2 1 1 Dược liệu nghiên cứu
Dược liệu nghiên cứu là phần trên mặt đất của cây Hương nhu tía (Ocimum
sanctum L ) được thu hái tại Hà Nội, Việt Nam vào tháng 6/2016 (mùa hoa quả) và
được xác định tên khoa học bởi Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu Mẫu dược liệu được sấy khơ và đo độ ẩm Lưu mẫu tại Khoa Tài nguyên Dược liệu – Viện dược liệu (số tiêu bản: NIMM-16474B) (Phụ lục 1)
2 1 2 Động vật thí nghiệm
- Chuột nhắt trắng Swiss albino 7-8 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 28-30g (với mơ hình chuột loại bỏ thùy khứu giác) và 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 23-25g (với mơ hình chuột gây stress nhẹ trường diễn khơng dự đốn trước), giống đực, khỏe mạnh được cung cấp bởi Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương
- Chuột sau khi mua về được làm quen với phịng chăn nuơi ít nhất 1 tuần trước khi bắt đầu thí nghiệm, trong điều kiện nhiệt độ 25 ± 1oC, độ ẩm 65-75%, độ thơng khí và ánh sáng thích hợp, chu kì sáng tối được duy trì 12 giờ (pha sáng: 7:00 – 19:00), được nuơi bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp, thức ăn và nước uống tự do theo nhu cầu của chuột Các thử nghiệm hành vi được tiến hành trong chu kỳ sáng từ 9:00 – 18:00
- Tất cả các thí nghiệm đều được thực hiện theo Hướng dẫn Chăm sĩc và sử
dụng Động vật (NIH xuất bản số 85–23, sửa đổi năm 1985) và đã được phê duyệt bởi Ủy ban Chăm sĩc và sử dụng động vật của Viện Dược liệu
2 1 3 Hĩa chất, thuốc thử
Bảng 2 1 Một số hĩa chất, thuốc thử chính sử dụng trong luận án
STT Hĩa chất Nguồn gốc
1 Imipramin Sigma St louis, MO, USA
2 Donepezil Tokyo C Industry Co , Ltd, Japan
3 Acid ursolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify Phytochemicals, Trung Quốc 4 Acid oleanolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify
Phytochemicals, Trung Quốc
5 α-methyl-p-tyrosin (AMPT) Sigma St louis, MO, USA
6 ρ-chlorophenylalanin (PCPA) Sigma St louis, MO, USA
7 dimethyl sulfoxid (DMSO) Wako, Nhật Bản
8 acid 5,5´-dithiobis-2-nitrobenzoic Sigma, St Louis, MO, USA
9 acetylthiocholin iodid Nacalai Tesque, Kyoto, Nhật Bản
10 Natri pentobarbital Wako, Nhật Bản
11 Dung dịch hoạt hĩa kháng nguyên (Target retrieval solution)
Dako, Nhật Bản
12 Kháng thể anti- DCX rabbit Abcam, Anh
13 Kháng thể gắn HRP anti-rabbit IgG Cell Signaling Technology, Mỹ
14 Kháng thể anti-ChAT goat Millipore, CA, USA
15 Kháng thể bovin anti-goat IgG Santa Cruz Bio Inc , Dallas, TX 16 Kháng thể anti-VEGF rabbit Santa Cruz Bio Inc , Dallas, TX 17 Kháng thể anti β-actin rabbit Thermo scientific
18 Target Retrieval Solution Dako, Japan
19 Sepazol Nacalai Tesque, Nhật Bản
20 Gel SDS-PAGE
21 Triton-X-100 Sigma, St Louis, MO, USA
22 Các dung mơi chiết xuất đạt tiêu chuẩn cơng nghiệp
23 Các dung mơi, hệ đệm đạt tiêu chuẩn phân tích
24 Các hĩa chất, dung mơi khác đạt tiêu chuẩn dược dụng
2 1 4 Trang thiết bị, dụng cụ
Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án được trình bày ở Bảng 2 2
Bảng 2 2 Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án
STT Thiết bị Nguồn gốc
1 Hệ thống định vị hộp sọ chuột Muromachi, Kilai Co , Ltd, Nhật Bản
2 Vật thể O1, O2, O3 Tự thiết kế theo cấu trúc của
hãng Ugo Basile (Ý) 3 Mê lộ chữ Y cải tiến
4 Mệ lộ nước Morris Tự thiết kế
5 Bể nước hình trụ Tự thiết kế
6 Thanh treo đuơi chuột Tự thiết kế
7 Mơi trường mở Plexiglas gắn tế bào quang điện Digiscan
Omnitech Electronics, Columbus, OH
8 Phần mềm phân tích kết quả ANY MAZE, Stoeling, Mỹ
9 Phần mềm Image J phiên bản 1 41; NIH, MD,
USA
10 Hệ thống StepOne Real-time PCR System® Applied BioSystem, USA
11 o
Tủ âm 80 C Sanyo Nhật Bản
12 Máy đọc ELISA Thermo Labsystem Thermo, Đức
13 Kính hiển vi Olympus PROVIS® Olympus Inc , Tokyo, Nhật Bản
14 Máy Amersham ™ ECL ™ Prime GE Healthcare, Buckinghamshire, UK
15 Máy quang phổ UV-VIS HumaReader HS; Human
Diagnostics, Wiesbaden, Đức
16 Bộ điện di omniPAGE Cleaver Scientific – Anh
17 Bộ chuyển màng Cleaver Scientific – Anh
18 Máy li tâm lạnh Satorius
19 Thiết bị nghiền đồng thể IKA
2 1 5 Địa điểm nghiên cứu
- Khoa Dược lý – Sinh hĩa, Viện Dược liệu