2.3.1.1. Nghiên cứu độc tính cấp trên chuột.
- Nghiên cứu độc tính cấp và xác định LD50theo hướng dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới và phương pháp xác định LD50 của Litchfield – Wilcoxon [144],[145].
- Tiến hành nghiên cứu:
+ Chuột nhắt trắng được chia thành các lô, mỗi lô 10 chuột. Chuột nhịn ăn 12 giờtrước khi uống thuốc, vẫn uống nước đầy đủ.
+ Cho từng lô chuột uống thuốc thử (Hoạt huyết an não) từ liều cao nhất không gây chết chuột đến liều thấp nhất gây chết 100% chuột.
+ Theo dõi số chuột chết trong 72 giờ đầu và tình trạng chung của chuột trong 7 ngày sau khi uống thuốc.
+ Có chuột chết, mổ đánh giá đại thể các tổn thương gan thận. Xác định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết trong 72 giờđầu.
2.3.1.2. Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên thỏ [144], [145]
- Thỏđược chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng 1 chuồng. + Lô chứng: Uống nước cất 3ml/kg/24giờ.
+ Lô trị 1: Uống Hoạt huyết an não 0,36g/kg/24giờ (liều tương đương sử dụng trên lâm sàng, tính theo hệ sốquy đổi là 3).
+ Lô trị 2: Uống Hoạt huyết an não liều 1,08g/kg/24giờ (gấp 3 lần lô trị 1). + Thỏđược uống nước và thuốc thử trong 8 tuần liên tục, ngày 1 lần vào 8 giờ sáng.
- Các chỉ tiêu đánh giáở thời điểm: Trước nghiên cứu, sau 4 tuần và 8 tuần:
+ Tình trạng chung và trọng lượng của thỏ.
+ Đánh giá chức năng tạo máu: Số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, thể tích trung bình hồng cầu hàm lượng hemoglobin, hematocrit, công thức bạch cầu.
+ Đánh giá chức năng gan thơng qua định lượng một số chất chuyển hóa trong máu: Bilirubin tồn phần, albumin, cholesterol toàn phần.
+ Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzym ALT, AST.
+ Kết quả mô bệnh học: Sau 8 tuần uống Hoạt huyết an não, thỏ được mổ để quan sát đại thể tim, gan, phổi, thận, não bộ và lấy mẫu ngẫu nhiên (30% số thỏở mỗi lô) soi cấu trúc vi thể gan, thận.