3. Ý nghĩa thực tiễn của ựề tài
1.2.6. Phòng và ựiều trị bệnh
1.2.6.1. Phòng bệnh
- Phòng bệnh bằng vệ sinh
Nuôi dưỡng, chăm sóc tốt, cho chó ăn ựầy ựủ dinh dưỡng và vệ sinh sạch sẽ nơi ở của chó là những biện pháp tốt ựể tăng sức ựề kháng tự nhiên của cơ thể chó ựối với bệnh.
Những chó ốm phải nuôi cách ly, chuồng chó ốm phải tiêu ựộc bằng thuốc sát trùng, xử lý chất bài tiết và thức ăn nước uống thừa của chó bệnh.
Chó mới mua về phải kiểm tra kỹ hồ sơ, nuôi cách ly, theo dõi ắt nhất 10 ngày, nếu không thấy có biểu hiện của bệnh mới cho nhập ựàn.
- Phòng bệnh bằng tiêm phòng vacxin
Tiêm vacxin là biện pháp phòng bệnh dễ dàng và có hiệu quả nhất ựối với các bệnh do virus gây ra nói chung, trong ựó có bệnh Care. Vacxin phòng bệnh Care ựược tiêm lần ựầu cho chó lúc 2 tháng tuổi, trong những trường hợp chó có nguy cơ lây nhiễm cao thì có thể tiêm phòng sớm hơn. Tiêm nhắc lại sau mũi ựầu tiên 2 ựến 3 tuần. Sau ựó, tiêm nhắc lại mỗi năm một lần ựể ựảm bảo khả năng bảo hộ.
1.2.6.2. điều trị
Dùng kháng huyết thanh: liều 15-30 ml/con, tiêm sớm. Khi con vật ựã có triệu chứng viêm phổi hay triệu chứng thần kinh thì kháng huyết thanh không có hiệu lực.
Ở các cơ sở ựiều trị theo các bước sau ựây:
1. Cắt nôn bằng cách tiêm atropin hay primeran 2ml, tiêm dưới da. 2. Bổ sung nước và chất ựiện giải bằng cách cho uống Ozesol 5%, tiếp nước muối sinh lý 0,9% hay nước ựường Glucoza 5% vào tĩnh mạch của chó.
3. Cầm ỉa chảy bằng cách cho uống thuốc ựặc trị tiêu chảy chó mèo (ADP), Imodium hay Bisepton, Hampiseptol... ngày uống 1 lần.
4. Chống bội nhiễm bằng cách tiêm các loại kháng sinh như: Gentamycin, Streptomycin + Penicillin G 5000...
5. An thần cho chó: dùng các loại thuốc Seduxen, Meprobamat, Novocain, Analgin.
6. Trợ sức, trợ lực cho chó: Sử dụng các thuốc trợ tim mạch, trợ sức, trợ lực, cầm máu cho chó như: Caphein, Spartein; Vitamin B1; Vitamin B12, Vitamin K; Vitamin C.
1.3. Phản ứng RT-PCR
1.3.1. Nguyên lý của phản ứng RT-PCR
đây là phương pháp In vitro sử dụng cặp mồi ựể tổng hợp một số lượng lớn các bản sao từ một trình tự DNA ựặc biệt dựa trên hoạt ựộng của enzym polymerase.
Phương pháp PCR dựa trên hoạt ựộng của DNA polymerase trong quá trình tổng hợp DNA từ khuôn mẫu. Tất cả các DNA polymerase ựều cần những mồi là những ựoạn ngắn có khả năng bắt cặp với một ựầu của mạch khuôn. đoạn mồi này sau ựó ựược kéo dài ra là nhờ hoạt ựộng của enzym DNA polymerase ựể hoàn thành một mạch mới hoàn chỉnh.
Phương pháp RT-PCR là sự kết hợp giữa phương pháp phiên mã ngược và phương pháp PCR. Phương pháp này có thể phát hiện các RNA tồn tại với lượng rất thấp mà không thể phát hiện bằng phương pháp khác.
Do Taq polymerase sử dụng trong bước PCR không hoạt ựộng trên RNA nên trước hết cần chuyển RNA thành cDNA, nhờ enzyme phiên mã ngược reverse transcriptase (RT), sau ựó cDNA này sẽ ựược khuếch ựại nhờ Taq polymerase. Dấu hiệu xác ựịnh bệnh là sản phẩm nhân bản một ựoạn gene ựặc hiệu của virus. Sự hiện diện của sản phẩm ựược nhận biết qua ựiện di trên gel agarose.
Mô hình nguyên lý của phản ứng RT-PCR
Phản ứng PCR là một chuỗi nhiều chu kỳ ựược lặp ựi lặp lại mỗi chu kỳ gồm 3 bước:
Bước 1: Phân tử DNA ựược biến tắnh (Denaturation) ở 94 - 95◦C trong khoảng thời gian từ 30 giây ựến 1 phút (thời gian cho bước này dài hay ngắn phụ thuộc vào cấu trúc và chiều dài ựoạn DNA khuôn, máy chu kỳ nhiệt ống tube sử dụng và thể tắch cuối cùng của phản ứng, trong quá trình biến tắnh DNA sợi kép ựược tháo xoắn thành 2 ựoạn DNA mạch ựơn.
Bước 2: Giai ựoạn này là giai ựoạn cho phép mồi bắt cặp bổ sung với DNA sợi khuôn hay còn gọi là giai ựoạn lai. Nhiệt ựộ ựể mồi bắt cặp bổ sung với DNA sợi khuôn thường từ 40 Ờ 70◦C (nhiệt ựộ này tuỳ thuộc vào từng mồi
khác nhau) và giai ựoạn này kéo dài từ 30 giây ựến 1 phút tuỳ thuộc vào những mồi và DNA sợi khuôn tương ứng.
Bước 3: Giai ựoạn tổng hợp nên ựoạn DNA mới. Ở giai ựoạn này nhiệt ựộ ựược nâng lên 72◦C ựây là nhiệt ựộ thắch hợp nhất cho DNA polymerase hoạt ựộng ựể tổng hợp nên sợi DNA mới trên cơ sở mồi ựã ựược bắt cặp bổ sung với DNA sợi khuôn. Thời gian cho bước này có thể kéo dài từ 30 giây cho tới nhiều phút tuỳ thuộc vào ựộ dài của trình tự DNA cần khuyếch ựại.
1.3.2. Các bước tiến hành phản ứng PCR
PCR là một kỹ thuật phòng thắ nghiệm tương ựối dễ làm. Vật liệu ựầu tiên cho phản ứng PCR là DNA có chứa ựoạn gene cần nhân lên (lượng DNA sợi khuôn cho phản ứng PCR không nhiều, khoảng 50 Ờ 100 ng DNA); cần có các ựoạn mồi gắn (mồi xuôi và mồi ngược) ựặc hiệu cho ựoạn gene cần nhân lên; cần có DNA polymerase; nguyên liệu tổng hợp cho sợi mới là các dNTP (dATP, dGTP, dCTP, dTTP); ion Mg2+, một dung dịch ựệm thắch hợp cho phản ứng PCR các thành phần trên ựược hỗn hợp với nhau theo những tỷ lệ nhất ựịnh về nồng ựộ và thường thể tắch cuối cùng cho 1 phản ứng PCR là 25ộl hoặc 50 ộl.
Chương 2. đỐI TƯỢNG, đỊA đIỂM, THỜI GIAN, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU