II TÁC DỤNG ENZYM LÊN BỀ MẶT DA CỦA Cữ THÊ CÔN NGƯỜI:
với các phương pháp khác là độ nhạy cao, nhanh chóng và tiết kiệm được việc sử
đụng enzym và thuốc thử. Một trong những phương nhấp giới thiệu là phương pháp Anson cải tiến
a)} Nguyễn tắc:
Dùng protein hemoglobin làm cơ chất, hoạt độ pnroteaza được xác định dựa trên cơ sở định lượng tyrozin,sản phẩm được tạo thành trang phản
ứng thủy phân protein . Sản phẩm này cho phản ứng màu với thuốc thử
Folin-Clocalteau . Dựa vào đỗ thị chuẩn để định lượng twrozin.Đdn vị hoại độ là lượng enzym trong Ì phút ở 3C có khả năng thủy phần protein hình
thành 1iumol Tyrozin
b} Húa chất :
s- Dựng địch Tyrozin chuẩn: 0.01timol đến 0.05mmöl pha trong đụng địch HCI 0.2N
« Dụng dịch cơ chi ; cần 2g hemoglnbin pha trong 50 mÌ nước cất thêm
36g ure và Rml NaOH 0.1N, thêm nước cất đến vạch 8Öml, giữ ở nhiệt
độ phòng 1 giờ, thêm lŨml Dụng dịch boric IM. Thêm 4.4 ml dung dịch CaCl; 5% Dùng dung dịch HCI điều chỉnh pH, định mức 100ml & Thuốc thử Folin; cho và bình cẩu lũ0g Na;WO,.2H;O, 25gNa;MoO,
2H;O, 50ml acid H;PO, 85% ,100ml HCI đậm đặc .LŨÔml nước cất . Lắp ống sinh hàn đun hoãn lưu 1Ú giờ, sau đồ thêm 150 Li;5Ö, .50ml nước cất ,vài giọt Brom đun 15 phút không đùng ống sinh hàn để loại Brom thừa. Lầm lạnh thêm nước cất llít lọc. Ciữ dung dịch trong lọ mẫu nãu ở nơi lạnh.
œ Tiển trình :
Chuẩn bị 2 ống nghiệm sạch ống thí nghiệm và ống kiểm tra. Nhiệt độ của các dung dịch được giữ cổ định ở 30°C
ng thi nghiệm : chủ vào 2ml dung dịch cđ chất để vyẽn từ 5-ÌÙ phút, cho thểm Iml dung dịch enzym để yên đúng Iũ phút, cho ngay 5ml tricloracetic 5% lắc đu giữ yên 3 phút Lẩy Imil dung dịch qua lọc cho vào ống nghiệm khắc để làm phản ứng lên màu với Folin. Thêm
4ml dung dịch NayCO; 6% lắc đều thẽm Iml thuấc thử Folin đã pha
loãng 5 lắn lắc đều giữ 30 phút ở nhiệt độ phòng. So màu ở A=75Unm với cuvet cm.
Ông kiểm tra: sau khi thêm 2ml đung dịch cơ chất cho ngay 5ml dung dịch acid tricloracetic 5% lắc đều rổi mới cho Iml enzym. các giai đoạn sau tiến hành giống như ống thí nghiệm
đ] Tĩnh kết quả:
Lấy hiệu số mật độ quang giữa mẫu thí nghiệm và rẫu kiểm tra,
dựa vào để thị chuẩn tính lượng umal 'Tyrozin Hoạt độ của Img chế
phẩm enzym đã lấy để xác định H„ Í mg = #_molTvrazin.§. 000 Ÿ.Mi Trang đá : — 8 thể tích hẩn hợp phần từng [mi] f thời Kian ¡ =Ú phú! mm; simg chế nhẩm
L.2.3 Xác định haạt độ nrmtenra then phương nhấp rass tà Fuid : [34]
Nguyên tấc: cazein hòa tan trang mỗi trường kiểm yếu và bị kết tủa khi