Bảng 2.7. Đặc điểm của các khu dân cư thu nhập kém
Quận Phường Diện tích (m2) Nhà Hộ gia đình Dân số Mật độ dân số (người/ha) % nhà khơng có toilet % các nhà khơng có hầm tự hoại 06 12 61.446 1.484 1.526 3.110 545 12,5 13 06 09 38.120 637 668 3.092 875 2 9,8 06 09 35.452 427 532 2.601 750 20,5 31,6
(Nguồn: Dự án cải thiện vệ sinh môi trường lưu vực kênh Tân Hóa-Lị Gốm )
2.6.3.4 NƯỚC THẢI SINH HOẠT VÀ CƠNG NGHIỆP
Với mật độ dân số cao khoảng 350 người/ha. Mỗi ngày một lượng nước thải lớn đã đổ vào kênh. Do điều kiện sinh sống còn nghèo nàn như nhà ổ chuột, nhà sàn trên kênh, tất cả nước thải đều bị đưa trực tiếp vào kênh. Đó là nguồn ô nhiễm quan trọng của dòng kênh.
Ở thượng nguồn, phần lớn có nhiều loại xí nghiệp nhà máy quy mơ nhỏ như: xí nghiệp chế biến Cầu Tre, cơng ty thủy sản Nhan Hịa, cơng ty thủy sản Vạn Hưng…Các xí nghiệp này hầu như khơng có hệ thống xử lý nước thải do đó nước thải cơng nghiệp đều đưa vào kênh.(xem Hình 2.15. Vị trí các cơng ty xí nghiệp
trong lưu vực Tân Hóa-Lị Gốm, năm 1998).
2.6.3.5 SỨC KHỎE CỘNG ĐỒNG
Để đánh giá sự tác động đến sức khỏe qua các dữ liệu thống kê tại lưu vực kênh Lò Gốm của trung tâm y tế quận, và các trạm y tế phường với 3 năm gần đây được thu thập tại các phường ở dọc kênh Lò Gốm. Kết quả từ các trung tâm y tế quận cho thấy cùng mẫu như nhau cho cả 3 quận đều có sự than phiền về khí thải.
Các bệnh có liên quan đến nước (viêm da, tiêu chảy) là nhóm quan trọng thứ 2 đe dọa sức khỏe và cho thấy mơi trường có chất lượng kém.
Mùi hơi thối kênh Lị Gốm tác động chất lượng khơng khí khơng tốt đối với cộng động ven kênh ảnh hưởng rỏ ràng qua tỷ lệ mắc bệnh hô hấp đối với dân địa phương lẩn thiệt hại về cơ sở hạ tầng và các thiết bị dân dụng ở gần kênh.
Các dữ liệu ghi chép được từ quận 6 cho thấy rằng lãnh vực tiêu chảy, kiết lỵ và thương hàn đã báo hiệu chiều hướng giảm dần trong khi đó bệnh sốt rét, sốt nhiệt đới đã gia tăng. Các phường 5,8,12 và 14 cạnh kênh Lò Gốm cho thấy sự đe dọa về sức khỏe quần chúng ở mức cao nhất, qua sự gia tăng lãnh vực bệnh hoạn thường xuyên kết hợp với mơi trường có chất lượng kém (bệnh tiêu chảy và hơ hấp) qua tiến trình tư vấn cơng cộng với nhóm có thu nhập thấp ở phường 12 quận 6, người dân địa phương báo cáo rằng vào năm 1998 có bệnh dịch sốt nhiệt đới và sốt thương hàn. Các dữ liệu cho thấy, tại đây có nguy cơ nhiễm các vi khuẩn gây bệnh rất cao.
Chất lượng nước kênh đã bị ảnh hưởng bởi các hoạt động kinh tế xã hội, đời sống dân cư. Có thể nguồn nước vượt tiêu chuẩn về chất lượng nước mặt của tiêu chuẩn Việt Nam, tình trạng này làm cho suy thoái, cạn kiệt nguồn nước ngày càng trầm trọng hơn. Thực trạng ô nhiễm nguồn nước hiện nay đã đến mức báo động không chỉ riêng ở thành phố mà trên khắp tỉnh thành cả nước cũng như trên thế giới. Không chỉ ở khu vực đô thị mà ngay cả khu vực nơng thơn tình trạng ơ nhiễm nguồn nước đã diễn ra khá trầm trọng. Chất lượng nước mặt kém, người dân không thể sử dụng cho sinh hoạt hằng ngày.
PHÂN TÍCH
Hình 3.1.Vị trí lấy mẫu tại Rạch Ơng Bng, Quận 6, TP.HCM, nguồn: google Earth. Earth.
3.1.1 NƠI LẤY MẪU
Các mẫu được lấy tại 3 vị trí khác nhau tại vùng Rạch Ơng Bng là: • Vị trí thứ nhất- Cầu Ơng Bng
• Vị trí thứ hai -đoạn giữa Rạch Ơng Bng (cách Cầu Ơng Bng và Cầu Hậu Giang khoảng 350m).
• Ví trí thứ ba-Cầu Hậu Giang.(xem Hình 3.1. Vị trí lấy mẫu tại Rạch
Ơng Bng).
3.1.2 ĐIỂM LẤY MẪU
Các mẫu được lấy ở giữa dịng chảy tại 3 vị trí lấy mẫu của vùng Rạch Ơng Bng
3.1.3 SỐ MẪU
Chương trình lấy mẫu phân tích vi sinh, tổng cộng số mẫu lấy tại 3 vị trí là 15 mẫu, mỗi vị trí lấy 5 mẫu.
3.1.4 THỜI GIAN LẤY MẪU
Mẫu được lấy tại 3 vị trí nói trên trong cùng một khoảng thời gian là 15 giờ chiều, lúc nước lớn.(Bảng 3.1. Lịch trình lấy mẫu tại Rạch Ơng Bng, Quận 6,
Thành Phố Hồ Chí Minh).
Bảng 3.1. Lịch trình lấy mẫu tại Rạch Ơng Bng, Quận 6, Thành Phố Hồ Chí Minh.
3.1.5 CHU KỲ LẤY MẪU
Khoảng thời gian của mỗi chu kì lấy mẫu là 2 tuần. Tức là cách 2 tuần lấy mẫu một lần tại 3 vị trí.
3.1.6 DỤNG CỤ LẤY MẪU
Mẫu được lấy bằng một dụng cụ tự tạo, độ sâu lấy mẫu khoảng 0,3m dưới bề mặt nước kênh.(xem phụ lục 2. Hình 23. Dụng cụ lấy mẫu phân tích vi sinh, Hình
24 và Hình 25).
3.1.7 VẬN CHUYỂN MẪU
Mẫu được bảo quản trong bình đã được làm lạnh có đá khi vận chuyển mẫu.
(xem phụ lục 2. Hình 26. Mẫu được bảo quản trong bình khi vận chuyển).
3.1.8 BẢO QUẢN MẪUThời gian lấy Thời gian lấy
mẫu Nơi lấy mẫu Đặc điểm của mẫu Ký hiệu
15 giờ, 06/04/2009 Đoạn giữa Rạch Ông BuôngCầu Ơng Bng Mùi hôi, đục, đenMùi hôi, đục, đen C.OB1ĐG1 Cầu Hậu Giang Mùi hôi, đục, đen C.HG1 15 giờ, 19/04/2009 Đoạn giữa Rạch Ơng BngCầu Ơng Bng Mùi hôi, đục, đenMùi hôi, đục, đen C.OB2ĐG2 Cầu Hậu Giang Mùi hôi, đục, đen C.HG2 15 giờ, 10/05/2009 Đoạn giữa Rạch Ơng BngCầu Ơng Bng Mùi hôi, đục, đenMùi hôi, đục, đen C.OB3ĐG3 Cầu Hậu Giang Mùi hôi, đục, đen C.HG3 15 giờ, 24/05/2009 Đoạn giữa Rạch Ơng BngCầu Ơng Bng Mùi hôi, đục, đenMùi hôi, đục, đen C.OB4ĐG4 Cầu Hậu Giang Mùi hôi, đục, đen C.HG4 15 giờ, 07/06/2009 Cầu Ơng Bng Mùi hôi, đục, đen C.OB5 Đoạn giữa Rạch Ơng Bng Mùi hôi, đục, đen ĐG5
Mẫu được bảo quản trong tủ lạnh, ở nhiệt độ dưới 50C. Đối với các mẫu chưa kịp phân tích trong vịng 24 giờ được làm đông lạnh ở nhiệt độ -200C để bảo quản một thởi gian dài.
