Hình 3 .8 nhăh ng ca các t lh dung môi G H2Oăđ n ng oi qua nd ch ch it
B ng 2.7 Phân lo is khác bi vv trí màu
E n m gi a 0 và 1 Thôngăth ng s khác bi t này không th c m nh năđ c
E n m gi a 1 và 2 Khác bi t r t nh , ch c m nh năđ c b iăng i có kinh nghi m
E n m gi a 2 và 3.5 Khác bi tăt ngăđ i, có th c m nh năđ c b iăng i khơng có kinh nghi m
E n m gi a 3.5 và 5 Khác bi t l n E l năh nă5 Khác bi t r t l n
M t s quyă c v h ng l ch màu:
L* mang d u (+) : s l chămƠuătheoăh ng sáng lên
34
2.5.6.5. ánh giá c m quan
Ph ngăphápăđánhăgiáăc m quan s n ph măălƠăph ngăphápăđánhăgiáăd a vào thangăđi măđánhăgiáăs n ph m. Thangăđi mănƠyădoăng i xây d ng công th c m ph m t o ra nh măđ aăraăm t s ch tiêuăc ăb năđ đánhăgiáăm u s n ph m. T đó,ăđi u ch nh công th c b ng vi c l a ch năvƠăđi u chnhăhƠmăl ng nguyên li u.
B ng 2.8Tiêu chí đánh giá c m quan
Tiêuăchíăđánhăgiá mi % mi % C m giác trong khi s d ng Kh n ngădƠnătr i 5 20 C m giác thoa trên da 5
Kh n ngăth m th u 5 mát trên da 5 C m giác sau khi s d ng bóng d u 5 20 m t da 5 m 5
Thangăđi măđánhăgiáăd aătrênăthangăđi m 5, chi ti tănh ăb ng 2.8.
Trongăđó:ămi% lƠăh ăs ăch ăm căđ ăquanătr ngătrongăm cătiêuăxơyăd ngăcơngăth c.
Cácăch ătiêuăđánhăgiáăc ăth ănh ăsau:
• Kh ăn ngădƠnătr i: ánhăgiáăđ ădƠnătr iăc aăm uăm ăph mătrênăda.
Dùng m tăl ng b ng nhau c a các m uăđangăxétă(dùng ngón tay ch m nh trên b m tăđ l y kem), thoa lên b m t da và kéo nh nhàng trên da trong m t ph n di n tích c đnh.
• Kh ăn ngăth măth u: ánhăgiáăkh ăn ngăth măth uăc aăm uăs năph măquaăth iăgiană th măth uăc aăs năph măvƠoăda.
Dùng m tăl ng b ng nhau c a các m uăđangăxétă(dùng ngón tay ch m nh trên b m tăđ l yăkem)ăđ thoa lên b m t da. Tính th i gian th m th u t lúc b tăđ u thoa choăđ n khi m uătrênădaăđưăkhô.ăTh i gian th m th u càng ng n,ăđi măđánhăgiáăcƠngăcao.
35
• ăbóngăda: Sauăkhiăthoaăxong,ăm uăs năph măsauăkhiăđưăth măth uăvào da thì xem xétătrênădaăcóăđ ăbóngăc aăd uăgơyăraăhayăkhơng.ăDaăcƠngăítăb ăbóngăd u,ăđi măđánhăgiáă càng cao.
• ăm tăda: Sauăkhiăthoaăxong,ăm uăs năph măđưăth măth uăvƠoăda,ădùngăcácăđ uă ngónătayăđ ăki mătraăđ ăm tătrênăda.ăDaăcƠngăm t,ăđi măđánhăgiáăcƠngăcao.
