STT Biến đầu ra Ký hiệu Đơn vị Giá trị dưới Giá trị
tối ưu Giá trị trên
1 ĐHT ở 30 phút Y1 % 0,00 22,00 60,00
2 ĐHT ở 180 phút Y2 % 75,00 81,00 100,00
2.3.3. Phương pháp đánh giá
2.3.3.1. Phương pháp đánh giá một số đặc tính nguyên liệu diltiazem hydroclorid
Nguyên liệu DTZ dùng trong nghiên cứu được đánh giá về các đặc tính:
- Hình thức: đánh giá bằng cảm quan.
- Hình dạng và kích thước tiểu phân: quan sát dưới kính hiển vi quang học. 2.3.3.2. Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của hạt/cốm
18
- Độ ẩm: Xác định độ ẩm của cốm bằng phương pháp mất khối lượng do làm khô
trên cân hàm ẩm Precisa XM 60 với khối lượng cốm khoảng 1 g (điều kiện: Nhiệt độ 110°C đến khi khối lượng không đổi).
- Độ trơn chảy: Chỉ số Carr biểu thị cho khả năng trơn chảy của bột/hạt được tính
theo công thức:
CI = Vt-Vbk
Vt . 100 (%)
Trong đó: CI là chỉ số Carr (%); Vt, Vbk lần lượt là thể tích thơ và thể tích biểu
kiểu kiến của hạt (mL) (Vt và Vbk được đo trên máy đo tỷ trọng ERWEKA SVM).
Bảng 2.6. Tương quan chỉ số Carr và độ trơn chảy của hạt/bột [1]
Chỉ số Carr < 10 11 – 15 16 – 20 21 – 25 26 – 31 32 – 37 > 38 Phân loại độ trơn chảy Rất tốt Tốt Khá Trung bình Kém Rất kém Rất, rất kém
2.3.3.3. Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng viên nén 1/ Hình thức viên
Đánh giá bằng cảm quan, viên nén hình trụ lồi, khơng sứt cạnh bong mặt.
2/ Lực gây vỡ viên
Xác định bằng máy đo độ cứng, thử với 6 viên, lấy giá trị trung bình. Yêu cầu lực gây vỡ viên 7-11 kP.
3/ Phương pháp định lượng dược chất trong viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
a) Định lượng dược chất trong viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
Qua tham khảo DĐVN V [5] và dược điển Mỹ [41], tiến hành định lượng diltiazem hydroclorid trong viên như sau:
- Mẫu thử: Cân 20 viên ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình, nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột mịn tương ứng với khoảng 60,0 mg DTZ cho vào BĐM 50 mL, thêm 30 mL methanol, siêu âm 30 phút. Bổ sung methanol đến vạch, lắc đều. Ly tâm dịch ở tốc độ 5000 vòng/phút trong 15 phút rồi gạn lấy dịch trong, hút chính xác 1,0 mL dịch trong vào BĐM 100 mL, thêm nước tinh khiết vừa đủ, lắc đều, lọc hỗn hợp qua giấy lọc (bỏ 15 – 20 mL dịch lọc đầu), thu được dung dịch thử (có nồng độ CT khoảng 12 µg/mL).
- Mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 60,0 mg DTZ và làm tương tự mẫu thử. - Mẫu trắng: Hút chính xác 1,0 mL methanol cho vào BĐM 100 mL, thêm nước tinh khiết vừa đủ, lắc đều, lọc qua giấy lọc (bỏ 15 – 20 mL dịch lọc đầu), thu được dung dịch mẫu trắng.
- Đo độ hấp thụ của mẫu thử và mẫu chuẩn ở 2 bước sóng 236 nm và 250 nm với mẫu trắng như trên. Hàm lượng DTZ trong mẫu thử được tính bằng phương pháp so sánh điểm theo cơng thức sau:
19 HL =∆At x mc x Mtb
∆Ac x mt x 60 . 100 (%)
Trong đó: HL là hàm lượng dược chất trong viên so với lý thuyết (%); ∆At, ∆Ac
là giá trị hiệu độ hấp thụ của dung dịch thử và dung dịch chuẩn tại bước sóng 236 nm và 250 nm; mc là khối lượng diltiazem hydroclorid chuẩn (mg); mt là khối lượng bột viên (mg); Mtb là khối lượng trung bình viên (mg).