3.1.9 THỜI GIAN PHÂN TÍCH MẪU
Mẫu được phân tích gồm 2 chỉ tiêu vi sinh là tổng số Coliforms và E.coli. • Thời gian phân tích tổng số Coliforms là 4 ngày.
• Thời gian phân tích E.coli là 5 ngày.(xem Bảng 3.2. Lịch trình phân
tích các mẫu vi sinh)
Bảng 3.2. Lịch trình phân tích các mẫu vi sinh.
3.1.10 ĐỊA ĐIỂM PHÂN TÍCH MẪU
Ký hiệu Ngày phân tích Các chỉ tiêu vi sinh được phân tích
C.OB1 07/04/2009 Tổng số Coliform, E.coli ĐG1 07/04/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.HG1 13/04/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.OB2 20/04-2009 Tổng số Coliform, E.coli ĐG2 20/04/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.HG2 04/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.OB3 11/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli ĐG3 11/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.HG3 18/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.OB4 25/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli ĐG4 25/05/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.HG4 01/06/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.OB5 08/06/2009 Tổng số Coliform, E.coli ĐG5 08/06/2009 Tổng số Coliform, E.coli C.HG5 15/06/2009 Tổng số Coliform, E.coli
Các mẫu phân tích vi sinh được phân tích tại phịng thí nghiệm vi sinh thuộc khoa mơi trường và công nghệ sinh học, trường đại học kỹ thuật công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh.(xem phụ lục 2. Hình 27. Mẫu nước phân tích vi sinh).
3.2 VẬT LIỆU
3.2.1 DỤNG CỤ
Ống nghiệm: Được dùng chứa mơi trường ni cấy vi sinh vật, có hoặc
khơng có nút đậy bằng bơng gịn hay nắp bằng nhựa.
Lọ thủy tinh: Chứa hóa chất, mơi trường ni cấy vi sinh vật, có nắp đậy
bằng nhựa hay kim loại.
Pipet: Có nhiều loại pipet có vách chia độ, pipet tự động (pipetman) được sử
dụng để lấy một thể tích nhất định chất lỏng nào đó.
Đĩa petri: Gồm một nắp lớn và một đấy nhỏ úp vào nhau, thường được sử
dụng để chứa môi trường thạch nuôi cấy vi sinh vật, nghiên cứu các đặc điểm hình thái tế bào vi sinh vật.
Đũa thủy tinh: Chủ yếu dùng để khuấy chất lỏng.
Que cấy vịng: Có dây cấy bằng kim loại, hình thẳng, được sử dụng để cấy
chuyền ( môi trường lỏng hay đặc) và cấy ria (tạo vạch) vi sinh vật trên môi trường thạch.
Đèn cồn: Thường được sử dụng trong các kỹ thuật thao tác vô trùng.
Ống đo dung dịch: Là dụng cụ đo thể tích tương đối gần đúng, dùng lấy
dung dịch hay hóa chất pha dung dịch
3.2.2 THIẾT BỊ
Cân phân tích: Dùng để cân hóa chất, vật liệu và các thành phần môi trường
nuôi cấy vi sinh vật với lượng nhỏ và cần độ chính xác cao.
Bếp điện: Cần thiết để đun nóng và chuẩn bị mơi trường ni cấy vi sinh vật. Tủ lạnh: Được sử dụng để bảo quản vi sinh vật, hóa chất và mơi trường ni
cấy vi sinh vật trong một thời gian ngắn.
Tủ cấy vơ trùng: Có khơng gian vô trùng được sử dụng để cấy vi sinh vật,
Tủ ấm: Có chế độ ổn định nhiệt được sử dụng để ủ vi sinh vật ở nhiệt độ
thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển của chúng.
Tủ sấy: Được sử dụng để sấy khô, khử trùng các dụng cụ thí nghiệm chịu
được sức nóng khơ (chủ yếu là dụng cụ thủy tinh) sau khi rửa sạch và để thật ráo.
Nồi hấp tiệt trùng (autoclave): Thiết bị này cấp nhiệt bằng hơi nước ở áp
suất cao, được sử dụng để hấp khử trùng môi trường, một số các nguyên liệu và các loại dụng cụ thí nghiệm.
