Chương 1 : TỔNG QUAN
1.5. Một số kỹ thuật di truyền ứng dụng để chẩn đoán hội chứng Prader-Willi
1.5.1. Kỹ thuật di truyền tế bào
Kỹ thuật di truyền tế bào quan sát và nghiên cứu các vật chất di truyền ở mức độ tế bào đó là NST (NST ở kỳ giữa, NST ở gian kỳ …). Để phân tích các bất thường về cấu trúc NST dựa vào băng NST. Băng NST (band) được định nghĩa là một phần của NST, các băng này phân chia NST thành các đoạn bởi các phần sáng hoặc tối với các phương pháp nhuộm băng khác nhau [70].
Kích thước đoạn NST bị mất trong PWS là rất nhỏ, chỉ có thể phát hiện với kỹ thuật băng G có độ phân giải cao, do vậy trong q trình ni cấy ngồi sử dụng các hóa chất thơng thường có sử dụng thêm FudR (fluorodeoxyuridine) và BrdU (5 - bromodeoxyuridine). Với kỹ thuật nhuộm băng G vùng băng màu đậm là vùng giàu AT, nhân đơi chậm và chứa ít gen. Ngược lại vùng băng màu sáng là vùng băng giàu GC, nhân đôi sớm hơn và là vùng chứa nhiều gen. Dựa vào sự phân bố các băng đậm nhạt như vậy sẽ phát hiện được các biến đổi về cấu trúc NST. Để phát hiện được mất đoạn nhỏ trong PWS, yêu cầu mức độ băng của NST sau khi nhuộm phải đạt được từ 600 - 800 băng khi có ít nhất 3 tiêu chuẩn trong các tiêu chuẩn sau: 2p25.2 rõ; 2q37.2 rõ; 10q21.1 và 10q21.3 phân tách ra; 17q22-q24 phân tách thành 3 băng tối [71].
Tuy nhiên hiện nay hầu hết các labo xét nghiệm di truyền không áp dụng kỹ thuật phân tích NST băng G có độ phân giải cao để xác định mất đoạn NST 15q11-q13, do sự phát triển của các kỹ thuật lai giữa di truyền và phân tử hay kỹ thuật di truyền phân tử với độ nhạy và độ đặc hiệu cao, quy trình thực hiện đơn giản với giá thành hợp lý. Do vậy trong thực hành lâm sàng chẩn đoán PWS, kỹ thuật phân tích NST đồ băng G thường được áp dụng để phát hiện các bất thường NST kèm theo, trong đó có các chuyển đoạn NST 15 chứa PWCR với các NST khác gây mất đoạn NST 15q11-q13, với
mục đích tư vấn di truyền và chỉ định chẩn đoán trước sinh những lần sinh con sau nếu chuyển đoạn NST đó có nguồn gốc từ bố bệnh nhân.