L ỜI NÓI ĐẦU
3.3.Xác định type của vi khuẩn P.multocida
Carter (1955)[7], sử dụng phương pháp ngưng kết hồng cầu gián tiếp đãđịnh type vi khuẩn P. multocida gồm type A, type B, type D, type E (riêng type F thì do Rimler và Rhoades, 1987). Tuy nhiên, ngày nay với sự phát triển
của khoa học kỹ thuật, chúng tôi tiến hành định type vi khuẩn bằng kỹ thuật
PCR cho kết quả nhanh, độ đặc hiệu cao, các thao tác đơn giản.
Tất cả các chủng đều được tiến hành chạy PCR để định type, Kết quả
thể hiện trong bảng 4:
Kết quả của chúng tôi ở bảng 4 cho thấy:
Cặp mồi CAPA-FWD, CAPA-REV được thiết kế để khuếch đại đoạn gene đặc hiệu cho type A của vi khuẩn P. multocida (Kirsty. M.
Townsend và cộng sự, 2001). Theo kết quả điện di, có 33,33% chủng
cho hình ảnh đặc hiệu của phản ứng PCR và khuếch đại đoạn gene
khoảng 1044 bp, kết quả xác định được phù hợp với đoạn gene mà Townsend thiết kế. Các chủng này đều được phân lập từ gà mắc bệnh
tụ huyết trùng.
67,67% chủng cho hình ảnh đặc hiệu PCR với các chủng P. multocida
thuộc type B, gây bệnh tụ huyết trùng ở trâu, bò. Sản phẩm PCR khi
dùng cặp mồi CAPB-FWD, CAPB-REV khoảng 760 bp, phù hợp với
chiều dài đoạn gene mà Townsend thiết kế. Các chủng này đều được
phân lập từ trâu, bò, dê, cừu và lợn mắc bệnh tụ huyết trùng.
Kết quả định type bằng kỹ thuật PCR cũng phù hợp với kết quả sinh
hóa: các chủng phân lập từ gà cho vỏ nhầy, ướt đều cho hìnhảnh PCR đặc hiệu thuộc type A.
Không có chủng vi khuẩn cho hìnhảnh đặc hiệu PCR của P. multocida
type D.
Bảng3.3: Kết quả định type vi khuẩnP. multocida bằng kỹ thuật PCR
STT Type vi khuẩn Tổng số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Tỷ lệ dương tính 1 A 12 4 33,33% 2 B 12 8 67,67% 3 D 12 0 0%
Hình 3.6: Kết quả đọc điện di gene mã hóa cho type A, type B của vi khuẩnP. multocida.
Nhận xét:
Theo nhiều tác giả, các type huyết thanh của vi khuẩn khác nhau gây
bệnh khác nhau ở động vật: Type A thường gây bệnh tụ huyết trùng ở gà và viêm phổi ở lợn, trâu, bò (đặc biệt là bê nghé); type B thường gây bệnh tụ
huyết trùngở trâu, bò, dê, cừu, lợn. Và type D gây bệnh viêm teo mũi ở lợn.
N M P1 P2 1 2 3 4 5 6 7
1044bp 760bp
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