L ỜI NÓI ĐẦU
1.4.2.1.Nguyên lý của phản ứng PCR
Theo Hồ Huỳnh Thùy Dương (1997)[ 4], PCR là một phản ứng phụ
thuộc nhiệt độ, sử dụng đặc điểm của quá trình sao chép DNA (Acid deoxyribonucleic) với sự tham gia của một loại Enzym DNA - polymerase chịu nhiệt, có hai đoạn ngắn DNA làm mồi và dùng các đoạn DNA mạch đơn làm khuôn để tổng hợp lên sợi mới theo nguyên tắc bổ sung. Vì vậy, để khởi động quá trình tổng hợp DNA cần cung cấp đoạn mồi Oligonucleotit ( có độ
dài từ 6 đến 30 nucleotit). Đoạn này gắn kết với DNA khuôn tại điểm khởi đầu sao chép và được Enzym DNA polymerase điều khiển để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù. Các sợi DNA mạch đơn làm khuôn được tạo ra theo cách đơn giản là nâng nhiệt độ lên đến 900 C ( 920C đến 980C) cho mạch xoắn kép
DNA bung ra thành 2 sợi đơn.
Cả hai sợi DNA đều được dùng làm khuôn cho quá trình tổng hợp nếu các đoạn mồi ( Primer) được cung cấp để bám vào vị trí tương ứng cho cả hai
sợi. Trong kỹ thuật PCR, các đoạn mồi được chọn nằm ở hai đầu đoạn DNA
của mỗi đoạn mồi và kéo dài về phía đoạn mồi nằm trên sợi kia, sao cho sản
phẩm có độ dài giới hạn giữa hai đoạn mồi này. Độ dài sản phẩm PCR có thể vài trăm đến vài ngàn, thậm chí hàng chục ngàn cặp nucleotit.
Như vậy, sau mỗi chu ky các điểm bám cho các đoạn mồi lại xuất hiện
trên mỗi sợi DNA mới tổng hợp. Hỗn hợp phản ứng lại được nâng nhiệt độ
lên thích hợp sao cho các sợi ban đầu tách khỏi sợi mới được tổng hợp, các
sợi này sau đó cònđược dùng tiếp cho chu kỳ tiếp theo bao gồm các bước gắn đoạn mồi, tổng hợp DNA và tách rời các đoạn.
Kết quả cuối cùng của phản ứng PCR là sau n chu kỳ của phản ứng,
tính theo lý thuyết ta sẽ có 2n bản sao các phân tử DNA mạch kép nằm giữa hai đoạn mồi. Đó là một đặc điểm quan trọng của kỹ thuật PCR, dẫn đến kết
quả là một đoạn DNA định trược được “nhân lên” với một lượng rất lớn [6].