2. Nội dung
2.5. Phương pháp kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết
gà ở ựàn xảy ra bệnh
Tiến hành phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà HI (Haemagglutination inhibition test) ựể kiểm tra hiệu gắa kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà ở ựàn xảy ra bệnh.
* Chuẩn bị
- Hồng cầu gà 1% chế như trong phản ứng HA
- Huyết thanh của gà trong ựàn ựang xảy ra bệnh Newcastle: Bắt ngẫu nhiên một số gà trong ựàn ựang xảy ra bệnh Newcastle, lấy máu chắt huyết thanh riêng từng con ựể kiểm tra lượng kháng thể.
- Kháng nguyên chuẩn: Virus Newcastle ựã biết ựược xác ựịnh bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gà và ựược pha ở hiệu giá chứa 4 ựơn vị ngưng kết hồng cầu (4 ựơn vị HA).
+Tiến hành phản ứng:
Phản ứng có thể tiến hành trên ống nghiệm, trên tấm nhựa vi ngưng kết (Microplates) có 96 lỗ ựáy chữ U hoặc ựáy chữ V.
Sơ ựồ tiến hành phản ứng HI . đối chứng Ô giếng số Nguyên liệu 1 2 3 4 5 6 7 8 (+) (-) Nước sinh lý (ộl) 25 25 25 25 25 25 25 25 50
Huyết thanh gà cần kiểm tra (ộl) 25
độ pha loãng HT 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256
Virus Newcastle chuẩn
(4 ựơn vị HA) (ộl) 25 25 25 25 25 25 25 25 50
Hồng cầu gà 1% (ộl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
Sau khi cho nước sinh lý và huyết thanh theo sơ ựồ, trộn ựều rồi hút 25ộl sang giếng thứ hai 25ộl. Tiếp tục làm như vậy ựến giếng 8 hút bỏ 25ộl.
Như vậy ựộ pha loãng huyết thanh của gà trong ựàn ựang xảy ra bệnh Newcastle theo bậc 2: 1/2, 1/4 Ầ 1/256.
-Cho 25ộl dung dịch virus Newcastle chuẩn có hiệu giá 4HA vào các lỗ -Lắc ựều tấm nhựa, ựể ở nhiệt ựộ phòng 30 phút.
-Cho 25ộl hồng cầu gà 1% vào các lỗ giếng.
-để 30 phút trong phòng thắ nghiệm rồi ựọc kết quả. +đọc kết quả:
Nếu trong huyết thanh của gà có chứa kháng thể chống virus Newcastle thì kháng thể này sẽ trung hòa virus Newcastle, do ựó không còn virus ựể làm ngưng kết hồng cầu gà. Hàm lượng kháng thể càng cao thì khả năng trung hòa virus càng lớn và ngược lại.
Căn cứ vào hiện tượng ngưng kết hồng cầu của phản ứng, có thể xác ựịnh ựược hàm lượng kháng thể chống Newcastle có trong huyết thanh của gà.