Chƣơng 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tƣợng, thời gian và địa điểm nghiên cứu
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
Đối tƣợng nghiên cứu của chúng tôi là những bệnh nhân nam đƣợc chẩn đốn vơ sinh ngun phát có số lƣợng tinh trùng < 5 triệu/ml tinh dịch, đã đƣợc xét nghiệm tinh dịch đồ tại Trung tâm Tƣ vấn di truyền, bệnh viện trƣờng Đại học Y Hà Nội, thời gian từ tháng 10/2015-tháng 6/2018.
2.1.1.1. Số bệnh nhân và số mẫu
- Cỡ mẫu: cỡ mẫu cần thiết cho nghiên cứu đƣợc tính dựa trên cơ sở tần số xuất hiện các đa hình gen.
- Cỡ mẫu đƣợc xác định theo công thức:
pq OR C 2 ) ln ( 4 n Trong đó: + n : Là số mẫu cần thu thập.
+ C: Là hằng số liên quan đến sai số loại I và loại II. Lấy giá trị = 0,05 và β = 0,20 thì C = 7,85
+ OR: Tỉ số nguy cơ.
+ p: tần số xuất hiện đa hình gen.
Trong nghiên cứu này chúng tơi tiến hành phân tích đa hình của 3 gen
GSTP, NAT2 và CYP1A1. Để đảm bảo số lƣợng cỡ mẫu phù hợp và có thể bao phủ đƣợc số lƣợng đa hình của cả 3 đa hình trên chúng tơi áp dụng tính
43
OR và p theo nghiên cứu Sena Erdogan Aydes [132] trên đa hình gen
CYP1A1 với tần số xuất hiện p = 0,29 và OR= 3,9 đối với kiểu gen Ile/Val và
Val/Val (đây là nghiên cứu có p và OR nhỏ nhất, do vậy cỡ mẫu sẽ lớn, đảm bảo đƣợc giá trị của nghiên cứu).
+ Thay các giá trị vào đƣợc n= 82,5 + Làm tròn là 83.
Thực tế, trong nghiên cứu này chúng tơi đã thực hiện trên nhóm vơ sinh là 170 và nhóm chứng là 170.
- Nhóm vơ sinh: 170 nam giới khơng có tinh trùng hoặc ít tinh trùng trong độ tuổi sinh sản: tuổi 18 - 50.
- Nhóm chứng: 170 nam giới trong độ tuổi sinh sản: tuổi 18 - 50, đã có ít nhất 1 con.
2.1.1.2. Tiêu chuẩn chọn đối tượng nghiên cứu
Đối với nhóm vơ sinh:
- Nam giới vơ sinh khơng có tinh trùng hoặc ít tinh trùng (< 5 triệu/ml).
- Vô sinh không rõ nguyên nhân.
- Trong độ tuổi sinh sản. - Đồng ý tham gia nghiên cứu.
Đối với nhóm chứng:
- Nam giới trong độ tuổi sinh sản.
- Có ít nhất một đứa con.
- Khơng có bất kỳ bất thƣờng nào về chức năng sinh sản.
44
2.1.1.3. Tiêu chuẩn loại trừ
- Nam giới vô sinh đã đƣợc xác định nguyên nhân: Mất đoạn nhỏ trên NST Y, có bất thƣờng NST, tắc nghẽn đƣờng dẫn tinh, giãn tĩnh mạch tinh...
- Nam giới đang mắc các bệnh cấp tính, bị tâm thần... - Nam giới bị các bệnh ảnh hƣởng đến sức khỏe sinh sản. - Những ngƣời không đồng ý tham gia nghiên cứu.
2.1.2. Thời gian nghiên cứu
Nghiên cứu đƣợc tiến hành từ 9/2015 đến 5/2018.
2.1.3. Địa điểm nghiên cứu
Nghiên cứu đƣợc tiến hành tại trung tâm Tƣ vấn di truyền, bệnh viện Đại học Y Hà Nội.