Thiết bị và dụng cụ

h. Độ phõn giải và cỏc yếu tố ảnh hưởng (sự tỏch hai chất)

2.3.1. Thiết bị và dụng cụ

 Mỏy múc:

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC của hóng Waters (Mỹ), gồm bơm dung mụi model 2690 cú bộ phận bơm mẫu tự động, detectơ PDA model 2996, detectơ huỳnh quang model 2475, phần mềm Empower.

- Cột sắc ký là cột Symmetry axớt amin RP18 (150mm x 4,6mm x 3,9m) của hóng Waters (Mỹ).

- Cột Symmetry Shield RP18 (150mm x 4,6mm x 5m) của hóng Water - Cõn phõn tớch độ chớnh xỏc 0,0001g

- Tủ sấy cú thể đặt nhiệt độ lờn 280oC - Mỏy cất quay chõn khụng Eyela - Mỏy đo pH: pH Meter 744 - Mỏy nghiền mẫu

- Mỏy lắc Vortex

 Dụng cụ

- Pipet Pasteur

- Vial (lọ đựng mẫu 1,5ml cú nắp)

- Cỏc bỡnh định mức: 5, 10, 20, 50, 100 ml - Ống đong

- Pipet: 1, 2, 5, 10 ml

2.3.2. Húa chất

Cỏc loại húa chất dựng trong nghiờn cứu đều thuộc loại tinh khiết phõn tớch.

 Dung dịch chuẩn

- Hỗn hợp chuẩn 17 axớt amin của hóng Waters (Mỹ), cỏc chuẩn đơn từng axớt amin của hóng Prolabo (Phỏp).

- Chuẩn hỗn hợp (17 axớt amin) được pha từ dung dịch cú chứa 2,5 mM cho tất cả cỏc amino axớt và 1,25 mM đối với cystin. Hỳt 40 l dung dịch chuẩn trờn pha loóng bằng HCl 20 mM thành 1ml để được dung dịch chuẩn làm việc cú chứa 100 pmol/l đối với 16 axớt amin và 50 pmol/l đối với cystin. Dung dịch chuẩn làm việc được bảo quản trong lọ màu sẫm bảo quản bằng tủ lạnh õm sõu - 200C dựng được trong vũng 1 thỏng. Cỏc chuẩn đơn được hoà tan trong nước và bảo quản trong mụi trường axớt với cỏc điều kiện tương tự như chuẩn hỗn hợp.

 Cỏc loại húa chất khỏc:

- Chất tạo dẫn xuất 6-aminoquinolyl-N-hydroxy-succinimidyl carbamat của hóng Waters (Mỹ)

- Chất tạo dẫn xuất O-phthaldialhehyd(OPA)- của hóng Sigma. - Dinatrihydrophosphat (Na2HPO4.12H2O)

- Dung dịch Na2HPO4 0,5M (cõn 179 g Na2HPO4.12H2O hũa tan hoàn toàn vào 1 lớt nước cất)

- Natri acetat trihydrat CH3COONa.3H2O (NaAc)

- Dinatri dihydro ethylendiamin tetra acetat C10H14N2Na2O8.2H2O (EDTA) - Trietylamin C6H15N

- Dung dịch đệm pha động A: (179 g Na2HPO4.12H2O + 19,04g/lit NaOAc.3H2O + 1g/l EDTA + 1,7 g C6H15) hũa tan hoàn toàn trong nước đến gần 1lớt, điều chỉnh về pH = 5,05 bằng axớt H3PO4, định mức đến vạch bằng nước cất.

- Dung mụi pha động B: Acetonitril dựng cho sắc ký lỏng hiệu năng cao

- Dung mụi pha động C: nước cất tinh khiết (nước cất 2 lần lọc qua hệ thống

loạc nước siờu sạch để khử hết cỏc ion cũn lại).

- Acetonitril dựng cho sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) - Axit hydrocloric 1M

- Natri hydroxit 10M - Natri hydroxit 1M

- NaOH 0,5M (pha từ dung dịch NaOH 1M) - Axit phosphoric H3PO4 đặc

- Natri tetraborat (Na2B4O7.10H2O) - Dung dịch Na2B4O7 0,25M