Hình 4.11 chỉ ra huyết thanh thỏ tối miễn dịch mỗi chủng PEDV được khảo sát huyết thanh định kỳ 7 ngày 1 lần, kết quả huyết thanh thỏ trước khi miễn dịch (ký hiệu D0) và sau miễn dịch 7 ngày (ký hiệu D7) kháng thể trung hịa âm tính. Kháng thể trung hịa bắt đầu xuất hiện từ D14 sau miễn dịch, huyết thanh thỏ D14, D21, D28, D35, D42 cả 5 chủng PEDV đều sinh kháng thể trung hịa, khơng cĩ sự khác nhau hiệu giá kháng thể giữa các chủng (p=0,075>0,05). Trong khi thỏ đối chứng cho kết quả âm tính. Đề cập thời gian xuất hiện kháng thể trung hịa trên lợn nhĩm tác giả (Diel & cs., 2016) cho biết kháng thể trung hịa bắt đầu xuất hiện trong huyết thanh lợn từ ngày thứ 7 đến ngày thứ 14 sau khi nhiễm PEDV và cao nhất 21 ngày, kéo dài tới 6 tháng. Trong thí nghiệm này, chúng tơi đã tạo được huyết thanh thỏ kháng mỗi chủng PEDV chứa kháng thể trung hịa PEDV, là nguyên liệu đánh giá khả năng kháng chéo giữa các chủng.
4.4.2. Đánh giá khả năng trung hịa chéo giữa các chủng PEDV
4.4.2.1. Khả năng trung hịa các chủng virus của huyết thanh kháng PEDV 0118
Các tài liệu mơ tả trước đây (Rweyemamu, 1978; Long, 2016; OIE, 2009) cho biết: phương pháp tin cậy nhất để đánh giá một chủng virus cĩ khả năng miễn dịch chéo với chủng virus khác là chỉ số miễn dịch bảo hộ chéo trên bản động vật, điều đĩ sẽ trả lời chính xác hiệu lực và tính kháng chéo tồn diện nhất. Nhưng liên quan an tồn sinh học và các vấn đề khác, nên việc sử dụng phương pháp huyết thanh học thay thế, được thực hiện trong phịng thí nghiệm (in vitro) được tổ chức OIE khuyến cáo nên dùng. Hình 4.12 (trang bên) mơ tả khả năng trung hịa chéo của huyết thanh thỏ kháng PEDV 0118 với các dịng PEDV thuộc genogroup G1 và genogroup G2.
Hình 4.12 cho thấy, bệnh tích tế bào (CPE - cytopathic effects) được quan sát qua nhuộm miễn dịch, CPE đặc trưng bởi tế bào nhiễm virus hợp nhất màng nguyên sinh chất thành cụm tế bào đa nhân hay gọi là thể hợp bào. Trong thí nghiệm này thấy rằng với cách đánh giá phản ứng trung hịa như đã thiết lập (phản ứng dương tính khi số cụm CPE giảm hơn 90% so với đối chứng ở mỗi nồng độ pha lỗng huyết thanh) thì hiệu giá kháng thể trung hịa của chủng PEDV 0118 được xác định là 256 khi phản ứng với các chủng thuộc nhĩm G2 (đồng nhĩm) trong khi phản ứng chéo với PED từ vắc xin (thuộc nhĩm G1) thấp hơn 2 lần.
Ghi chú: dương tính (+) , âm tính (-); HT: huyết thanh; PEDV VX: Virus PED cĩ nguồn gốc từ vắc xin nhược độc thuộc nhĩm G1; VNT- virus neutralizing test- hiệu giá kháng thể trung hịa -hiệu giá kháng thể trung hịa được xác định dương tính khi cĩ số tế bào nhiễm virus giảm hơn 90% so đối chứng âm.