Đỏnh giỏ hoạt tớnh khỏng vi sinh vật kiểm định bằng nồng độ ức chế tối thiểu dựa theo phương phỏp của Vanden Berghen (1994), được tiến hành trờn phiến vi lượng 96 giếng, với chất đối chứng là Amphoterilin B và Nystatin và thử nghiệm tại Viện húa học cỏc hợp chất thiờn nhiờn và Viện Húa học – Viện Hàn lõm KHCN Việt Nam.
Cỏc hợp chất dựng thử nghiệm: định hướng lựa chọn đối tượng thử nghiệm là dựa theo tài liệu, những hợp chất hữu cơ chứa halogen và cỏc nhúm OH trong nhõn phenyl thường cú hoạt tớnh sinh học cao, do đú trong cụng trỡnh này đó chọn cỏc chất
- Dóy 1: cỏc hợp chất chứa nhúm Br trong nhõn aryl IVe, Xe, XIVe, XVe, và XVIe. - Dóy 2: cỏc hợp chất chứa nhúm OH trong nhõn aryl IIIc, IVc, VIIc, VIId, IXc,
Xc,d; XIc, XIIc,d; XIIId, XIVd, XVIIc.
Cỏc chủng vi sinh vật kiểm định dựng thử nghiệm bao gồm: -Vi khuẩn Gr(-): E.coli, P.aeruginosa.
-Vi khuẩn Gr (+): B.subtillis, S.aureus. - Nấm mốc: A&P.niger, F.oxysporum. - Nấm men: C.albicans, S. cerevisiae.
Nấm và vi khuẩn được nuụi cấy và duy trỡ trong mụi trường dinh dưỡng dịch thể (24 giờ đối với vi khuẩn, 48 giờ đối với nấm) và được hoạt hoỏ trước khi tiến hành thử nghiệm. Mẫu chất thử được hoà tan trong dung dịch DMSO với 4-10 thang nồng độ được pha loóng từ dung dịch gốc rồi nhỏ sang phớm vi lượng 96 giếng. Sau khi được hoạt hoỏ, vi sinh vật kiểm định được pha loóng trong mụi trường dinh dưỡng cho tới nồng độ tương đương 0,5 đơn vị MCLand (khoảng 108 vi sinh vật/1ml). Để trong tủ ấm 370C/24 giờ đối với vi khuẩn và 300C/48 giờ đối với nấm.
Sau đú, đọc kết quả và tớnh giỏ trị ức chế tối thiểu.
Kết quả thể hiện trờn bảng 3.45 (xem phần thực nghiệm) cho thấy, cỏc hợp chất dóy 1 cú 3 mẫu cho kết quả dương tớnh, trong đú hợp chất 5-(4-isothioxianato-2-
bromphenyl)-1,3,4-oxađiazol-2-thiol IVe cú hoạt tớnh với cả ba chủng: Khỏng
B. subtillis ở nồng độ 85,6àg/ml, khỏng chủng S.aureus ở nồng độ 98.1àg/ml, khỏng
chủng C.albicans ở nồng độ 77.2àg/ml. Hợp chất XIVe và XVIe khỏng chủng
B. subtillis ở nồng độ 81.1, 82.1àg/ml tương ứng.
Nhỡn chung, cỏc chất thuộc dóy 2 đều cú khả năng khỏng vi khuẩn Gram(+),
đặc biệt, thioure VIIc, IXc và quinazolin Xc cú tớnh khỏng cao. Thioure VIIc với nồng độ ức chế tối thiểu từ 12,5-50àg/ml cú khả năng khỏng 4 loại vi sinh vật kiểm định:
E.coli, B.subtillis, S.aureus, C.albicans, thioure IXc cũng khỏng được 4 loại:
P.aeruginosa, B.subtillis, F. oxysporum, S.cervisiae, cũn quinazolin Xc khỏng được 6
loại: 2 chủng Gram (-), hai chủng Gram (+) và hai chủng nấm men (bảng 3.46). Cả ba chất này đỏp ứng được quy tắc chọn lọc, là đối tượng được nghiờn cứu tiếp tục để cú thể sử dụng vào thực tiễn.