Tiến hành các phản ứng sinh hóa trong hệ thống định danh IDS14 GNR® (Nam Khoa, Việt Nam). Bộ hóa chất bao gồm:
Đĩa giấy oxidase (OXI): thực hiện thử nghiệm oxidase - Nhỏ một giọt nước muối sinh lý vô trùng lên lame.
- Dùng kẹp giấy lấy một đĩa giấy oxidase nhúng vào giọt nước muối sinh lý cho vừa đủ ướt và đặt lên lame.
- Dùng vòng cấy vô trùng lấy khúm khuẩn quệt lên đĩa giấy oxidase.
- Đọc kết quả sau 10 giây: phản ứng dương tính khi đĩa giấy oxidase xuất hiện màu tím đen; âm tính khi đĩa giấy oxidase không có màu tím đen.
Bảng nhựa có 10 giếng chứa 10 loại đĩa giấy sinh hóa
- Dùng tăm bông vô trùng lấy khúm khuẩn cho vào nước muối sinh lý vô trùng để làm thành huyền dịch có độ đục McFarland 2,0.
- Cho vào mỗi giếng 200 µl huyền dịch, đậy nắp. - Ủ 35-37oC/12-24 giờ.
VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP - Đọc kết quả theo bảng 2.1.
Môi trường Lysin decarboxylase (LDC) thực hiện thử nghiệm Lysin decarboxylase
- Dùng pipet pasteur hay micropiper lấy 2-3 giọt huyền phù cho vào môi trường LDC, xuyên pha lớp parafilm.
- Ủ 35-37oC/12-24 giờ.
- Đọc kết quả: dương tính khi môi trường có vi khuẩn mọc và có màu tím ;
âm tính khi môi trường có màu vàng hoặc có vàng tím.
Môi trường mobility (MOB) thực hiện thử nghiệm di động
- Dùng que cấy vô trùng lấy khúm khuẩn và cắm kim cấy cách 2/3 đáy ampule chứa môi trường MOB, rút que cấy theo chiều thẳng đứng, cấy ria trên bề mặt thạch.
- Ủ 35-37oC/12-24 giờ
- Đọc kết quả: vi khuẩn có khả năng di động khi màu đỏ lan rộng ra khỏi
VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP Bảng 2.1 Hướng dẫn đọc kết quả các phản ứng sinh hóa trong bộ IDS14 GNR®
Kết quả thử nghiệm Giếng số Ký hiệu Thử nghiệm sinh hóa Thuốc thử thêm vào (+) (-)
1 GLU Lên men
Glucose Vàng Tím 2 NIT Khử Nitrate thành Nitrite Tìm Nitrite Đỏ/hồng (xuất hiện trong vòng 3 phút) Vàng nhạt
3 ONPG Thủy giải
ONPG Vàng nhạt
4 URE Sinh Urease Đỏ cánh sen Vàng/đỏ
nhạt 5 PAD Phenyl Alanine Deaminase FeCl3
Xanh lá (xuất hiện ngay khi bỏ thuốc thử,
để lâu sẽ mất màu) Vàng nhạt 6 CIT Sử dụng Citrate Xanh biển (chỉ cần có ánh xanh biển) Xanh lá/vàng
7 ESC Thủy giải Esculine
Đen (có màu từ đen nhạt qua đen đậm
Không đen
H2S Sinh H2S
Đen (xuất hiện đáy giếng, mất màu khi nhỏ Kovac vào)
Không đen 8
IND Sinh indol Kovac
Đỏ bề mặt (đọc sau 1 phút, không đọc sau 10 phút) Vàng bề mặt 9 VP Voges- Proskauer KOH + Napthtol
Đỏ (xuất hiện sau 5 phút, không đọc kết
quả sau 2h)
Vàng nhạt
10 MLO Sử dụng
malonate Xanh biển
Xanh lá/vàng Đọc kết quả định danh: Hệ thống định danh phân chia các thử nghiệm sinh hóa theo nhóm như trong hình 2.1.
VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP Hình 2.1 Hướng dẫn định danh vi khuẩn Gram âm dễ mọc nhờ bộ hóa chất
IDS14 GNR®
Sau khi có kết quả các phản ứng sinh hóa (theo hướng dẫn ở bảng 2.1) cùng số điểm tương ứng với từng nhóm (hình 2.1), ta có được mã định danh. Từ đó ta có thể tra cứu hệ thống mã định danh của IDS14 GNR ®để xác định vi khuẩn cần định danh.