B ng 2.9Thang đi m đánh giá c m quan
i m 5 4 3 2 1 ánhăgiá R t t t T t B ng lòng Kém R t kém ▪ C m quan khi s d ng i măđánh giá Tínhăn ng 1 2 3 4 5 dàn tr i R t khó Khó Bìnhăth ng D R t d C m giác thoa trên da R t khó ch u Khó ch u Bìnhăth ng H iăd ch u D ch u Kh n ngă th m th u R t khó Khó Bìnhăth ng D R t d
mát trên da Khơng mát H iămát Bìnhăth ng Mát R t mát
▪ C m qu n sau khi s d ng i măđánh giá Tínhăn ng 1 2 3 4 5 bóng d u R t nh n Nhanh nh n Nh n Bình th ng Khơng nh n
m t da Khôngăm t H iăm t Bìnhăth ng M t R tăm t
36
CH NGă3: K T QU VÀ BÀN LU N
3.1. CHU N B VẨă ÁNHăGIÁăNGUYÊNăLI U
iăt ng nghiên c u c aăđ tài này là rau di păcá,ăđ c thu th păvƠoăđ u tháng 2/2022. Di păcáăt iăđ c lo i b thân, lá d p,ăh ,ăch thu th p lá nguyên, s đ c s y khô nhi tăđ 50÷60ă ătrongăvịngăkho ngă3ăngƠyăđ đ măđ t t 8÷10%. Nguyên li u khôăđ căl uătr trongăđi u ki n kín và tránh m m c b ngăcáchăđ trong túi khóa kín và kèm theo silicagel hút m.
Kh oăsátăs ăb cho th y d ch chi t lá di p cá khô và b t di p cá khô cung c p hƠmăl ng polyphenol t ng t ngăđ ngănhauănh ngăhƠmăl ng chlorophyllăthuăđ c khi s d ng b t di păcáăkhôăcaoăh n.ă ng th i s d ng b t di p cá gây khó kh năh nă cơngăđo n l c d ch chi t so v i nguyên li u lá di p cá khơ. Vì v yăđ iăt ng nghiên c u c aăđ tài là rau di p cá khô d ng lá.
B ng 3.1 c đi m c a nguyên li u nghiên c u
căđi m Mô t lá di p cá khô
Màu s c Màu xanh và nâu xen l n
Mùi v Mùi th oăd c,ăth mănh
m (%) 8÷10
Lá di p cá khơ
37
3.2. KH O SÁT QUÁ TRÌNH THU CHI T XU T
Các nghiên c uătr c c a nhóm trong kh o sát chi t xu t di p cá trên h dung môi ethanol- n c thuăđ c k t qu hƠmăl ng polyphenolăthuăđ c r t cao khi s d ng t l th tích 75:25 cho h dung môi. Tuy nhiên, d ch chi t nƠy khi th nghi m ng d ng trong m ph m l iăcóăđ b năkhôngăcao,ăthayăđ i r̃ r t theo th i gian.ă i u này do hàm l ng các h p ch t mƠuănh ăchlorophyll và d n xu t c a chúng gây ra. Do v y, lu năv nă m c tiêu l a ch n h dung môi làm gi măhƠmăl ng chlorophyll mà v n gi nguyên ho căthayăđ iăkhôngăđángăk hƠmăl ng c a các ho t ch t khác trong chi t xu t c a di p cá.ă đ tăđi uăđó,ăđ nhăh ng s th nghi m v i các h dung môi ancol- n c khác nhau trong quy trình chi t.
3.2.1. D ch chi t di p cá
Di p cá s đ c chi t nhi tăđ 60÷65ă , trong th i gian 1 gi v i t l nguyên li u di p cá khô/dung môi là 1/10 g/mL. ơyălƠ đi u ki n chi t phù h păđư đ c kh o sát vƠ l a ch n d a trên nghiên c u c a nhóm nghiên c u.
3.2.1.1. nh h ng c a t l dung môi EtOH - H2O
H dung môi EtOH - H2O là h dung môi ph bi n trong chi t tách các h p ch t t nhiên. EtOH và H2O có ch s phân c c l năl t là 5,2 và 9 [29]. Tùy thu c vào t l c a EtOH - H2O mà ch s phân c c c aădungămơiăthayăđ i, d năđ n tính ch t d ch chi t thayăđ i. n i dung này, t l EtOH và H2O s đ căthayăđ i trong quy trình chi t. Sau đó,ăs n ph m chi t s đ căđánhăgiáăv ngo i quan, tính ch tăvƠăhƠmăl ng ho t ch t thu đ c.
