mỹ. Trị số bình thường: 5- 25 mU/L (18- 150 pmol/L) [79].
+ Định lượng nồng độ C-peptid bằng phương pháp miễn dịch hóa phát quang theo nguyên lý IRMA (Radioimmunometric assay). Được thực hiện trên máy sinh hóa tựđộng Hitachi 704 của Mỹ. Trị sốbình thường: 0,26- 0,62 nmol/l (0,78- 1,89 ng/ml) [79].
- Tổng phân tích nước tiểu: nước tiểu giữa dịng được phân tích các thông số: hồng cầu, bilirubin, urobilinogen, xê tôn, glucose, protein, pH, bạch cầu, tỷ
trọng, nitrite, sử dụng phương phápđo quang trên máy Strip Analyser 500. - Định lượng glucose máu mao mạch bằng máy đo glucose máu One
Touch Ultra: sử dụng phương pháp điện hóa. Que thử có một mao mạch hút một sốlượng rất ít máu. Lượng glucose trong máu phản ứng với một điện cực enzyme có chứa glucose oxidase (hoặc dehydrogenase). Enzyme này được tái oxy hóa với lượng dư của một thuốc thử, chẳng hạn như một ferricyanide ion, một dẫn xuất ferrocen hoặc osmium phức tạp bipyridyl. Những chất này được
oxy hóa bằng phản ứng ởđiện cực tạo ra một dịng điện. Tổng sốphí đi qua các điện cực tỷ lệ thuận với lượng glucose trong máu đã phản ứng với các enzyme.
- Để đánh giá chính xác sự giao động glucose máu, một số bệnh nhân
được theo dõi glucose máu liên tục 24 giờ trong nhiều ngày bằng máy đo
glucose máu liên tục Ipro. Nguyên lý hoạt động của máy này tương tự như
thử glucose máu bằng que thử, tuy nhiên máy có thể thử 288 mẫu/ngày và biểu diễn kết quả bằng đồ thị.