2.1. VT LIσU NGHIÊN CχU
2.1.1. Cây G>a Ficus microcarpa
MΤu lá cây G2a F. microcarpa ∗1Βc thu hái t;i Hà NΚi vào tháng 11 nΘm 2009. Tên khoa hΡc ∗1Βc PGS TS Ninh Kh6c B0n giám ∗4nh. MΤu tiêu b0n (sΑ FM1109) ∗1Βc l1u giΧ t;i phịng mΤu c.a Vi∃n Hóa sinh Bi<n.
Hình 2.1. Cây G2a F. microcarpa: (a) cành mang lá - qu0, (b) rΣ khí sinh, (c) m=t
d1+i lá, núm qu0 và m=t c6t ngang qu0.
2.1.2. Cây #a búp ΛΚ Ficus elastica
MΤu lá cây >a búp ∗[ F. elastica ∗1Βc thu hái t;i Cϑu Gi:y, Hà NΚi vào tháng 3 nΘm 2011. Tên khoa hΡc ∗1Βc PGS TS Ninh Kh6c B0n giám ∗4nh. MΤu tiêu b0n (sΑ FE0311) ∗1Βc l1u giΧ t;i phòng mΤu c.a Vi∃n Hóa sinh Bi<n.
Hình 2.2. Cây >a búp ∗[ - F. elastica
2.1.3. Cây Gào Ficus callosa
MΤu lá cây Gào F. callosa ∗1Βc thu th)p vào tháng 11 nΘm 2009 t;i Hà NΚi. Tên khoa hΡc ∗1Βc PGS TS Ninh Kh6c B0n giám ∗4nh. MΤu tiêu b0n (sΑ FC1109) ∗1Βc l1u giΧ t;i phịng mΤu c.a Vi∃n Hóa sinh bi<n.
Hình 2.3. Cây Gào - F. callosa
y # ông Ficus drupacea
MΤu lá cây >a lông F. drupacea ∗1Βc thu th)p t;i V1Φn QuΑc gia Tam >0o, Vλnh Phúc vào tháng 6 nΘm 2010. MΤu cây ∗1Βc PGS TS Ninh Kh6c B0n giám ∗4nh tên khoa hΡc. MΤu tiêu b0n (sΑ FD1006) ∗1Βc l1u giΧ t;i Vi∃n Hóa sinh Bi<n.
Cây >a lông - F. drupacea
2.2. PHΩςNG PHÁP NGHIÊN CχU
2.2.1. Ph∋2ng pháp chi≅t xuΓt các hΕp chΓt trao i th& cΓp
Các mΤu cây Ficus sau khi thu hái ∗1Βc ti∆n hành lo;i b[ t;p b?n, ph,i khô trong bóng râm và say nh[ thành bΚt. BΚt khơ thu ∗1Βc ∗1Βc ti∆n hành chi∆t t ng b&ng metanol 3 lϑn Ι nhi∃t ∗Κ phòng theo ph1,ng pháp chi∆t ngâm ho=c chi∆t trên
thi∆t b4 chi∆t siêu âm Ι nhi∃t ∗Κ 40-50oC. Các d4ch chi∆t thu ∗1Βc ∗1Βc ti∆n hành lΡc b&ng gi:y lΡc, gΚp l;i và lo;i b[ dung môi d1+i áp su:t gi0m trên thi∆t b4 cô quay chân không thu ∗1Βc d4ch chi∆t MeOH t ng c.a các mΤu nghiên c≅u. D4ch chi∆t này ∗1Βc l1u trong t. l;nh cho t+i khi ∗1Βc sΓ dΗng cho các nghiên c≅u ti∆p theo.
∋2 Μ c Ε Γ & cΓ
C=n chi∆t MeOH t ng c.a mΤu nghiên c≅u ∗1Βc hòa vào n1+c c:t (kho0ng 100-200 g c=n chi∆t trong 1 lit n1+c c:t). D4ch n1+c ∗1Βc ti∆n hành chi∆t phân bΑ l[ng-l[ng v+i các dung môi hΧu c, kém tan vào n1+c và tΘng dϑn ∗Κ phân cΕc t2 n- hexan, cloroform, etyl axetat và n-butanol.
Các c=n chi∆t thu ∗1Βc ti∆p tΗc ∗1Βc phân tách thành các phân ∗o;n sΓ dΗng các ph1,ng pháp s6c ký khác nhau tùy thuΚc vào t2ng c=n chi∆t cΗ th< nh1: s6c ký h:p phΗ silica gel pha th1Φng, s6c ký h:p phΗ silica gel pha ∗0o, s6c ký trao ∗ i ion sΓ dΗng Diaion HP-20, s6c ký rây phân tΓ sΓ dΗng Sephadex LH-20. SΕ có m=t c.a các ch:t trong các phân ∗o;n ∗1Βc ∗ánh giá b&ng s6c ký l+p m[ng (Thin layer chromatography - TLC) pha th1Φng và pha ∗0o sΓ dΗng dung d4ch hi∃n màu là axit sulfuric 10% phun ∗7u lên b0n m[ng và h, nóng t2 t2 ∗∆n khi các v∃t ch:t hi∃n rõ. SΓ dΗng k∆t qu0 hi<n th4 v∃t ch:t trên TLC ∗< ti∆n hành gom và chia các phân ∗o;n ∗ã ∗1Βc s6c ký. Các phân ∗o;n thu ∗1Βc ti∆p tΗc ∗1Βc ki<m tra b&ng TLC ∗< lΕa chΡn ph1,ng pháp s6c ký phù hΒp ∗< ti∆p tΗc phân tách thành các phân ∗o;n nh[ h,n. L=p l;i các công vi∃c nh1 trên cuΑi cùng sβ thu ∗1Βc các hΒp ch:t trao ∗ i th≅ c:p có ∗Κ tinh khi∆t ∗0m b0o ∗. ∗< ti∆n hành ∗o các ph và xác ∗4nh c:u trúc.
!∃ng pháp phân l p các h.p ch/t trao :Εi th c/p tΦ cây Gào F. callosa
BΚt lá khô cây Gào F. callosa (3,0 kg) ∗1Βc chi∆t ba lϑn v+i MeOH b&ng thi∆t b4 siêu âm Ultrasonic 2010 Ι nhi∃t ∗Κ 40-50oC (3 × 60 phút). D4ch chi∆t sau ∗ó ∗1Βc cơ ∗=c b&ng máy c:t quay v+i áp su:t gi0m thu ∗1Βc 280 g c=n chi∆t MeOH. C=n này ∗1Βc hòa vào n1+c (1,5 lít) và phân l+p lϑn l1Βt v+i CHCl3 và EtOAc theo tρ l∃ 1/1 v7 th< tích thu ∗1Βc các d4ch cô CHCl3 (FC1, 82,0 g) và EtOAc (FC2, 70,5 g) và l+p n1+c (FC3, 127,5 g).
Hình 2.5. S, ∗Λ chi∆t phân ∗o;n mΤu cây Gào - F. callosa
và phân l)p các hΒp ch:t t2 c=n chi∆t CHCl3 và EtOAc BΚt lá khô F. callosa (3,0 kg) C=n CHCl3 - FC1 (82,0 g) L+p n1+c C=n MeOH (280 g) C=n EtOAc- FC2 (70,5 g) L+p n1+c - FC3 (127,5 g)