38
B ng 3.2 Mô t ngo i quan d ch chi t di p cá v i dung môi EtOH - H2O
EtOH- H2O EtOH100 EtOH75 EtOH50 EtOH25 EtOH0
Mô t Màu xanh nâu s m,ăđ u màu
Màu xanh nâu s m,ăh iăng
vàng
Màu xanh nâu s m, ánh lên màu vàng Màu nâu ng vàng Màu nâu ng vàng m và ch t d bay h iă(%) 99,8 99,64 99,01 99,24 98,46
K t qu kh o sát v c m quan cho th y d ch chi t có s khác nhau v màu s c khi s d ng các dung mơi có t l EtOH - H2O khác nhau. D ch chi t chuy n màu t nâu s m tr nên nh t d n và chuy năsangăvƠngănơu.ă i u này cho th y khi gi m ph nătr măt l c a EtOH trong dung mơi trong quy trình chi t,ăhƠmăl ng chlorophyll và các d n xu t mƠu gi m d n.ă i u này có th lý gi i qua vi c chlorophyll và các d n xu t c a nó là nh ng h p ch t có tính phân c c th p, có xu h ng hịa tan trong nh ng dung mơi có đ phân c c th p. Khi t l EtOHăt ngălênătrongădungămơi,ălƠmăchoăch s phân c c trung bình c a dung mơi gi m xu ng, nên chlorophyll và các d n xu t c aănóăcóăxuăh ng hịa tan vào chi t xu t nhi uă h n.ă Ng c l i khi t l EtOH gi mă điă trongă dungă mơi,ă chlorophyll cóăxuăh ng gi m s hòa tan vào chi t xu t, t đóăgiúpăchi t xu t tr nên nh tămƠuăh n.ă
Hình 3.2 C m quan các m u d ch chi t di p cá dung môi EtOH- H2O khi thay đ i t l c a
EtOH –N c.
Hình 3.3 nh h ng c a các t l h dung môi EtOH - H2O đ n quang ph h p thu vùng kh ki n
c a d ch chi t
39
(a)ă ánhăgiáătrênănguyênăli u khô
(b)ă ánhăgiáătrên th tích d ch chi t
Hình 3.4 ảàm l ng polyphenol t ng và chlorophyll t ng có trong d ch chi t rau di p cá v i dung môi
EtOH-N c
Trong cácăđánh giá s theo d̃iăl ng ch t chi tăraăđ c tính trên nguyên li u khô đ đánh giá hi u qu chi t vƠ trong dung d ch chi tăđ so sánh ch tăl ng s n ph m.
40
NhìnăvƠoăđ th hình 3.4,ăhƠmăl ng polyphenol t ng trong d ch chi tăthayăđ i theo s thayăđ i t l EtOH - H2O trong dung môi. m u d ch chi t v i dung môi EtOH75,ăhƠmăl ng polyphenol t ng trên 1g nguyên li u khơ là cao nh t, kho ng 43÷44 mg/g nguyên li u khô. HƠmăl ng polyphenol t ng trên 1g nguyên li u khô gi m d n trong các m u d ch chi t v i dung môi EtOH50, EtOH25, EtOH0. Th nh ngăn u tính theoăhƠmăl ng polyphenol t ng trên 1 lít d ch chi t thì m u d ch chi t EtOH50 l i có hƠmăl ng polyphenol t ng trên 1 lít d ch chi t cao nh t, caoăh năsoăv i khi s d ng dungămôiăEtOH75ă25%,ăđ t 3,72 g/L.
Xét v hƠmăl ng chlorophyll,ăhƠmăl ng ch t mƠu t ng trong d ch chi tăc ngă thayăđ i theo s thayăđ i t l EtOH - H2Oătrongădungămôi.ăHƠmăl ng chlorophyll t ng gi m d n khi dung môi gi m d năhƠmăl ngăEtOH.ă i u này ch ng minh thành ph n chloropyll n m ch y uătrongăEtOH.ăHƠmăl ng chlorophyll m u d ch chi t EtOH50 gi m h n so v iăhƠmăl ng chlorophyll m u d ch chi t EtOH75. T iăđi u ki n s d ng EtOH75,ăl ng chlorophyll t ng là 106 µg/L. T iăđi u ki n s d ng EtOH50, d ch chi t cóăl ng chlorophyll t ng là 28,1 µg/L, lƠ r t th p.