Bể điều nhiệt: Thường chứa nước và được cài đặt ở nhiệt độ thích hợp để ổn
định nhiệt độ cho những thí nghiệm cần ổn định về nhiệt
3.2.3 HĨA CHẤT
Mơi trường ni cấy Coliforms:
• Lactose Broth
• Brilliant Green Bile Broth (BGBL)
Mơi trường ni cấy E.coli:
• Lactose Broth • Tryton
• MR-VP
• Simmon Citrate Agar
Một số thuốc thử sử dụng trong thử nghiệm sinh hóa:
• Kovac’s • Methyl Red • α-naphthol 5% MOL WT • KOH 40% 3.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 3.3.1 XÁC ĐỊNH TỔNG SỐ COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN (Most Probable Number)
được gọi là phương pháp pha loãng tới hạn. Đây là phương pháp dùng để đánh giá số lượng vi sinh vật theo số lượng vi sinh vật có xác suất lớn nhất hiện diện trong một đơn vị thể tích mẫu. Đây là phương pháp định lượng dựa trên kết quả định tính của một loạt thí nghiệm được lặp lại ở một số độ pha lỗng khác nhau. Thơng thường, việc định lượng này được thực hiện lặp lại 3 lần ờ 3 độ pha lỗng bậc 10 liên tiếp, tổng cộng 3×3= 9 ống nghiệm.
Quy trình thực hiện định lượng theo phương pháp này là như sau: cho vào các ống nghiệm có chứa mơi trường thích hợp cho sự tăng trưởng của đối tượng vi sinh vật cần định lượng một thể tích chính xác dung dịch mẫu ở 3 nồng độ pha lỗng bậc 10 liên tiếp (ví dụ 1/10, 1/100, 1/1000). Ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp. Dựa vào kết quả biểu kiến chứng minh sự tăng trưởng của vi sinh vật kiểm định trong từng ống nghiệm (thường là các hiện tượng sinh hơi, đổi màu, đục…), ghi nhận số lượng các ống nghiệm dương tính ờ từng độ pha loãng. Sử dụng các số liệu này và dựa vào bảng MPN suy ra mật độ vi sinh vật được trình bày dưới dạng số MPN/100ml. (xem
phụ lục 1. Bảng 3 Bảng tra MPN).
3.3.2 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH TỔNG SỐ COLIFORMS
Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha lỗng mẫu để
có độ pha lỗng thích hợp 10-3, 10-4, 10-5
Chuyển 1ml dung dịch 10-3, 10-4, 10-5 vào ống 10ml mơi trường Lactose Broth có chứa ống durham, mỗi nồng độ 3 ống lặp lại, ủ ở 370C, 48
giờ
Ghi nhận các ống Lactose Broth dương tính (+) có sinh hơi, ở mỗi nồng độ pha lỗng
Cấy vào ống nghiệm chứa mơi trường BGBL có chứa ống durham, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống BGBL dương tính (+), có sinh hơi
3.3.3 XÁC ĐỊNH E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN VÀ THỬ NGHIỆM IMViC
Việc định danh này được thực hiện dựa vào các đặc điểm các phản ứng sinh hố.
Đối với E.coli thì thử nghiệm IMViC cho kết quả: • Thử nghiệm khả năng sinh Indol dương tính (+) • Thử nghiệm Methyl Red dương tính (+)
• Thử nghiệm Voges Proskauer âm tính (-) • Thử nghiệm Simon Citrate âm tính (-)
3.3.3.1 THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG SINH INDOL
Nhằm phát hiện khả năng của vi sinh vật tạo vòng indol trong môi trường canh trypton.
Phương pháp tiến hành: Vi sinh vật thử nghiệm được nuôi trong môi trường
canh trypton trong khoảng 24-48 giờ. Nhỏ vài giọt ether để kéo indol lên bề mặt môi trường, thêm vài giọt thuốc thử Kovac’s hoặc thuốc thử Erhlich.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): trên bề mặt mơi trường xuất hiện vịng màu đỏ
cánh sen.
Thử nghiệm (-): Khơng xuất hiện vịng đỏ.
Hình 3.2. Thử nghiệm khả năng sinh Indol, Nguồn: http://users.stlcc.edu
3.3.3.2 THỬ NGHIỆM METHYL RED
Nhằm xác định khả năng của vi sinh vật sản xuất và duy trì các sản phẩm acid bên trong mơi trường trong q trình lên men glucose.
