Phần thực nghiƯm
Thiết bị và hoỏ chất
Cỏc phương phỏp sắc ký
Sắc ký lớp mỏng (TLC)
Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trờn bản silica gel trỏng sẵn DC- Alufolien 60F254 (Merck).
Phỏt hiện vệt chất: đốn UV 254 nm,các thc thư vanilin/H2SO4, FeCl3, AlCl3.
ĐiỊu chế thc thư vanilin/H2SO4 [109]: hoà tan hoàn toàn 1,86g vanilin
trong 100 ml axit sunfuric đặc thu được dung dịch thuốc thử vanilin/axit sunfuric.
ĐiỊu chế thc thư sắt (III) clorua (FeCl3) [109]: pha dung dịch FeCl3
3% trong nước và thờm 1-2 giọt axit clohidric đặc làm mụi trường trỏnh cho dung dịch khỏi bị thuỷ phõn.
ĐiỊu chế thc thư nhôm clorua (AlCl3) [109]: pha dung dịch AlCl3 5% trong nước.
Sắc ký cột (CC và FC)
Sắc ký cột thường (CC) đưỵc thực hiƯn dưới trọng lực cđa dung môị Trong sắc ký cột nhanh (FC) [81] đà áp dơng khơng khí nén với áp lực từ 0,2 đến 0,3 bar để đẩy dung mụi chạy qua cột sắc ký. Cột tách cao từ 100-200 mm, đường kính trong 10 mm.
Chất hấp phụ cho CC và FC là silica gel, Merck (cỏc cỡ hạt 0,040-0,063 mm, 0,063-0,100 mm cho CC; cỏc cỡ hạt 0,015-0,040 mm và 0,040-0,063 mm
cho FC). Dung mụi được sử dụng là ete dầu hoả (khoảng sôi 30-600C, PE), clorofoc, etyl axetat (EtOAc), toluen, axeton, metanol (MeOH). Tất cả cỏc loại dung mụi chạy sắc ký đều được làm khan và chưng cất lạ
Sắc ký lỏng trung ỏp (MPLC)
Sắc ký lỏng trung ỏp (MPLC) được thực hiƯn trên hƯ thiết bị BAECKSTRửM SEPARO AB, sử dụng một bơm định lượng trung ỏp QD-O- SSY nộn dung mụi đi qua cột tỏch (tốc độ dũng 0- ~ 100 ml / phỳt, ỏp lực nén 0,5-6,9 bar). Cột tỏch cao 250 mm; đường kớnh trong 25 mm; được nhồi silica gel (Merck, cỡ hạt 0,015-0,040 mm) và nộn chặt bằng thiết bị chuyờn dựng. Dung mụi dựng (xem ở CC và FC) đều được làm khan kỹ và chưng cất lạ
Sắc ký lỏng hiƯu năng cao (HPLC)
Sắc ký lỏng hiệu năng cao được thực hiện trờn thiết bị HPLC MERCK & HITACHI với L-6000 Pump và L-4000 UV Detector; tiỊn cột Hibar RT- 250-4 được nối với cột Lichrosorb RP-18 10 m, 250 x 4 mm Ị D.
(MERCK). Dung mụi được sử dụng là metanol, axit axetic.
Thiết bị và kỹ thuật ghi phổ
Phổ khối lượng (MS và HR-MS) được ghi trờn mỏy Varian MAT 44S (70eV,
EI).
Phổ hồng ngoại (IR) được ghi trờn máy Impact-410-Nicolet FT-IR. Phỉ cộng hưởng từ hạt nhõn (NMR)
1H NMR: Bruker AM 300, Bruker AM 400
13