- Yêu cầu: Hàm lượng diltiazem hydroclorid phải nằm trong khoảng 90,0 - 110,0% so với hàm lượng lý thuyết.
b) Thẩm định một số chỉ tiêu phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại để định lượng dược chất trong viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
Phương pháp và cách tiến hành thẩm định được trình bày cụ thể trong phụ lục 1, bao gồm các chỉ tiêu: - Tính đặc hiệu - Tính tuyến tính - Độ đúng - Độ lặp lại - Độ chính xác trung gian
4/ Phương pháp đánh giá độ hòa tan viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
a) Thử độ hòa tan viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
Phương pháp đánh giá ĐHT được tham khảo từ chuyên luận “Diltiazem hydroclorid tablets” của USP 43 [41] với các thông số kỹ thuật:
- Thiết bị hòa tan kiểu cánh khuấy với tốc độ khuấy 75 vòng/phút.
- Mơi trường thử hịa tan: nước tinh khiết (một số cơng thức được đánh giá độ hịa tan thêm trong môi trường đệm HCl pH 1,2; đệm phosphat 0,05 M pH 4,5; đệm phosphat 0,05 M pH 6,8).
- Thể tích mơi trường thử hịa tan: 900 mL. - Nhiệt độ: 37 ± 0,5°C.
- Thời điểm lấy mẫu: 15, 30, 60, 120, 180 phút (các thời điểm lấy mẫu 15, 60, 120 phút là điều kiện được bổ sung thêm so với yêu cầu của dược điển Mỹ 43).
- Tiến hành: Vận hành thiết bị với các thông số đã nêu, cho 1 viên nén vào cốc thử hòa tan, lấy mẫu ở các thời điểm đã định, mỗi lần hút chính xác 20 mL dung dịch thử hịa tan, sau đó bổ sung ngay 20 mL mơi trường tương ứng.
- Xử lý mẫu:
+ Mẫu dung dịch thử hòa tan được pha lỗng đến nồng độ thích hợp (nằm trong khoảng tuyến tính), lắc đều và lọc qua giấy lọc (bỏ một lượng dịch lọc đầu phù hợp).
+ Pha dung dịch DTZ chuẩn trong môi trường thử độ hịa tan: cân chính xác khoảng 60,0 mg dược chất cho vào BĐM 50 mL, thêm 30 mL môi trường, siêu âm 30 phút rồi
20
bổ sung môi trường thử độ hòa tan, lắc đều, lọc qua giấy lọc (bỏ 15 – 20 mL dịch lọc đầu).
- Định lượng dược chất trong các mẫu dung dịch thử bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS tại bước sóng 236 nm và 250 nm, mẫu trắng là dung dịch mơi trường thử hịa tan.
- Cách tính kết quả:
+ Nồng độ DTZ trong dung dịch thử tại thời điểm thứ n: Cn = Cc x∆At ∆Ac+ V Vo x∑ Ci-1 (µg/mL) n i=1
Trong đó: Cn: nồng độ dung dịch thử tại thời điểm thứ n (µg/mL); Ci-1: nồng độ
dược chất trong môi trường thử hịa tan tại thời điểm thứ i-1 (µg/mL); Cc: nồng độ dung dịch chuẩn (µg/mL); ∆At, ∆Ac: lần lượt là hiệu độ hấp thụ tại 2 bước sóng 236 và 250
nm của dung dịch mẫu thử và mẫu chuẩn; V: thể tích mẫu lấy ở mỗi thời điểm lấy mẫu (20 mL); Vo: thể tích mơi trường thử hịa tan (900 mL).
+ Tỷ lệ dược chất giải phóng ở thời điểm thứ n (%): GPDC =Cn x D x Vo x 100
mv x H x 10^6 (%)
Trong đó: GPDC: tỷ lệ (%) dược chất giải phóng ở thời điểm thứ n so với lý thuyết; Cn: nồng độ dung dịch thử tại thời điểm thứ n (µg/mL); mv: khối lượng viên đem thử (g); H: hàm lượng dược chất trong viên (%); D: độ pha loãng của dung dịch thử; Vo: thể tích mơi trường thử hịa tan (900 mL).