D a vào quang ph h p thu c a các m u d ch chi t v i dung mơi có t l EtOH - H2O thayăđ i, có th th y r ng các m u d ch chi t có thành ph n các h p ch t thayăđ i. T iăb căsóngă670nm,ăđnh h p thu c a chlorophyll khi dùng EtOH100 và EtOH75 cao h năh năđnh h p thu c a các m u d ch chi t khác, ng v i c m quan c a 2 m u d ch chi t này có màu s măđ m màu nh t. Tuy nhiên, vi c gi măhƠmăl ng EtOH trong dung môiăc ngălƠmăgi măđ h p thu c a m u d ch chi tătrongăvùngăb c sóng 450÷600 nm, ch ng t dung môi làm nhăh ng t iăhƠmăh ng các ch t khác trong h .
D a trên nh ng k t qu trên, có th th y r ng dung mơi EtOH50 là dung mơi thích h p trong vi c chi t di p cáăđ đ m b oăhƠmăl ng polyphenol t ng trong d ch chi t v n cao vƠ quan tr ng nh t lƠ đư gi măhƠmăl ng chlorophyllălênăđ n 70%, gi măđiămƠuă xanh l căđángăk trong s n ph m d ch chi t.
41
3.2.1.2. nh h ng c a t l dung môi propylene glycol (PG) –N c
Hình 3.5 nh h ng c a các t l h dung môi PG –
N c đ n ngo i quan d ch chi t. Hình 3.6 nh h ng c a các t l h dung môi PG - H2O đ n quang ph h p thu vùng
kh ki n c a d ch chi t
B ng 3.3 Mô t ngo i quan d ch chi t di p cá v i dung môi PG – N c
M u d ch chi t di p cá trong dung môi PG - H2O có màu xanh s m gi m d n nh t d n và chuy n v mƠuănơuăvƠngăkhiădungămôiăthayăđ i t l PG- H2O t 100%ăPGăđ n 0% PG. T ngăt l PG s d ng c ngăxuăh ngăt ngăcác thƠnh ph năđ c chi t theo, th hi n qua mƠu s c vƠ hƠmăl ng ch t d bayăh iăthayăđ i (B ng 3.3). Tuy nhiên, khi s d ng PG thì dung mơi nƠy khóbayăh i,ăv năl uăl i trong m u nên giá tr caoăh năh n so v iătr ng h p không dùng PG hay dùng EtOH.
Quang ph h p thu cho th yăđ nh h p thu c a chlorophyll xu t hi n t i 670 nm v i các m u s d ng PG100 và PG75 cao h năh n v iăcácăđ nh h p thu c a các m u d ch chi t còn l i.ă nh h p thu c a m u d ch chi t PG75 là cao nh t (Hình 3.6). Vi c thayăđ iăhƠmăl ngăPGătrongădungămơiăc ngălƠmăthayăđ iăđ h p thu c a m u d ch chi t
PG100 PG75 PG50 PG25 PG0 Mơ t S m màu, có ánh màu xanh l c S m màu, có ánh màu xanh l c Nâu s m, cóăánhăh iă xanh l c Nơuăđ m, sáng h n,ăánhălênă vàng nâu Vàng s m, sáng màu m và ch t d bay h iă(%) 86,82 81,71 88,51 87,23 98,46 100% 75% 50% 25% 0%
42
trongăvùngăb c sóng 380÷600 nm, ch ng t dung mơi làm nhăh ng t iăhƠmăh ng các ch t khác trong h .
(a)ă ánhăgiáătrênăngunăli u khơ
(b)ă ánhăgiáătrên th tích d ch chi t
Hình 3.7 nh h ng c a các t l h dung môi PG - H2O đ n hàm l ng polyphenol t ng và chlorophyll t ng trong d ch chi t
M u d ch chi t PG75 th hi n hi u qu tách polyphenol t ng cao nh t, v i giá tr polyphenol t ngăđ t 43,9 mg/g nguyên li u khơ. Trongăkhiăđó, m u d ch PG50 th hi n hi u qu chi t polyphenol t ng là 40,85 mg/g nlk,ăđ t 93% so v i giá tr polyphenol t ng
43
cao nh t c a m u d ch chi tăPG75.ăTuyănhiên,ăkhiăđánhăgiáătrênăd ch chi t s n ph m thu đ c thì m u s d ng h dung môi PG50 l iăchoăhƠmăl ng polyphenol t ng cao nh t, đ t giá tr 3,19ăg/LăvƠăcaoăh năkho ng 21% so v i giá tr t i PG75.
