Chƣơng 1 : TỔNG QUAN
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.4.3. Các thăm khám, xét nghiệm và kỹ thuật thực hiện trong nghiên cứu
2.4.3.1 Thăm khám lâm sàng, hoàn thành hồ sơ thụ tinh trong ống nghiệm
Trƣớc khi bắt đầu thực hiện các quy trình thụ tinh trong ống nghiệm, mỗi cặp vợ chồng đều đƣợc làm hồ sơ, tƣ vấn, khám lâm sàng và làm các xét nghiệm cơ bản.
Đối với ngƣời vợ:
Khám phụ khoa tổng quát.
Xét nghiệm: HbsAg, TPHA, HIV, Chlamydia, công thức máu, sinh hóa máu, xét nghiệm nội tiết cơ bản FSH, E2, LH vào ngày 2, 3 của chu kỳ
kinh, xét nghiệm prolactin, AMH.
Siêu âm tử cung và hai buồng trứng, đếm nang thứ cấp vào ngày thứ 2 - 3 vòng kinh.
Đối với ngƣời chồng:
Khám nam khoa tổng quát.
Xét nghiệm: HbsAg, TPHA, HIV.
Xét nghiệm tinh dịch đồ.
2.4.3.2 Thực hiện các thăm dò cận lâm sàng a) Định lượng AMH và FSH
Vào ngày 2 hoặc 3 của chu kỳ kinh, bệnh nhân đƣợc rút 2ml máu cho vào ống nghiệm không chứa chất chống đông. Mẫu máu đƣợc thực hiện tách huyết thanh trong vòng 1 giờ sau khi thu nhận mẫu. Các mẫu huyết thanh đƣợc trữ lạnh trong tủ cấp đông ở nhiệt độ - 20°C. Mẫu huyết thanh đƣợc phòng xét nghiệm thực hiện định lƣợng AMH và FSH trong vòng 24h.
Định lƣợng AMH đƣợc thực hiện bằng phƣơng pháp AMH gen II Elisa
(Beckman Coulter, Mỹ) trên máy tự động Beckman Coulter (Mỹ). Đơn vị đo lƣờng của AMH là ng/ml.
Định lƣợng FSH đƣợc thực hiện bằng phƣơng pháp miễn dịch điện hóa phát quang (Electrochemilunescence) trên máy tự động Cobas e411 (Roche, Đức). Đơn vị đo lƣờng của FSH là IU/L.
b) Thực hiện AFC qua siêu âm
Chỉ số AFC đƣơc thực hiện bằng siêu âm 2D đầu dò âm đạo với tần số 7,5
MHz (Alocar Prosoud 6, Nhật) vào ngày 2 - 4 của chu kỳ kinh. AFC đƣợc thực hiện bởi 1 bác sĩ theo quy trình kỹ thuật đƣợc khuyến cáo bởi nhóm chuyên gia của hiệp hội sinh sản ngƣời và Phôi học Châu Âu đƣa ra vào năm 2010 [81].
Các bƣớc thực hiện nhƣ sau :
- Bệnh nhân đi tiểu sạch, nằm tƣ thế sản phụ khoa với mông đƣợc kê hơi cao trên gối.
- Đầu dò siêu âm đƣợc bao bằng cao su với gel siêu âm đƣợc cho vào giữa đầu dị và bao cao su để đạt đƣợc hình ảnh rõ nhất.
- Bác sỹ siêu âm xác định vị trí 2 buồng trứng, xem toàn diện 2 chiều buồng trứng.
- Đo kích thƣớc 2 chiều của nang lớn nhất ở 2 buồng trứng.
Nếu nang lớn nhất có đƣờng kính ≤ 10 mm
+ Đếm tất cả các nang có kích thƣớc từ 2 đến 10mm từ bờ ngoài 1 bên của buồng trứngsang bên đối diện.
+ Tất cả các cấu trúc tròn, chỗ trống trong buồng trứng đều đƣợc xem là nang.
+ Lặp lại quy trình cho buồng trứng bên đối diện.
+ Cộng tất cả các nang đếm đƣợc ở 2 buồng trứng để tính AFC Nếu nang lớn nhất có đƣờng kính > 10 mm
+ Tiếp tục đo đƣờng kính những nang nhỏ hơn, cho đến khi thấy những nang có kích thƣớc ≤ 10mm.
+ Đếm tất cả các nang nhỏ ≤ 10mm nhƣ mô tả ở trên.
