2. THỰC NGHIỆM
2.5.Phương pháp thử hoạt tính nano Zn với nấm hồng (phương pháp khuếch
tán thạch)
Nguyên vật liệu
- Nano Zn (ZnC2O4:PVP 1:6, PVP 1.000.000 g/mol, nhiệt độ 220oC)
- Giống nấm hồng Corticium Salmonicolor, Phòng Thí Nghiệm Hoá Sinh, Viện Khoa Học Vật Liệu Ứng Dụng
- Môi trường PDA: Dịch chiết từ 200 g khoai tây, 20 g Dextrose, 0,02 g streptomycin, 15 Agar và cho nước đủ 1000 ml. Tiệt trùng bằng nồi autoclave trong 30 phút ở 1210C.
N2
Nung tại nhiệt độ 350oC khí trơ (N2) Bảo quản mẫu trong môi trường khí trơ Phân tích nhiễu xạ tia X Phân tích nhiễu xạ tia X Dung dịch nano kẽm trong glycerin Nano Zn
46
Thực nghiệm
Chuẩn bị giống nấm để thí nghiệm
Từ ống nghiệm nấm hồng được giữ trên thạch nghiêng, nấm hồng được nuôi cấy trên các đĩa petri chứa môi trường PDA. Cấy tơ nấm một điểm ở giữa thạch, để nhiệt độ phòng cho nấm mọc lan tỏa trên đĩa thạch. Sau 1 tuần nấm mọc gần hết đĩa Pha chất thử
Khuếch tán nano Zn với những nồng độ cần khảo sát sau: 5ppm, 10ppm, 20ppm, 30ppm và 40ppm vào môi trường PDA khoảng 450C sau khi được tiệt trùng bằng nồi autoclave trong 30 phút ở 1210C. Mẫu đối chứng nano Zn được thay thế bằng nước cất. Mỗi nồng độ thực hiện trên 2 đĩa petri, thí nghiệm lặp lại 3 lần
Cấy nấm vào tâm đĩa petri sau khi thạch đã đông cứng hoàn toàn. Quan sát và đo đường kính tơ nấm từng đĩa petri (Đo 2 đường chéo và tính trung bình) sau 1, 2, 4, 6 ngày cấy. Tính đường kính trung bình theo công thức sau:
DKtb = (DK1 + DK2)/2
Trong đó: DK1: Đường kính tơ nấm ở đĩa 1 DK2: Đường kính tơ nấm ở đĩa 2 % ức chế = (Dka – DKb)/Dka x 100
Trong đó: DKa:Đường kính tơ nấm ở đĩa đối chứng DKb: Đường kính tơ nấm ở đĩa thử
Từ % ức chế sinh trưởng và nồng độ thí nghiệm, tiến hành xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính dạng y = ax + b. Từ đó suy ra IC50 (inhibition concentration, nồng độ ức chế 50% tăng trưởng của nấm)
47