HƠmăl ng chlorophyll t ng trong d chăthuăđ c t ngăd n t h dung môi s d ng lƠPG100ăđ năPG75ăvƠăsauăđóăgi m d n t PG75ăđ năPG0.ăHƠmăl ng chlorophyll t ng m u d ch chi tăPG75ăđ c th hi n cao nh t.ăHƠmăl ng chlorophyll t ng m u d ch chi t PG50 là 79,6 µg/L, gi m 46% so v iăhƠmăl ng chlorophyll t ng m u chi t PG75.
Doăđó,ăsoăv i các t l kh o sát khác c a dung môi PG- H2O trong quy trình chi t d ch chi t di p cá, h PG50 là dung mơi thích h p nh t trong vi c chi t xu t di păcáăđ đ m b o hàm l ng ho t ch t polyphenol t ng,ă đ ng th iă đ m b oă hƠmă l ng chlorophyll t ng trong d ch đ th p, gi măđiămƠuăxanhăl c.
3.2.1.3. nh h ng c a t l dung mơi Glycerin - H2O
Hình 3.8 nh h ng c a các t l h dung môi G
- ả2O đ n ngo i quan d ch chi t Hình 3.9 nh h ng c a các t l h dung môi
Glycerin - H2O đ n quang ph h p thu vùng kh ki n c a d ch chi t
B ng 3.4 Mô t ngo i quan d ch chi t di p cá dung môi Glycerin-H2O 100% 75% 50% 25% 0% 100% 75% 50% 25% 0%
44
K t qu c m quan nh n th y r ng, màu xanh nâu s m khơng cịn gi m d n khi gi m d năl ng Glycerin trong dung môi. M u d ch chi t G100 và G0 có màu nh tăh nă so v i nh ng m u d ch chi t khác. Quang ph h păthuăc ngăth hi năđnh h p thu vùng kh ki n c a m u d ch chi t t i 670 nm th p h n, ch ng t l ng chlorophyll th p h nă r t nhi u so v iăhƠmăl ng Chlorophyll t ng c a m u d ch chi t nh ng dung môi kh o sátătr c.
(a)ă ánhăgiáătrênănguyênăli u khô
G100 G75 G50 G25 G0 Mô t Màu vàng s m, sáng, đ u màu S m màu, ánh lên vàng nâu Nơuăđ m, s m, ánh lên vàng nâu Nơuăđ m, sángăh n,ăánhă lên vàng nâu Vàng s m, sáng, l p trên nh tămƠuăh n m và ch t d bay h iă(%) 5,03 28,04 40,63 65,39 98,46
45
(b)ă ánhăgiáătrênăth tích d ch chi t
Hình 3.10 nh h ng c a các t l h dung môi Glycerin - H2O đ n hàm l ng polyphenol t ng và chlorophyll t ng trong d ch chi t
Vi c s d ng h G75 th hi n hi u qu chi t polyphenol t ng cao nh t, v i giá tr polyphenol t ngăđ t 35,2 mg/g nlk.ăTuyănhiên,ăkhiăđánhăgiáătrênătínhăch t d ch chi t thu đ căthìăhƠmăl ng polyphenol t ng trên 1 lít d ch chi t c a m u G50 là 2,68 g/L và cao h năkho ng 33% so v i giá tr t i G75.
3.2.1.4. So sánh và đánh giá
i v i các h dung môi cho k t qu t t nh t,ăđi u ki n tríchălyăđ c l p l i vƠ s n ph măđ c so sánh, trình bƠy trong b ng 3.5.
B ng 3.5 So sánh tính kh d ng c a các lo i dung môi chi t
Dung môi EtOH50 PG50 G50
HƠmăl ngăpolyphenolăt ng
(g GAE/L) 3,72 3,19 2,68
HƠmăl ngăchlorophyllăt ng