Phương pháp tiến hành: Nuôi cấy vi sinh vật trong môi trường glucose
phosphate (MR-VP broth) ủ trong khoảng 2-5 ngày. Thêm vài giọt thuốc thử methyl red được pha theo tỷ lệ 0,1g trong 300ml cồn và cho nước vào để đạt thể tích 500ml.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): Mơi trường chuyển sang màu đỏ.
Hình 3.3. Thử nghiệm Methyl Red, Nguồn: http://users.stlcc.edu
3.3.3.3 THỬ NGHIỆM VOGES PROSKAUER
Nhằm phát hiện khả năng vi sinh vật tạo ra một số sản phẩm trung tính (aceton) trong q trình lên men glucose.
Phương pháp tiến hành: Cấy vi sinh vật trong môi trường glucose phosphate
(MR-VP broth), ủ ở nhiệt độ 370C trong 2-5 ngày. Thêm dung dịch thuốc thử ∞- naphtol 5% trong cồn và dung dịch KOH 40% với tỷ lệ 3:1. Quan sát phản ứng xảy ra trong 5 phút.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): xuất hiện màu đỏ trên bề mặt môi trường.
Thử nghiệm (-): môi trường khơng đổi màu.
Hình 3.4. Thử nghiệm Voges Proskauer, Nguồn: http://users.stlcc.edu3.3.3.4 THỬ NGHIỆM SIMMONS CITRATE 3.3.3.4 THỬ NGHIỆM SIMMONS CITRATE
Nhằm xác định khả năng vi sinh vật sử dụng citrate như là nguồn carbon duy nhất.
Phương pháp tiến hành: Mơi trường sử dụng trong thí nghiệm này là mơi
trưởng Simmons citrate agar . Cấy vi sinh vật lên môi trường thạch nghiêng SCA, ủ 370C trong 24 giờ rồi đọc kết quả.
Đọc kết quả: Thử nghiệm (+): môi trường chuyển sang màu xanh dương.
Hình 3.5. Thử nghiệm Simmon Citrate, Nguồn: http://users.stlcc.edu
3.3.4 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH E.COLI
SVTH:NGUYỄN PHÚ QUÍ GVHD: ThS LÊ THỊ KIM OANH 54
Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha lỗng mẫu để có
độ pha lỗng thích hợp 10-3, 10-4, 10-5
Chuyển 1ml dung dịch 10-3, 10-4, 10-5 vào ống 10ml mơi trường Lactose Broth có chứa ống durham, mỗi
nồng độ 3 ống lặp lại, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống Lactose Broth dương tính (+) có sinh hơi, ở mỗi nồng độ pha loãng
Cấy vào ống nghiệm chứa môi trường pepton water, ủ ở 370C, 48 giờ
Ghi nhận các ống pepton water dương tính (+), mơi trường bị đục, ở mỗi nồng độ pha loãng
Cấy vào các ống nghiệm chứa môi trường Tryton, MR-VP, Simmons Citrate, ở mỗi độ pha loãng. Ủ
ở 370C, 24 giờ
Tiến hành thử nghiệm sinh hóa IMViC. Ghi nhận kết quả: thử nghiệm Indol dương tính (+), thử nghiệm Methyl Red dương tính (+), thử nghiệm Voges Proskauer âm tính (-), thử nghiệm Simmon
CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ ĐÁNH GIÁ
4.1 KẾT QUẢ
4.1.1 CẦU ÔNG BUÔNG
Bảng 4.1 Kết quả phân tích tổng số Coliforms và E.coli tại Cầu Ơng Bng
C.OB1 28.104 MPN/100ml Không C.OB2 44.104 MPN/100ml Không C.OB3 75.104MPN/100ml 14.104MPN/100ml C.OB4 93.104MPN/100ml 11.104MPN/100ml C.OB5 44.104 MPN/100ml Không TCVN 5942-1995 (Loại B) 1.10 4 MPN/100ml Không
% vượt tiêu chuẩn 100% 40%
4.1.2 ĐOẠN GIỮA RẠCH ÔNG BNG
Bảng 4.2 Kết quả phân tích tổng số Coliforms và E.coli tại Đoạn giữa Rạch Ơng Bng