3. Ý nghĩa thực tiễn của ựề tài
3.5. Kết quả của phản ứng RT-PCR
Mẫu bệnh phẩm là phổi, hạch phổi, ruột, lách ựược lấy từ các chó mổ khám (bảng 3.5) với những biến ựổi bệnh lý ựại thể (bảng 3.7) và những biến ựổi bệnh lý vi thể (bảng 3.8), ựược sử dụng ựể tiến hành phản ứng RT-PCR. Nhằm phát hiện sự có mặt của virus Care trong bệnh phẩm, chúng tôi ựã sử dụng cặp mồi upp1 và upp2 ựể xác ựịnh ựộ dài của gen P: Phosphoprotein là 429 bp theo thiết kế, qua ựó các mẫu dương tắnh với virus Care sẽ có vạch tương ứng là 429 bp (Nguyễn Thị Lan và cs, 2005), ảnh ựại diện (ảnh 3.33, ảnh 3.34, ảnh 3.35). Kết quả của phản ứng RT-PCR ựược thể hiện ở bảng 3.10.
Hình 3.33 . Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C01)
(Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR với ựộ dài của P gene là 429 bp; giếng 1: 100 bp DNA Maker; giếng 2: ựối chứng âm; giếng 3: ựối chứng dương; giếng 4: mẫu phổi của chó C01; giếng 5: mẫu hạch của chó C01; giếng 6: mẫu ruột của chó C01; giếng 7: mẫu lách của chó 01 )
Hình 3.34 . Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C02)
(Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR với ựộ dài của P gene là 429 bp; giếng 1: 100 bp DNA Maker; giếng 2: ựối chứng âm; giếng 3: ựối chứng dương; giếng 4: mẫu phổi của chó C02; giếng 5: mẫu hạch của chó C02; giếng 6: mẫu ruột của chó C02; giếng 7: mẫu lách của chó C02)
Hình 3.35 . Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C04)
(Virus Care ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR với ựộ dài của P gene là 429 bp; giếng 1: 100 bp DNA Maker; giếng 2: ựối chứng âm; giếng 3: ựối chứng dương; giếng 4: mẫu phổi của chó C04; giếng 5: mẫu hạch của chó C04; giếng 6: mẫu ruột phổi của chó C04; giếng 7: mẫu lách của chó 04)
Bảng 3.10: Kết quả của phản ứng RT-PCR
Cơ quan đối chứng
STT Chó Phổi Hạch Ruột Lách - + 1 C01 + + + + 2 C02 + + + + 3 C03 + + + + 4 C04 + - + + 5 C05 + + + - 6 C06 + + + + 7 C07 + + + + 8 C08 - + + + 9 C09 + + + + 10 C10 - + - + 11 C11 - + - + 12 C12 - + - + 13 C13 + + + + 14 C14 + + + + 15 C15 - + + + 16 C16 + + + + 17 C17 + + + + 18 C18 + + + + 19 C19 + + + + 20 C20 + + + + - + + Mẫu dương tắnh - Mẫu âm tắnh
So với thang chuẩn DNA (100 bp ladder) thì giếng ựối chứng dương (Ctrl+) sẽ cho vạch DNA tương ứng 429 bp (429bp theo thiết kế mồi); giếng ựối chứng âm (ctrl-) không cho vạch hay không có sản phẩm PCR -DNA. Các ựối chứng dương và âm ựều cho kết quả ựúng như dự kiến chứng tỏ trong thắ nghiệm này kết quả của phản ứng là ựáng tin cậy.
Kết quả của phản ứng RT-PCR cho thấy, tất cả 20 chó ựược chọn ựể tiến hành thắ nghiệm ựều dương tắnh với virus Care, ựạt tỷ lệ 100%; kết quả này cao hơn so với nghiên cứu của Frisk Al (1999). sử dụng mẫu huyết thanh và máu ựể tiến hành RT-PCR phát hiện virus Care. Kết quả của chúng tôi giống với kết quả của Ingrid D. R. Pardo (2005), những triệu chứng, bệnh tắch ở bộ máy hô hấp, bộ máy tiêu hóa, những biến ựổi thần kinh có ý nghĩa quan trọng trong chẩn ựoàn lâm sàng; những biến ựổi bệnh lý ở phổi, kết mạc mắt, sừng hóa gan bàn chân có ý nghĩa cao trong việc lấy mẫu tiến hành phản ứng.
Bảng 3.10 cho thấy, tất cả 20 chó ựều nhiễm virus Care, nhưng trong 80 mẫu bệnh phẩm ựược lấy ở các cơ quan bộ phận khác nhau kiểm tra bằng phản ứng RT-PCR thì có 70 mẫu cho kết quả dương tắnh với virus care . để khẳng ựịnh thêm cho kết quả trên, chúng tôi cũng ựã tiến hành nhuộm hóa miễn dịch tổ chức (HMDTC) với mẫu phổi, hạch phổi, ruột, lách của 20 chó vừa ựược chẩn ựoán dương tắnh với virus Care bằng phản ứng RT-PCR. Theo Carpenter (1998). Nguyễn Thị Lan (2006,2008) khi có mặt của virus trong tổ chức ựem làm hóa miễn dịch sẽ cho kết quả dương tắnh với màu nâu vàng trên lát cắt tổ chức (màu của DAB). Vấn ựề cần thảo luận ở ựây là tại sao kết quả của phản ứng RT-PCR và hoá miễn dịch tổ chức lại khác nhau.
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