Hình ảnh trên cho thấy, bệnh tích tế bào (CPE) của các chủng PEDV phân lập biểu hiện ở đời cấy chuyển thứ 6 (P6) nồng độ pha lỗng virus 10-3. Kháng nguyên virus được quan sát rõ ràng bởi virus khu trú trong nguyên sinh chất của tế bào và bắt màu đỏ của cơ chất AEC. Đáng lưu ý, các tế bào nhiễm virus đơn lẻ chiếm đa số, tế bào đa nhân - thể hợp bào ít ở đời cấy chuyển thấp (P6). Khơng cĩ sự khác biệt về hình ảnh tế bào nhiễm virus giữa các chủng PEDV phân lập thực địa. Tuy nhiên cĩ sự khác biệt khi so sánh bệnh tích tế bào với chủng virus nhược độc (đối chứng dương). Bệnh tích tế bào của virus nhược độc xuất hiện các cụm tế bào đa nhân, thể hợp bào hàng trăm nhân chiếm đa số, chúng phát triển tạo thành vịng trịn khép kín. Trong nghiên cứu này, biều hiện bệnh tích PEDV thực địa phù hợp với mổ tả trước đây của nhĩm tác giả (Hofmann & Wyler, 1988): sau 24 giờ gây nhiễm virus trên tế bào Vero, tế bào được nhuộm miễn dịch huỳnh quang, protein đặc hiệu của PEDV trong nguyên sinh chất của tế bào, ở các đời phân lập PEDV đầu tiên xuất hiện các tế bào đơn lẻ nhiễm virus hoặc cụm đa nhân (10 nhân) cĩ nguyên sinh chất phát quang, sau khi cấy chuyển thích nghi thể hợp bào chứa hàng trăm nhân sẽ chiếm ưu thế.
Bảng 4.1. Hiệu giá bốn chủng PEDV phân lập thực địa
TT
1 2 3 4
Kết quả trên cho thấy, khảo sát hiệu giá virus ở đời P4 và đời P6 cả bốn chủng PEDV hiệu giá virus đều tăng sau khi tiếp đời, điều đĩ cho biết virus đang thích nghi trên tế bào Vero. Bằng phản ứng nhuộm miễn dịch gắn enzym peroxidase (IPMA) xác định được virus cĩ mặt trong tế bào ở mỗi giếng chuẩn
Tham khảo một số báo cáo trước đây, nhĩm tác giả (Nguyễn Thị Hoa & cs., 2018) phân lập PEDV sau 4 đời cấy chuyển một số chủng đã đạt được hiệu giá 107,3TCID50/ml. Tuy nhiên, theo nhĩm tác giả (Kusanagi & cs., 1992) cho biết cấy chuyển mù một số đời sau đĩ xác nhận sự cĩ mặt của PEDV trong tế bào. Bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang, kết quả hiệu giá đạt được 105,5 TCID50/ml. Chúng tơi nhận định rằng, sự chênh hiệu giá virus mỗi phịng thí nghiệm cĩ thể xảy ra bởi độ nhạy phương pháp đánh giá hoặc do chủng virus cĩ sự thích nghi khác nhau.
Kết quả nghiên cứu đã xác định được hiệu giá virus bằng phương pháp nhuộm hĩa miễn dịch, kết quả được sử dụng để định liều virus trong phản ứng trung hịa với liều virus phản ứng 100TCID50/100µl. Thêm vào đĩ hình ảnh CPE được bộc lộ rõ qua phản ứng IPMA khơng những là để đánh giá chính xác phản ứng chuẩn độ virus mà cịn là cách để đánh giá hiệu giá kháng thể trung hịa ở nội dung tiếp theo.
4.1.2. Giám định tính thuần khiết của chủng PEDV
Các chủng virus phân lập ở đời cấy chuyển P6 được khẳng định sự cĩ mặt của PEDV và cĩ hay khơng sự đồng nhiễm của Rotavirus và TGEV. Phương pháp thực hiện là RT- PCR với cặp mồi đặc hiệu theo tài liệu đã đề cập (Song & cs., 2006). Kết quả trình bày ở Hình 4.2, Hình 4.3.
Ghi chú: MC là thang chuẩn ADN 100bp, vx: vắc xin, dương tính ký hiệu +, âm tính ký hiệu -