Độ nhạy của phản ứng trung hịa so sánh với phản ứng ELISA: 87,46% Độ đặc hiệu của phản ứng trung hịa so sánh với phản ứng ELISA: 98,18%
Ghi chú: (*) mẫu huyết thanh ở độ pha lỗng > 1/20 làm giảm 90% số tế bào nhiễm PEDV giảm so đối chứng âm được xác định là cĩ kháng thể trung hịa (Clement và cs., 2016). Trong nghiên cứu này lấy giá
Bảng 4.3 cho biết phần lớn các mẫu (125/198 mẫu dương tính, 54/198 âm tính) đều cĩ kết quả phát hiện giống nhau giữa hai phương pháp. Dựa vào cơng thức tính, độ nhạy của phản ứng trung hịa so với phản ứng ELISA cơ sở là 87,46% và độ đặc hiệu là 98,18 %. Sự khơng phù hợp hồn tồn giữa kết quả của phản ứng trung hịa và phản ứng ELISA đã được chỉ ra ở một vài nghiên cứu tương tự (Oh & cs., 2005; Okda & cs., 2015). Đặc điểm này cũng quan sát được
ở nghiên cứu này: cĩ 18 mẫu được xác định là âm tính giả (kết quả phát hiện kháng thể trung hịa so với kết quả phát hiện kháng thể lớp IgG tổng số bằng ELISA). Sự khác biệt trên cĩ thể do một số nguyên nhân. Thứ nhất, phản ứng trung hịa phát hiện kháng thể làm mất hoạt tính nhiễm của virus (kháng thể trung hịa). Trong khi đĩ, protein bề mặt của virus (ví dụ như protein S) lại bao gồm các epitope kích thích sản sinh kháng thể trung hịa và kháng thể khơng cĩ khả năng trung hịa virus (Song & cs., 2016). Ngồi ra, thời điểm xuất hiện kháng thể trung hịa và đạt hiệu giá cao nhất thường chậm hơn so với kháng thể khơng cĩ tác dụng trung hịa virus (Okda & cs., 2015; Thomas & cs., 2015).
4.3.2. Độ nhạy, độ đặc hiệu của phản ứng trung hịa trên nền mẫu chuẩn QC
Thẩm định phương pháp là nhu cầu thiết yếu khi triển khai áp dụng một phương pháp xét nghiệm mới. Trong thí nghiệm này, mẫu huyết thanh chuẩn phịng thí nghiệm (gọi là mẫu chuẩn QC) được dùng làm mẫu nền, mẫu chuẩn QC được pha lỗng ở các các độ pha lỗng từ 1/2 đến 1/512, mỗi độ pha lỗng lặp lại 8 lần và thực hiện phản ứng ELISA kết quả được ghi lại Hình 4.9
Phản ứng ELISA trên nền mẫu chuẩn QC từ huyết thanh nguyên tới độ pha lỗng 1/512, màu vàng trong giếng phản ứng biểu hiện dương tính, màu trắng biểu hiện âm tính. Kết quả dựa vào giá trị ngưỡng OD450 ≥ 0,225 để kết luận mẫu dương tính.
Theo ISO-17025 việc thẩm định một quy trình được thực hiện trên mẫu điển hình, hoặc so sánh kết quả với 1 phương pháp khác tin cậy. Nền mẫu được pha lỗng thành các nồng độ khác nhau (nồng độ thấp, trung bình, cao) hoặc trong khoảng làm việc, mỗi nồng độ làm lặp lại ít nhất 6 lần, từ đĩ tính độ nhạy, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính. Kết quả được trình bày Bảng 4.4.