II TÁC DỤNG ENZYM LÊN BỀ MẶT DA CỦA Cữ THÊ CÔN NGƯỜI:
nguyên nhân chính dẫn đến tính đa dạng của kháng thể,
KT THUẬT PHÂN TÍCH ELISA (Enzym-L.Inked ImmunoSnrbent Assay]}
Phương pháp phân tich ELISA dựa trên cổ sở của phản ứng miễn dịch giữa kháng nguyễn và kháng thể. Trong trường hợp này enzym đồng vai trồ chất trung gian một đầu liên kết với hệ miễn dịch, phần còn lại liên kết với thuốc thử bằng rối liên kết hoá trị. Sản phẩm cuối cùng là hợp chất có màu. Dựa vào cường độ mẫu thu được ta có thể xác định hàm lượng kháng nguyễn hoặc kháng thể cẩn tìm. Kháng thể được gắn vào bể mặt rắn, ở đây ta sử dụng là đĩa “microtitre plate " bao gắm nhiều giếng (well) nhỏ được làm bằng vật liện nhựa khắc nhau như
polysLyren hay palyvinylclorua. Điều này có nghĩa là những tắc nhân liên kết và
không liên kết với nhau sẽ được tách rời mà không cẩn tốn thời gian cho các
bước ly tâm.
a) Kháng nguyễn ; trong kỹ thuật ELISA kháng nguyễn thường đưạc gắn vào bể mặt rấn trước để phát hiện ra kháng thể đặc hiệu, Tuy nhiễn này cũng có thể sủ dụng kháng thể gắn vào bể mặt rắn trước để phát hiện kháng nguyên tưởng ứng. Điểu cần thiết là kháng nguyên và kháng thể phải có độ tỉnh khiết nhất định, tránh các phản ứng phụ ảnh hưởng đến mầu của sản phẩm cuỗi
bị Kháng thể :kháng thể được chọn nghiêm ngặt trong các bước khác nhau của phương pháp phân tích, nên sử dụng loại kháng thể có khả năng phản ứng
đặc hiệu và độ tỉnh khiết cao để đàng chuẩn hóa điều kiện phần tích.
cì Emazym: để khuếch đại tín hiệu xác định , một loại enzym đặc biệt đưqc thêm
vàn Irước khi thêm thuốc thử để lên mầu trong giải đoạn cuối cùng của kỹ
thuật ELISA. Enzym được chọn phải có hoạt tính và độ tỉnh khiết cao, lên
màu định lượng với thuốc thử , bến trong điểu kiện bình thường của phòng thí nghiệm, Đa số loại enzym này bao uắm pneroxidaza, nhosphataza, ñxidaza, dì Thuất thử: cũng như nguyên tắc của phương pháp trắc quang thông thường,
cường độ mẫu của sản phẩm cuối cùng ứng giá trị bước sống cực đại đặc trưng tỷ lệ với hàm lượng hợp chất cần xác định. Bối với các sản nhẩm không
tự lên mãu, thuốc thử được thêm vào để hỗ trợ cha quá trình phất hiện.
Thuốc thử chỉ có thể chuyển thành hạp chất cá mầu định lượng theo lượng
enzym đặc biệt được thêm vàẫo trước.
e) Các loại kỹ thuật ELISA: Bao gồm 4 loại cơ bản Ï] Capture antbody;
gì lgÀl method;
hị Douhle antihady sandwich; I} Cmnetltive anilgen assay.
Kỹ thuật Double antihndy sandwich sẽ được trình bày chỉ tiết trang phần thực nghiệm. -a..——— - ñ "mm. sIE "—. hệt Ea FÁI Hạ Đế hẾ lẻ Anh ThL —=——=—————— Trang +