- Phổ hồng ngoại được ghi trên máy Impact 410Nicolet FTIR hoặc trên máy Horiba FT
a. Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu
22 g phần chiết n-hexan (ALHI) được hoà tan bằng một lượng diclometan vừa đủ
để tan hết, thêm 33 g silica gel (cỡ hạt 0,063-0,200 mm) vào, đảo đều đến khi bay hơi hết dung môi, thu được hỗn hợp bột tơi mịn màu xanh đen. Hỗn hợp chất đã tẩm trên silica gel được phân tách bằng sắc ký cột CC trên chất hấp phụ silica gel. Cột được nhồi ướt với 350 g silica gel (0,063- 0,200 mm) trong dung môi n-hexan và để ổn định qua đêm. Dung môi chạy cột là n-hexan và hệ
35
dung môi n-hexan-etyl axetat građien 7:1, 4:1, 2:1, 1:1 (v/v). Kết quả thu được 31 phân đoạn, mỗi phân đoạn 150 ml. Dựa trên kết quả khảo sát sắc ký lớp mỏng, các phân đoạn này được gộp thành 14 nhóm phân đoạn từ ALHI1 đến ALHI14.
Nhóm phân đoạn ALHI1 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063- 0,200 mm) với hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 90:1, cho A1 (21,3 mg). Nhóm phân đoạn ALHI2 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm) với hệ dung môi n-hexan- etyl axetat 90:1, 70:1 và 49:1 cho A1 (50 mg), A2 (2,2 mg) và A3 (30 mg). Nhóm phân đoạn
ALHI3 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung mơi n- hexan-etyl axetat 30:1-7:1 cho A3 (28 mg). Các nhóm phân đoạn ALHI4 và ALHI5 được rửa n- hexan sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi n-hexan-etyl axetat cho A3 (49 mg và 40,5 mg). Nhóm phân đoạn ALHI6 được phân tách tiếp bằng CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung môi n- hexan-etyl axetat 30:1- 4:1 cho A4 (8 mg).
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi được trình bày trên Sơ đồ 3.1.