C NMR (với chương trỡnh DEPT): Bruker AM 300, Bruker AM
4.3.2Thư hoạt tính chống oxy hoỏ
1- O3-4 Nhúm phõn đoạn O3-2 và O3-3 có màu vàng da cam rõ rƯt khi thư
4.3.2Thư hoạt tính chống oxy hoỏ
Tia tử ngoại, cỏc bức xạ ion hoỏ, nhiều chất gõy ụ nhiễm khớ quyển và chất độc ozon,..., là nguồn gốc của sự biến đổi phõn tử oxy và sự peroxy hóa lipit (nguồn cỏc gốc tự do ngoại sinh). Đồng thời cũn cú những gốc tự do nội sinh do cỏc tế bào hệ miễn dịch và cỏc tế bào nơi bị viờm sinh r Cỏc gốc tự do đó nhiỊu khi đúng vai trũ chủ yếu trong nhiều bệnh. Độc tính cđa các gốc tự do trong quỏ trỡnh bệnh tim mạch và hụ hấp, trong nhiƠm độc, trong ung thư, trong những bệnh của hệ miễn dịch và một số quỏ trỡnh viờm, hiện nay đà được chứng minh. Khả năng cỏc chất chống gốc tự do và chống sự peroxy hoỏ
lipid (POL) có nguồn gốc nội sinh cú thể bị vượt qua trong một số trạng thỏi bệnh lý, khả năng đú bị giảm thiểu ở tuổi già nờn điều hợp lý là dựng những chất chống oxy hoỏ trong cỏc bệnh cú liờn quan đến gốc tự do [1]. Vì vậy viƯc đỏnh giỏ hoạt tớnh chống oxy hoỏ (HTCO) cđa một chế phẩm, một hoạt chất, là một đúng gúp nhằm làm sỏng tỏ cơ chế chữa một số bƯnh cđa một cây thuốc đà được sử dụng.
4.3.2.1 Phương phỏp thử
Quỏ trỡnh POL xảy ra là do phản ứng của cỏc dạng oxy hoạt động, chủ yếu là gốc hydroxyl (ãOH) và oxy đơn bội (1O2), với cỏc chất hữu cơ trong cơ thĨ, chđ u là các axit béo chưa no cú nhiều nối đụi ở cỏc tổ chức màng (LH). Sản phẩm cđa quỏ trỡnh POL là cỏc dien liờn hợp, malonyl diandehit (MDA), các ankan như etan, pentan,...
Xỏc định lượng sản phẩm của quỏ trỡnh POL hỡnh thành nhiều hay ớt cú thể giỳp đỏnh giỏ quỏ trỡnh peroxy hoỏ mạnh hay yếu và suy ra được tương quan giữa cỏc dạng oxy hoạt động và cỏc chất chống oxy hoỏ trong cơ thể đà tăng hay giảm.
Để xỏc định sản phẩm của quỏ trỡnh POL, cú thể dựa vào việc đo lượng cỏc dien liờn hợp hỡnh thành, hoặc lượng cỏc ankan, MD.. ở đõy chỳng tụi sử dụng phương phỏp xỏc định lượng MDA hỡnh thành trong quỏ trỡnh POL để đỏnh giỏ khả năng chống oxy hoỏ của mẫu thử.
HTCO của một chế phẩm (phần chiết, hợp chất tinh khiết) được đỏnh giỏ bằng tỷ lệ phần trăm MDA giảm đi ở mẫu thử cú chứa chế phẩm khi so sỏnh với mẫu chứng khụng chứa chế phẩm.
Để xỏc định HTCO in vitro thông qua việc định lượng MDA hỡnh thành trong quỏ trỡnh POL chỳng tụi tiến hành theo phương phỏp của C. G. Blogodarov và cộng sự [110]. Nguyờn tắc của phương phỏp là dựng gốc axit
oleic trong Tween 80 để làm cơ chất oxy hoỏ chuyển thành MDA khi cú mặt muối sắt (II), axit ascobic và oxy khụng khớ. MDA hỡnh thành khi tỏc dơng với axit thiobacbituric tạo ra một phức màu hồng, cú hấp thụ cực đại max=532 nm. Theo định luật Bughe-Lamber- Bia thỡ
D = c.l.
Trong đó:
c: Nồng độ dung dịch mẫu (M/l) D: Mật độ quang
l: ChiỊu dày cuvet (cm)
: Hệ số tắt phõn tử (M—1. l. cm—1)
Như vậy, dựa vào sự biến đổi mật độ quang của mẫu thư mà ta có thĨ nhận định một cỏch định tớnh về sự biến đỉi cđa nồng độ MDA và từ đó dẫn đến những nhận định về HTCO cđa mẫu thư.