- Yêu cầu: Không quá 60 % lượng diltiazem hydroclorid so với lý thuyết được hòa tan trong 30 phút và khơng ít hơn 75 % được hịa tan trong 180 phút.
b) Thẩm định một số chỉ tiêu phương pháp thử độ hòa tan viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
Phương pháp và cách tiến hành thẩm định được trình bày cụ thể trong phụ lục 2, bao gồm các chỉ tiêu sau:
- Tính đặc hiệu - Tính tuyến tính - Độ đúng
- Độ lặp lại
- Độ chính xác trung gian
5/ Đánh giá sự tương đồng của hai đồ thị giải phóng in vitro
Sự tương đồng của 2 đồ thị hịa tan được đánh giá thơng qua hệ số tương đồng f2 (similarity factor) theo công thức:
𝑓2 = 50. 𝑙𝑜𝑔 {[1 + 1 𝑛. ∑(𝑅𝑖− 𝑇𝑖)2 𝑛 𝑖=𝑛 ] −0,5 . 100}
21
Trong đó: n: số thời điểm lấy mẫu so sánh; Ri và Ti: độ hồ tan trung bình của chế phẩm đối chiếu và chế phẩm thử tại thời điểm thứ i (%).
Giá trị f2 cầng gần 100 thì hai đồ thị càng giống nhau: f2 = 100: Hai đồ thị giống nhau hoàn toàn; f2 = 50: Sự sai khác trung bình giữa hai đồ thị tại mỗi điểm là 10 %; 50 < f2 < 100: Hai đồ thị được coi là tương đồng [8], [18].
6/ Phương pháp đánh giá mơ hình động học của q trình giải phóng dược chất từ dạng bào chế
Các mơ hình động học thường được sử dụng để mơ tả q trình giải phóng dược chất từ dạng bào chế gồm có: mơ hình động học bậc 0, động học bậc 1 (Wagner), mơ hình Higuchi, Hixson – Crowell, Korsmeyer – Peppas, Hopfenberg…[11], [15], [18]. Nghiên cứu này sử dụng 2 thông số để đánh giá mức độ phù hợp của các mơ hình với q trình giải phóng dược chất thực nghiệm từ dạng bào chế là: Tiêu chuẩn thông tin Akaike (AIC – Akaike’s information criterion) và giá trị R2 hiệu chỉnh (R2hc) [18], [22]:
Tiêu chuẩn thông tin Akaike:
Trong đó: yi và yi’ lần lượt là tỷ lệ dược chất giải phóng tại thời điểm i theo thực nghiệm và theo dự đốn của mơ hình (%), wi là trọng số, p là số lượng các tham số mơ hình, n là số điểm lấy mẫu. Mơ hình có giá trị AIC nhỏ nhất là mơ hình phù hợp nhất để mơ tả q trình giải phóng dược chất từ dạng bào chế.
Giá trị R2 hiệu chỉnh:
Trong đó: n là số điểm lấy mẫu, p là số tham số của mơ hình, Ci và Ci’ lần lượt là tỷ lệ dược chất giải phóng tại thời điểm i theo thực nghiệm và theo dự đốn của mơ hình (%), C̅ là trung bình của tỷ lệ dược chất giải phóng thực nghiệm (%). Mơ hình có giá trị R2hc lớn nhất là mơ hình phù hợp nhất để mơ tả q trình giải phóng dược chất từ dạng
bào chế.
Giá trị AIC và R2hc được tính tốn bằng chương trình DDSolver 1.0 trong phần
mềm Excel [48].
2.3.4. Phương pháp xử lý số liệu và trình bày kết quả
Các số liệu thống kê được tính tốn bằng phần mềm Excel 2016. Các kết quả được trình bày dưới dạng giá trị trung bình kèm độ lệch chuẩn (TB ± SD) và n là số lần lặp lại thí nghiệm.
22
CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TIỀN CÔNG THỨC
3.1.1. Kết quả xây dựng và thẩm định một số chỉ tiêu của phương pháp định lượng dược chất trong viên nén diltiazem hydroclorid 60 mg
Tiến hành thẩm định một số chỉ tiêu của phương pháp định lượng theo phương pháp được mô tả ở trong phụ lục 1. Kết quả thẩm định được tóm tắt ở bảng 3.1.