+ Cộng tất cả các nang đếm đƣợc ở 2 buồng trứng, loại các nang > 10mm để tính AFC.
2.4.3.3. Theo dõi sự phát triển của nang noãn, gây trưởng thành nỗn trong thụ
tinh trong ống nghiệm
Kích thích buồng trứng bằng phác đồ ngắn, dài hoặc phác đồ đối vận.
Trong nghiên cứu này các bệnh nhân đƣợc dùng thuốc theo quy ƣớc sau:
Bệnh nhân trẻdƣới 35 tuổi , dự trữ buồng trứng tốt , có nguy cơ q kích
buồng trứng, dùng phác đồđối vận với liều FSH khởi đầu:
BN dƣới 30 tuổi hoặc có tiền sử q kích BT liều 150 IU/ngày
BN 30 -35 tuổi liều 200 IU/ngày
Bệnh nhân ởđộ tuổi dưới 40 dự trữ buồng trứng tốt được dùng phác đồ dài liều FSH khởi đầu BN ≤ 30 tuổi liều 200 IU/ngày BN 31 - 36 tuổi liều 200 -250 IU/ngày BN 37- 40 tuổi liều 300 – 350 IU/ngày Bệnh nhân có giảm dự trữ buồng trứng đƣợc dùng phác đồ ngắn liều FSH khởi đầu BN ≤ 36 tuổi: 300 IU/ngày BN 37- 40 tuổi: 350 IU/ngày BN 41- 42tuổi: 400 IU/ngày BN > 42 tuổi: 450 IU/ngày
- Theo dõi sự phát triển nang noãn bắt đầu đƣợc thực hiện từ ngày thứ 6 tiêm thuốc FSH, kết hợp với định lƣợng nội tiết tố LH, estradiol và progesterone
để kiểm soát sự xuất hiện của đỉnh LH sớm, tăng progesterone sớm và chất lƣợng của nang noãn.
- Theo dõi sự phát triển nang noãn đƣợc thực hiện bởi ngƣời thực hiện đề tài.
Đếm tất cả các nang ở cả hai buồng trứng. Đo đƣờng kính nang nỗn bằng
đo đƣờng kính ngắn nhất và dài nhất để lấy kích thƣớc trung bình nếu nang khơng trịn đều.
- Kết hợp theo dõi sự phát triển nang noãn và điều chỉnh liều thuốc FSH (xem phụ lục qui ƣớc vềcách điều chỉnh liều thuốc FSH)
- Khi có ít nhất hai nang nỗn kích thƣớc từ 18 mm trở lên sẽ tiêm bắp 10.000 IU hCG.
- Chọc hút noãn dƣới hƣớng dẫn siêu âm đƣờng âm đạo 36 giờ sau mũi
tiêm hCG.
- Tìm và nhặt nỗn trong dịch nang chọc hút dƣới kính hiển vi soi nổi, cho
noãn vào đĩa và ủ trong tủ cấy trong thời gian 2 -6 giờ.
2.4.3.4 Chọc hút noãn
Chọc hút nỗn qua siêu âm đầu dị âm đạo đƣợc tiến hành ở thời điểm 36 giờ sau tiêm thuốc khởi động trƣởng thành noãn.
Sau khi bệnh nhân đƣợc gây mê tĩnh mạch, bác sỹ chọc hút noãn sử dụng kim chọc hút loại 17G, chiều dài 32cm gắn với bơm tiêm 10ml chọc qua cùng đồ dƣới hƣớng dẫn siêu âm đầu dò âm đạo tần số 7,5MHz (Alocar Prosoud 6, Nhật) vào nang buồng trứng để hút dịch nang có chứa nỗn.
Các bơm tiêm chứa dịch nang hút ra đƣợc chuyển ngay sang phòng cấy phơi để tìm nỗn. Chun viên phơi học bơm dịch nang từ bơm tiêm vào đĩa petri có đƣờng kính 100mm và kiểm tra dƣới kính hiển vi soi nổi ở độ phóng đại
10 lần. Khi thấy nỗn trên đĩa petri, chun viên phơi học dùng pipette hút noãn,
rửa nỗn với mơi trƣờng cấy, chuyển nỗn vào đĩa ni cấy và giữ trong tủ cấy ở nhiệt độ 37°C, 6% CO2 và 5% O2.
Sau khi kết thúc q trình tìm nỗn, tổng số nỗn thu đƣợc của mỗi bệnh nhân đƣợc ghi nhận trong hồ sơ bệnh án.